构建DNA甲基化文库的方法及其应用技术

本发明专利技术涉及基因测序领域，具体涉及一种构建DNA甲基化文库的方法及其应用。所述方法包括：对DNA样本进行重亚硫酸盐转化处理，以便获得经过重硫酸盐转化后的单链DNA分子；通过线性扩增，在所述单链DNA分子的两端分别连接上第一接头序列和第二接头序列，以便获得经接头序列连接的DNA分子；利用所述经接头序列连接的DNA分子构建DNA甲基化文库。利用本发明专利技术的文库进行测序，分析，可以实现对少量DNA进行全基因组甲基化检测，相比以往技术，覆盖的范围更广更全面，而且还具有实验操作简单，周期短的优点。

Construction of DNA methylation library and its application

【技术实现步骤摘要】
构建DNA甲基化文库的方法及其应用
本专利技术涉及基因测序领域，具体涉及一种构建DNA甲基化文库的方法及其应用，尤其涉及一种构建DNA甲基化文库的方法，DNA甲基化检测方法及DNA甲基化检测试剂盒及其用途。
技术介绍
循环肿瘤DNA(circulatingtumorDNA，ctDNA)指通过肿瘤细胞坏死，细胞凋亡释放出的DNA进入血浆，并降解在循环血中的机体内源性DNA。循环核酸最早由Mandel和Metais于1947年发现，但由于缺乏高灵敏性和高特异性的实验方法，导致有关血中游离DNA与疾病相关性的研究在较长时期内进展缓慢。直到有效分离游离DNA技术的出现，特殊荧光染料与PCR技术相结合的检测技术的应用，使这一领域的研究在最近二十多年得到了较迅速发展。自发现血中游离DNA可含肿瘤细胞DNA相同基因突变后，应用分子生物学手段对循环游离核酸的研究兴趣日益增加，血中游离DNA在疾病的早期诊断、预后、监测等方面具有重要潜在价值。与组织活检相比，游离DNA(又称无细胞DNA，cfDNA)测序具有一些明显的优势。首先，与肿瘤活组织检查相比，无论本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种构建DNA甲基化文库的方法，其特征在于，包括：/n对DNA样本进行重亚硫酸盐转化处理，以便获得经过重硫酸盐转化后的单链DNA分子；/n通过线性扩增，在所述单链DNA分子的两端分别连接上第一接头序列和第二接头序列，以便获得经接头序列连接的DNA分子；/n利用所述经接头序列连接的DNA分子构建DNA甲基化文库。/n

【技术特征摘要】
1.一种构建DNA甲基化文库的方法，其特征在于，包括：
对DNA样本进行重亚硫酸盐转化处理，以便获得经过重硫酸盐转化后的单链DNA分子；
通过线性扩增，在所述单链DNA分子的两端分别连接上第一接头序列和第二接头序列，以便获得经接头序列连接的DNA分子；
利用所述经接头序列连接的DNA分子构建DNA甲基化文库。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一接头序列和所述第二接头序列中均含有分子标签序列。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述分子标签序列为8～12nt随机核酸序列；
任选地，所述分子标签序列为8～10nt随机核酸序列；
任选地，所述第一接头序列和所述第二接头序列进一步含有PCR扩增引物互补序列。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进一步包括：
对所述单链DNA分子进行第一线性扩增，以便在所述单链DNA分子的一端连接上所述第一接头序列，获得连接有第一接头序列的DNA分子；
对所述连接有第一接头序列的DNA分子进行第二线性扩增，以便在所述连接有第一接头序列的DNA分子的另一端连接上所述第二接头序列，获得所述经接头序列连接的DNA分子。


5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，分别利用Klenow片段以及phi29DNA聚合酶进行所述第一线性扩增和所述第二线性扩增；
任选地，将所述单链DNA分子和所述第一接头序列混合，在90～100摄氏度下反应2～5分钟，在30～35摄氏度下反应5～10分钟，然后加入Klenow片段和phi29DNA聚合酶，在30～35摄氏度下反应30～60分钟，得到连接有第一接头序列的DNA分子；
任选地，将所述连接有第一接头序列的DNA分子和所述第二接头序列混合，在90～100摄氏度下反应2～5分钟，在30～35摄氏度下反应5～10分钟，然后加入Klenow片段和...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗慧娟，谢颖，易吉，于源，于竞，吴逵，李南南，陈小芳，
申请(专利权)人：深圳华大生命科学研究院，
类型：发明
国别省市：广东;44