盐酸药根碱在逆转胰腺癌细胞耐药性中的应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，尤其是一种盐酸药根碱在逆转胰腺癌细胞耐药性中的应用，在所述的盐酸药根碱的协同作用下，吉西他滨对胰腺癌细胞具有更为显著的抑制作用，逆转了胰腺癌耐药细胞对吉西他滨的耐药性。本发明专利技术通过对胰腺癌Panc‑1细胞和吉西他滨耐药Panc‑1细胞研究，发现在盐酸药根碱的作用下，胰腺癌细胞对吉西他滨的药敏性增强，低浓度的吉西他滨与盐酸药根碱联用可达到高浓度吉西他滨对耐药Panc‑1细胞的效果，并且随着盐酸药根碱浓度增加，与吉西他滨联用可有效抑制耐药Panc‑1细胞的生长，其生长抑制作用效果远高于单用吉西他滨，显著逆转了耐药Panc‑1细胞对吉西他滨的耐药性。

The application of doxycycline hydrochloride in reversing the drug resistance of pancreatic cancer cells

【技术实现步骤摘要】
盐酸药根碱在逆转胰腺癌细胞耐药性中的应用
本专利技术涉及生物医药
，尤其是盐酸药根碱在逆转胰腺癌细胞对吉西他滨耐药性中的应用。
技术介绍
胰腺癌是当前恶性程度比较高的难治性胃肠道肿瘤之一，其发病率在全球范围内呈现上升趋势，由于早期通常没有症状，且这些症状通常不具特异性，因此，患者发现时常常已进入晚期，死亡率几乎100％，5年生存率低于5％。胰腺癌早期的确诊率并不高。全球范围内胰腺癌的发病率和死亡率分别列恶性肿瘤的第12位和第7位。国家癌症中心数据显示，我国每年胰腺癌病例数约占恶性肿瘤病例数的2.42％，因其发病隐匿、进展快、疗效不佳、中位生存期短、预后极差，素有“癌症之王”的称号。目前，治疗胰腺癌的首选方法仍然是手术切除，但仅有15％-20％的患者确诊后能进行手术治疗，其余患者多采用化疗的方式。吉西他滨在胰腺癌的化疗中有着极其重要的地位，它作用于DNA合成期的肿瘤细胞，是胰腺癌的标准一线化疗方案。有报道指出，腹腔灌注吉西他滨能有效抑制肿瘤的生长，改善患者生活质量并减轻全身的毒性反应。尽管吉西他滨单药方案已经成为了胰腺癌的辅助治疗标准方案，但其化疗的有效率仅能达到25％，中位生存期仅为5-7个月，1年生存率约为20％，远远不能满足临床的需要。尤其是对无手术指征的局部晚期和转移性胰腺癌，其中位生存期的延长较传统的5-FU/LV而言也仅为数月。造成这种情况的主要原因是由于吉西他滨在临床上出现了越来越多的耐药现象。研究表明，吉西他滨的耐药主要与摄取转运过程障碍，胞浆内活化，分解酶异常以及DNA修复等有关。目前晚期胰腺癌以吉西他滨为基础的一线化疗方案的疗效已停滞于平台期，并且由于胰腺癌细胞具有特殊的生物学特性，除吉西他滨外对其他化疗不甚敏感，因此，吉西他滨是治疗胰腺癌的首选药物，但在胰腺癌的临床上，许多患者对吉西他滨有先天或后天获得的化疗抗性，这限制了吉西他滨在临床上的应用效果，也增加了治疗困难。因此，亟需改进现有对晚期胰腺癌的治疗策略，提高胰腺癌细胞对吉西他滨的药物敏感性是关键所在。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术提供一种盐酸药根碱在逆转胰腺癌细胞耐药性中的应用，本专利技术提供能够有效逆转胰腺癌耐药Panc-1细胞对吉西他滨的耐药性。本专利技术的技术方案为：一种盐酸药根碱在逆转胰腺癌细胞耐药性中的应用，在所述的盐酸药根碱的协同作用下，使用低剂量吉西他滨对胰腺癌细胞可以具有显著抑制作用，逆转了胰腺癌耐药细胞对吉西他滨的耐药性。优选的，所述的胰腺癌细胞为Panc-1细胞或吉西他滨耐药Panc-1细胞，将所述的吉西他滨联合盐酸药根碱作用于耐药Panc-1细胞，逆转了耐药Panc-1细胞对吉西他滨的耐药性。优选的，所述的盐酸药根碱联合吉西他滨对吉西他滨耐药Panc-1细胞的抑制作用是指提高耐药Panc-1的药物敏感性。优选的，所述的盐酸药根碱作用耐药胰腺癌Panc-1细胞时可降低Bcl-2蛋白水平。优选的，所述的盐酸药根碱可从中药三颗针中提取。优选的，联合用药过程中，所述盐酸药根碱的浓度为10～40μM。更优选地，联合用药过程中，所述盐酸药根碱的浓度为30μM。本专利技术的有益效果为：1、本专利技术的盐酸药根碱在炎症、流感等方面具有很好的药理学作用，能够有效的抑制神经氨酸酶的活性，从而抑制病毒在体内的繁殖，进而减轻或治愈患者；2、吉西他滨的活性代谢产物主要通过干扰DNA复制，造成DNA损伤并阻滞细胞周期进程达到抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡发生。3、本专利技术通过研究胰腺癌Panc-1细胞和吉西他滨耐药Panc-1细胞，发现盐酸药根碱可以有效逆转胰腺癌细胞对吉西他滨的耐药性，低浓度的吉西他滨与盐酸药根碱联用可达到高浓度吉西他滨单用时对耐药Panc-1细胞的效果。4、随着盐酸药根碱浓度增加，与吉西他滨联用可有效抑制耐药Panc-1细胞的生长，盐酸药根碱浓度30μM时吉西他滨作用效果最佳，其生长抑制作用效果远高于单用吉西他滨，显著逆转了耐药Panc-1细胞对吉西他滨的耐药性。附图说明图1为本专利技术实施例6单用吉西他滨对胰腺癌Panc-1细胞和耐药Panc-1细胞的生长影响的趋势图；图2为本专利技术实施例6单用盐酸药根碱对胰腺癌Panc-1细胞和耐药Panc-1细胞的生长影响的趋势图；图3为本专利技术实施例7在不同浓度的盐酸药根碱与吉西他滨联合用药对吉西他滨对耐药Panc-1细胞的抑制作用图。图4为本专利技术实施例8用Westernblot法检测盐酸药根碱对耐药Panc-1细胞中Bcl-2蛋白表达的影响图。具体实施方式下面结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步说明：实施例1将盐酸药根碱以不同浓度单独作用于Panc-1细胞和耐药Panc-1细胞。实施例2将吉西他滨以不同浓度单独作用于Panc-1细胞和耐药Panc-1细胞。实施例3将盐酸药根碱与不同浓度的吉西他滨联合用于耐药Panc-1细胞，其中，所述的盐酸药根碱浓度为10μM，所述的吉西他滨浓度为2μM、5μM、10μM、20μM、50μM、100μM。实施例4将浓度为20μM的盐酸药根碱与不同浓度的吉西他滨联合作用于耐药Panc-1细胞，其中，所述的吉西他滨浓度为2μM、5μM、10μM、20μM、50μM、100μM。实施例5将浓度为30μM盐酸药根碱与不同浓度的吉西他滨联合作用于耐药Panc-1细胞，其中所述的吉西他滨浓度为2μM、5μM、10μM、20μM、50μM、100μM。实施例6胰腺癌细胞的生长分析将吉西他滨和盐酸药根碱分别对胰腺癌Panc-1细胞和耐药Panc-1细胞单独用药的生长分析，具体如下：1)、将胰腺癌Panc-1细胞和耐药Panc-1细胞分别以细胞密度为0.2×105个/ml接种于35mm细胞培养皿中并培养24h；2)、对细胞用不同浓度的吉西他滨和盐酸药根碱药物分别处理，作用72h，用台盼蓝拒染法测定分析药物对细胞生长抑制的影响。从图1可以看出，当吉西他滨药物浓度为50μM时，Panc-1细胞的细胞存活数仅约10％，而吉西他滨的浓度为50μM和100μM时，对耐药Panc-1细胞的生长影响相当，细胞存活80％以上，这说明吉西他滨对耐药Panc-1的效果不明显；从图2中可以看出，盐酸药根碱对胰腺癌Panc-1细胞作用效果相似，当盐酸药根碱浓度为50μM时，两种细胞均减少了约50％。综上，盐酸药根碱对两种细胞的作用效果相当；吉西他滨对正常的胰腺癌Panc-1细胞可以有效抑制其细胞生长，但对耐药Panc-1细胞效果有限。实施例7吉西他滨和盐酸药根碱联合用药对耐药Panc-1的生长分析，具体如下：1)、将耐药胰腺癌Panc-1细胞以细胞密度为0.2×105个/ml接种于35mm细胞培养皿中并培养24h；2)本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种盐酸药根碱在逆转胰腺癌细胞耐药性中的应用，其特征在于：在所述的盐酸药根碱的协同作用下，使用低剂量吉西他滨对耐药胰腺癌细胞具有更为显著的抑制作用，逆转了胰腺癌耐药细胞对吉西他滨的耐药性。/n

【技术特征摘要】
1.一种盐酸药根碱在逆转胰腺癌细胞耐药性中的应用，其特征在于：在所述的盐酸药根碱的协同作用下，使用低剂量吉西他滨对耐药胰腺癌细胞具有更为显著的抑制作用，逆转了胰腺癌耐药细胞对吉西他滨的耐药性。


2.根据权利要求1所述的盐酸药根碱在逆转胰腺癌细胞耐药性中的应用，其特征在于：所述的胰腺癌细胞为耐药Panc-1细胞，将所述的盐酸药根碱联合吉西他滨作用于耐药Panc-1细胞，逆转了胰腺癌耐药Panc-1细胞对吉西他滨的耐药性。


3.根据权利要求2所述的盐酸药根碱在逆转胰腺癌细胞耐药性中的应用，其特征在于：所述的盐酸药根碱联合吉西他滨对耐药Panc-1细胞的抑制作用是指提高吉西他滨耐药Panc-1细胞的...

【专利技术属性】
技术研发人员：任想，郑希，李冬利，马于然，王潇，吴盼盼，徐学涛，
申请(专利权)人：五邑大学，
类型：发明
国别省市：广东;44