长链非编码RNA LINC00263在制备肺腺癌预后检测制剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了长链非编码RNA LINC00263在制备肺腺癌预后检测制剂中的应用。利用本发明专利技术可以检测长链非编码RNA LINC00263在肺腺癌患者中的表达水平，为肺腺癌患者预后预测提供了强有力的分子生物学基础，具有深远的临床意义和推广性。

Application of long-chain noncoding RNA linc00263 in the preparation of lung adenocarcinoma prognosis detection preparation

【技术实现步骤摘要】
长链非编码RNALINC00263在制备肺腺癌预后检测制剂中的应用
本专利技术属于肿瘤分子生物学领域，具体涉及长链非编码RNALINC00263在制备肺腺癌预后检测试剂中的应用。
技术介绍
肺癌是目前世界上发病率和死亡率最高的恶性肿瘤之一，肺腺癌(lungadenocarcinoma)是肺癌的一种，属于非小细胞癌。肺腺癌起源于支气管粘膜上皮，少数起源于大支气管的粘液腺。发病年龄较小，多数腺癌起源于较小的支气管，为周围型肺癌。早期一般没有明显的临床症状，往往在胸部X线检查时被发现。表现为圆形或椭圆形肿块，一般生长较慢，但有时早期即发生血行转移。淋巴转移则发生较晚。目前，对肺腺癌患者的预后判定没有参考标准，也没有特异性的指标，远远不能适应对肺腺癌患者进行预后判定的需求。因此，对肺腺癌患者预后进行判定，以便选择最佳治疗方案，显著提高患者生存率，成为胸外科领域亟待解决的重要课题。长链非编码RNA(longnoncodingRNA)是长度大于200nt的非编码RNA的统称。最初的研究认为它是转录组的"噪音"，但近十年来的生命科学研究发现，它们参与了多项生物调控过程。目前，对肺腺癌患者的预后判定没有参考标准，也没有特异性的指标，远远不能适应对肺腺癌患者进行预后判定的需求。因此，对肺腺癌患者预后进行判定，以便选择最佳治疗方案，显著提高患者生存率，成为胸外科领域亟待解决的重要课题。
技术实现思路
本专利技术旨在克服现有技术的不足，提供长链非编码RNALINC00263在制备肺腺癌预后检测制剂中的应用。长链非编码RNALINC00263定位于染色体10q24.31。专利技术人发现长链非编码RNALINC00263在肺腺癌组织中表达上调，与正常人肺组织中的表达差异显著(P<0.05)(图1)，肺腺癌组织中提取RNA，逆转录后进行实时荧光定量PCR分析长链非编码RNALINC00263的表达。长链非编码RNALINC00263在肺腺癌组织中表达上调，与正常人肺组织中的表达差异显著(P<0.0001)(图2)，且长链非编码RNALINC00263表达水平不同的肺腺癌患者预后存在明显差异，经Kaplan-Meier生存分析发现长链非编码RNALINC00263高表达的肺腺癌患者生存率明显低于低表达的患者(P＝0.013)(图3)，比率风险模型预后分析发现长链非编码RNALINC00263的风险率<1(HR＝0.67)，表明长链非编码RNALINC00263高表达的患者预后较低表达的患者预后差。专利技术人在肺腺癌组织中提取RNA，逆转录后进行实时荧光定量PCR分析长链非编码RNALINC00263的表达，发现长链非编码RNALINC00263表达水平不同的肺腺癌患者预后存在明显差异，经Kaplan-Meier生存分析发现长链非编码RNALINC00263高表达的肺腺癌患者生存率明显低于低表达的患者(P＝0.03)(图4)，比率风险模型预后分析发现长链非编码RNALINC00263的风险率<1(HR＝0.365)，表明长链非编码RNALINC00263高表达的患者预后较低表达的患者预后差，长链非编码RNALINC00263的高表达是肺腺癌患者预后风险预测的独立危险因素。因此，长链非编码RNALINC00263能作为肺腺癌预后的判断标准，作为生物标志物用于制备肺腺癌患者的预后制剂，即，将长链非编码RNALINC00263作为肺腺癌预后检测制剂的生物标志物。进一步的，能够提供一种性价比高，易于推广应用的肺腺癌预后预测试剂盒。所述试剂盒中包括长链非编码RNALINC00263实时荧光定量PCR特异性引物和ACTB内参实时荧光定量PCR特异性引物；所述长链非编码RNALINC00263实时荧光定量PCR特异性引物如下：正向引物：5′-TCGGATAGGAGTGTCAGG-3′(SEQIDNO.1)；反向引物：5′-TTCAGTTGCTTCAGGTCAT-3′(SEQIDNO.2)；所述ACTB内参实时荧光定量PCR特异性引物如下：正向引物：5′-CACCATTGGCAATGAGCGGTTC-3′(SEQIDNO.3)；反向引物：5′-AGGTCTTTGCGGATGTCCACGT-3′(SEQIDNO.4)。利用上述试剂盒检测的过程如下：(1)收集待测个体术后切除的肺腺癌组织，抽提总RNA；(2)以总RNA为模板将长链非编码RNALINC00263逆转录为cDNA；(3)用长链非编码RNALINC00263特异性引物进行实时荧光定量PCR扩增，获得相对表达量2ΔΔCT，当2ΔΔCT>5.23时提示长链非编码RNALINC00263为高表达。综上，利用本专利技术可以检测长链非编码RNALINC00263在肺腺癌患者中的表达水平，为肺腺癌患者预后预测提供了强有力的分子生物学基础，具有深远的临床意义和推广性。附图说明图1为TCGA数据库中长链非编码RNALINC00263在肺腺癌组织与正常肺组织中的表达差异；图2为实时荧光定量PCR检测长链非编码RNALINC00263在35例肺腺癌患者中的表达差异；图3为长链非编码RNALINC00263在肺腺癌患者中的生存曲线；图4为为长链非编码RNALINC00263与35例肺腺癌患者预后的关系。具体实施方式实施例1制备长链非编码RNALINC00263用于肺腺癌预后检测试剂盒(50次反应)1.RNA稳定溶液50ml2.异丙醇100ml3.三氯甲烷100ml4.Trizol50ml5.无酶水10ml6.1μM随机逆转录引物50ul7.5×逆转录缓冲液200ml8.10mM三磷酸碱基脱氧核苷酸100ul9.40U/μlRNA酶抑制剂500ul10.200U/μlMMLV逆转录酶50ul11.PremixExTaq50ul12.10μM长链非编码RNALINC00263实时荧光定量PCR特异性引物：正向引物5′TCGGATAGGAGTGTCAGG-3′(SEQIDNO.1)，反向引物5′TTCAGTTGCTTCAGGTCAT-3′(SEQIDNO.2)，13.10μM内参ACTB实时荧光定量PCR特异性引物：正向引物为5′-CACCATTGGCAATGAGCGGTTC-3′(SEQIDNO.3)，反向引物为5′-AGGTCTTTGCGGATGTCCACGT-3′(SEQIDNO.4)。实施例2肺腺癌组织中长链非编码RNALINC00263检测1、肺腺癌组织的保存：收集待测肺腺癌组织存放于盛有RNA稳定溶液的冻存管中，放至-80℃冰箱备用。2、组织中RNA的抽提：取适量标本于经180℃烘烤6-8h后的研钵中加入液氮研磨标本，研磨至粉末状后于研钵中加入1mlTrizol研钵标本，研磨成液本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.长链非编码RNA LINC00263在制备肺腺癌预后检测制剂中的应用，其特征在于，所述应用是将长链非编码RNA LINC00263作为生物标志物用于制备肺腺癌预后检测制剂。/n

【技术特征摘要】
1.长链非编码RNALINC00263在制备肺腺癌预后检测制剂中的应用，其特征在于，所述应用是将长链非编码RNALINC00263作为生物标志物用于制备肺腺癌预后检测制剂。


2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用是将长链非编码RNALINC00263作为检测制剂的生物标志物。


3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述应用是用检测试剂盒对长链非编码RNALINC00263进行检测，检测试剂盒中包括长链非编码RNALINC00263实时荧光定量PCR特异性引物和ACTB内参实时荧光定量PCR特异性引物。


4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述长链非编码RNALINC00263实时荧光定量PCR特异性引物如下：
正向引物：5′-TCGGATAGGAGTGTCAGG-3′；
反向引物：5′-TTCAGTTGCTTCAGGTCAT-...

【专利技术属性】
技术研发人员：陶永光，刘首娉，刘双，
申请(专利权)人：中南大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43