本发明专利技术涉及生物医药领域，具体涉及一种硫酸化葡萄糖醛酸‑木‑鼠李聚糖的增强免疫功能的应用。该聚糖通过酸解浒苔获得，主要组成单糖包括葡糖醛酸(Glca)、木糖(Xyl)和鼠李糖(RHA)等。其制备方法：室温酸解—过滤—中和浓缩—乙醇沉淀—阴离子柱层析—水解—乙醇沉淀—Bio‑Gel P‑10 Gel柱层析—冷冻干燥。通过该方法制备的聚糖具有性能稳定、成本低廉、安全性高、药用价值大等特点，能够显著激活小鼠腹腔巨噬细胞释放一氧化氮。能够应用于制备免疫增强剂的药物及保健品。
Application of sulfated glucuronic acid xylan rhamnosan in enhancing immune function
【技术实现步骤摘要】
硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李聚糖的增强免疫功能的应用
：本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种海洋浒苔来源的硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李聚糖的增强免疫功能的应用。
技术介绍
：免疫是一种极其复杂的生理反应，它是机体免疫系统识别、排除异构分子,借以维持机体生理平衡和稳定的功能。机体依靠这种功能识别“自己”和“非己”成分,来对抗病原体、有毒化合物或辐照等病理性媒介引起的组织损伤和感染。这一过程涉及炎症介质、炎症相关的信号通路和炎症细胞因子的参与。海洋中蕴藏着丰富的生物资源,海洋水体的高盐、高压、缺氧、低(恒)温、低(无)光照及寡营养环境造就了海洋生物特殊的生长繁殖方式、适应机制，其中存在着大量复杂多样、结构新颖、活性独特的天然活性物质。海洋藻类作为独特生物活性物质的重要来源，可用于药物的新来源在医学领域有重大意义。浒苔(Enteromorphaprolifera)，是绿藻石莼科中的水生藻类植物，作为海域的天然海藻，产量极大。浒苔多糖是浒苔的关键活性成分，已被证实具有多种生物活性，如抗氧化、抗菌、抗高血脂、和调节葡萄糖代谢等。Kim等发现通过热水抽提获得的多糖具有免疫调节作用，但是其作用机制还不明确。因此本专利技术探求设计提供一种硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李聚糖的增强免疫功能的应用，通过对酸解获得的浒苔多糖，进一步降解并分离获得了分子量为17.3kD的硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李寡聚糖，该聚糖的结构组成与以往报道的浒苔多糖的结构均不一致，且该聚糖在免疫调节功能活性方面的研究还未见报道。
技术实现思路
：<br>本专利技术的目的在于克服现有技术所述的上述缺陷，寻求提供一种硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李聚糖的增强免疫功能的应用。为了实现上述目的，本专利技术涉及的一种硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李聚糖的增强免疫功能的应用，通过如下技术方案实现：S1、浒苔粗多糖提取：称取浒苔干品1000g，加入30L0.1MHCl在室温下提取4h制得提取液，然后将提取液经硅藻土过滤，中和后离心取上清，上清浓缩后用乙醇沉淀，测定粗多糖(EP)得率为20.1％；S2、DEAE-BioGelAgaroseFF离子柱层析粗多糖：取8g粗多糖(EP)经DEAE-BioGelAgaroseFF柱层析分级，不同浓度NaCl作为洗脱液，收集组分，得水洗组分(EP1)、0.3MNaCl组分(EP2)、1MNaCl组分(EP3)和2MNaCl组分(EP4)，收集各个组分，透析脱盐后，经浓缩和乙醇沉淀，得到各个分级组分；S3、硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李聚糖的制备：取1MNaCl组分(EP3)水解后，经Bio-GelP-10Gel层析分离(2.6×100cm)，0.5MNH4HCO3作为洗脱液，得到2个组分，即：高分子量组分(DEP1)和低分子量组分(DEP2)，透析脱盐后，减压浓缩，低温冻干，即得硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李聚糖(DEP2)。进一步的，本专利技术中透析脱盐所用透析袋的截留分子量为1kD；进一步的，本专利技术中硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李聚糖得分子量为17.3kD。进一步的，本专利技术中硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李聚糖能有效地激活小鼠腹腔巨噬细胞释放一氧化氮，激活炎症小体NLRP3通路，增强巨噬细胞的免疫调节能力。进一步的，本专利技术制备的硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李聚糖能够作为活性成份应用于制备免疫增强剂的药物及保健品。本专利技术与现有技术相比，取得的有益效果如下：以浒苔作为制备原料，原材料环保易得，同时制备工艺步骤简单，制备效率高。同时制备得到的目标产物能够有效激活炎症小体NLRP3通路。附图说明：图1为本专利技术涉及的硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李寡聚糖的制备方法原理示意图。图2为本专利技术涉及的硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李寡聚糖促进RAW264.7细胞NO的释放示意图。图3为本专利技术涉及的硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李寡聚糖对RAW264.7细胞NO的释放量呈浓度依赖性示意图。图4为本专利技术涉及的硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李寡聚糖对RAW264.7细胞NLRP3小体的激活作用示意图。具体实施方式：下面结合附图并通过实施例进行具体说明。本领域技术人员会知道，这些实施例是示例性的，而不是限制性的。这些实施例不会以任何方式限制本专利技术的范围。实施例1：本实施例涉及的一种硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李聚糖的增强免疫功能的应用通过如下技术方案实现：S1、浒苔粗多糖提取：称取浒苔干品1000g，加入30L0.1MHCl在室温下提取4h制得提取液，然后将提取液经硅藻土过滤，中和后离心取上清，上清浓缩后用乙醇沉淀。测定粗多糖(EP)得率为20.1％；S2、DEAE-BioGelAgaroseFF离子柱层析粗多糖：取8g粗多糖(EP)经DEAE-BioGelAgaroseFF柱层析分级，不同浓度NaCl作为洗脱液，收集组分，得水洗组分(EP1)、0.3MNaCl组分(EP2)、1MNaCl组分(EP3)和2MNaCl组分(EP4)，收集各个组分，透析除盐后，经浓缩和乙醇沉淀，得到分级多糖组分；S3、硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李聚糖的制备：取1MNaCl组分(EP3)水解后，经Bio-GelP-10Gel层析分离(2.6×100cm)，0.5MNH4HCO3作为洗脱液，得到2个组分，即：高分子量组分(DEP1)和低分子量组分(DEP2)，透析脱盐后，减压浓缩，低温冻干，即得硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李聚糖(DEP2)。进一步的，本实施例中透析脱盐所用透析袋的截留分子量为1kD；进一步的，本实施例中硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李聚糖的分子量为17.3kD。经检验，按照实施例1所述方法制备和分级提取的浒苔聚糖的各组分的得率、总糖含量、硫酸根含量、分子量如下表1所示；单糖组成如表2所示，本实施例得到的浒苔多糖主要单糖组成为葡萄糖醛酸(Glca)、木糖(Xyl)和鼠李糖(RHA)；按照主要单糖组成，该水溶性多糖属于2型多糖—葡糖醛酸，其组成结构主要包括有4-连接的鼠李糖(硫酸基位点位于C3或C2上)、4-连接的葡萄糖醛酸和4-连接的木吡喃糖残基；浒苔通过酸解获得的粗多糖(EP)经DEAE-BioGelAgaroseFF阴离子柱层析分级分离，得到4个组分：水洗组分(EP1)、0.3MNaCl组分(EP2)、1MNaCl组分(EP3)和2MNaCl组分(EP4)；EP1主要的单糖组成为：鼠李糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸、木糖，EP2主要的单糖组成为：鼠李糖、葡萄糖、葡萄糖醛酸、半乳糖、木糖，EP3和EP4主要的单糖组成为：鼠李糖、葡萄糖醛酸、木糖，EP3进一步水解后经乙醇沉淀，沉淀后复溶，经Bio-GelP-10Gel柱(2.6×100cm)进行分级分离，0.5MNH4HCO3作为洗脱液，得到高分子量组分DEP1和低分子量组分DEP2；本实施例涉及到的聚糖是低分子量组分DEP2，经浓缩，冷冻干燥后备用。表1硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李聚糖的化学组成表2本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李聚糖的增强免疫功能的应用，其特征在于具体操作步骤按照如下方式进行：/nS1、浒苔粗多糖提取：称取浒苔干品1000g，加入30L 0.1M HCl在室温下提取4h制得提取液，然后将提取液经硅藻土过滤，中和后离心取上清，上清浓缩后用乙醇沉淀，测定粗多糖(EP)得率为20.1％；/nS2、DEAE-Bio Gel Agarose FF离子柱层析粗多糖：取8g粗多糖(EP)经DEAE-Bio GelAgarose FF柱层析分级，不同浓度NaCl作为洗脱液，收集组分，得水洗组分(EP1)、0.3MNaCl组分(EP2)、1M NaCl组分(EP3)和2M NaCl组分(EP4)，收集各个组分，透析脱盐后，经浓缩和乙醇沉淀，得到各个分级组分；/nS3、硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李聚糖的制备：取1M NaCl组分(EP3)水解后，经Bio-GelP-10Gel层析分离(2.6×100cm)，0.5M NH
【技术特征摘要】
1.一种硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李聚糖的增强免疫功能的应用，其特征在于具体操作步骤按照如下方式进行：
S1、浒苔粗多糖提取：称取浒苔干品1000g，加入30L0.1MHCl在室温下提取4h制得提取液，然后将提取液经硅藻土过滤，中和后离心取上清，上清浓缩后用乙醇沉淀，测定粗多糖(EP)得率为20.1％；
S2、DEAE-BioGelAgaroseFF离子柱层析粗多糖：取8g粗多糖(EP)经DEAE-BioGelAgaroseFF柱层析分级，不同浓度NaCl作为洗脱液，收集组分，得水洗组分(EP1)、0.3MNaCl组分(EP2)、1MNaCl组分(EP3)和2MNaCl组分(EP4)，收集各个组分，透析脱盐后，经浓缩和乙醇沉淀，得到各个分级组分；
S3、硫酸化葡萄糖醛酸-木-鼠李聚糖的制备：取1MNaCl组分(EP3)水解后，经Bio-GelP-10Gel层析分离(2.6×100cm)，0.5MNH4HCO3作为洗脱液，得到2个组分，即：高分子量组分(DEP1)...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘英娟，郭云良，金维华，朱琳，王潇璐，王悦，武筱林，
申请(专利权)人：青岛大学附属医院，
类型：发明
国别省市：山东;37
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