一种治疗过敏性鼻炎的细胞制剂制造技术

本发明专利技术公开了一种治疗过敏性鼻炎的细胞制剂。本发明专利技术首先保护间充质干细胞在制备用于治疗过敏性鼻炎的药物中的应用。本发明专利技术还保护一种细胞制剂的制备方法，包括如下步骤：以脐带沃顿区组织块为原料，制备脐带间充质干细胞，得到细胞制剂，制备过程中采用低血清培养基。本发明专利技术还保护所述细胞制剂在制备用于治疗过敏性鼻炎的药物中的应用。本发明专利技术提供的细胞制剂，适用于过敏性鼻炎的细胞治疗。本发明专利技术对于过敏性鼻炎的治疗具有重大的应用价值。

A cell preparation for the treatment of allergic rhinitis

【技术实现步骤摘要】
一种治疗过敏性鼻炎的细胞制剂
本专利技术涉及一种治疗过敏性鼻炎的细胞制剂，其为一种人脐带沃顿区间充质干细胞制剂，本专利技术还涉及其制备方法和应用。
技术介绍
过敏性鼻炎(allergicrhinitis,AR),又称变应性鼻炎,是常见的耳鼻咽喉科疾病,也是常见的呼吸道变应性疾病。该病是发生于鼻粘膜的变应性疾病,以鼻痒、喷嚏、鼻溢清涕、鼻粘膜肿胀为主要特点。过敏性鼻炎的患病率在10％-40％,其中花粉过敏症多见于欧洲和北美,常年性的过敏性鼻炎多见于亚洲。虽然过敏性鼻炎并不致死,但由于患者的鼻子和全身不适感很明显,影响患者的学习和工作。如果得不到正确的治疗,约30％的患者会发展为支气管哮喘,甚至肺心病等严重影响患者身体健康和生活质量的疾病。皮质类固醇和抗组胺药是目前治疗过敏性鼻炎的一线药物。引起AR发病的因素很多。①接触过敏原：AR是发生在鼻腔中IgE介导的过敏性炎症反应,是在过敏性体质个体中，由过敏原引起的生化物质和细胞级联反应,其发生归因于浸润的炎症细胞和正常细胞的相互作用。②家族遗传性；据报道,AR患者大多为特异性过敏体质，有家族其它过敏病史的过敏性鼻炎患者约占60％，父母双方若都患有AR其后代子女发生本病的几率为75％-100％。③与哮喘相关；AR与哮喘均属于在不同部位发生的呼吸道慢性变态反应性疾病,如果得不到有效治疗，40％的过敏性鼻炎病人会发展为哮喘。过敏性鼻炎是在体外环境因素作用由IgE介导的,以鼻腔黏膜的免疫反应为主的变应性炎症反应。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种治疗过敏性鼻炎的细胞制剂。本专利技术首先保护间充质干细胞在制备用于治疗过敏性鼻炎的药物中的应用。所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞。所述脐带间充质干细胞是以脐带沃顿区组织块为原料制备得到的脐带间充质干细胞。以脐带沃顿区组织块为原料制备脐带间充质干细胞的过程中采用低血清培养基。所述脐带为离体脐带。所述脐带间充质干细胞可为原代脐带间充质干细胞也可为传代后的脐带间充质干细胞。传代后的脐带间充质干细胞可为传代20代以内的脐带间充质干细胞，具体为传代10代以内的脐带间充质干细胞，更具体为传代3-5代的脐带间充质干细胞。本专利技术还保护一种细胞制剂的制备方法，包括如下步骤：以脐带沃顿区组织块为原料，制备脐带间充质干细胞，得到细胞制剂，制备过程中采用低血清培养基。脐带间充质干细胞可为原代脐带间充质干细胞也可为传代后的脐带间充质干细胞。原代脐带间充质干细胞的制备方法依次包括如下步骤：(1)采用低血清培养基培养脐带沃顿区组织块，直至有细胞爬出；(2)采用低血清培养基培养细胞；(3)收集细胞，胰酶消化，收集细胞，即为原代脐带间充质细胞。传代后的脐带间充质干细胞可为传代20代以内的脐带间充质干细胞，具体为传代10代以内的脐带间充质干细胞，更具体为传代3-5代的脐带间充质干细胞。传代方法具体可为：将脐带间充质细胞1：2传代，采用低血清培养基培养细胞，收集细胞，胰酶消化，收集细胞。本专利技术还保护一种细胞制剂的制备方法，包括如下步骤：(1)采用低血清培养基培养离体的脐带沃顿区组织块7-10天；(2)完成步骤(1)后，弃除组织块，采用低血清培养基培养细胞至80％汇合度；(3)完成步骤(2)后，收集细胞，胰酶消化，收集细胞，即为P0代脐带间充质细胞；(4)将P0代脐带间充质细胞1：2传代，采用低血清培养基培养至80％汇合度；(5)完成步骤(4)后，收集细胞，胰酶消化，收集细胞，即为P1代脐带间充质细胞；(6)将P1代脐带间充质细胞1：2传代，采用低血清培养基培养至80％汇合度；(7)完成步骤(6)后，收集细胞，胰酶消化，收集细胞，即为P2代脐带间充质细胞；(8)将P2代脐带间充质细胞1：2传代，采用低血清培养基培养至80％汇合度；(9)完成步骤(8)后，收集细胞，胰酶消化，收集细胞，即为细胞制剂。以上任一所述方法制备得到的细胞制剂也属于本专利技术的保护范围。以上任一所述细胞制剂为CD126阳性的细胞制剂，CD126的阳性率在95％以上，优选为99％以上。以上任一所述细胞制剂为CD29、CD44、CD90和CD105的阳性率均在90％以上的细胞制剂，CD29、CD44、CD90和CD105的阳性率优选在95％以上，进一步优选在99％以上。以上任一所述细胞制剂的CD31和CD34的阳性率菌低于10％，优选低于7％。以上任一所述细胞制剂的CD45和HLA-DR阳性率均低于5％，优选低于3％，进一步优选低于1％。CD29、CD44、CD90和CD105均为鉴定间充质干细胞常用的表面标志物，CD29、CD44、CD90和CD105的阳性率高说明细胞制剂是间充质干细胞且其纯度很高。CD31是内皮祖细胞的标志物、CD45是白细胞的标志物和CD34造血干细胞的标志物，CD31、CD45以及CD34的三个指标的阳性率低，说明细胞制剂纯度很高。HLA-DR是移植排斥相关的标志物，HLA-DR阳性率低说明细胞制剂应用时不容易发生移植排斥。本专利技术还保护所述细胞制剂在制备用于治疗过敏性鼻炎的药物中的应用。本专利技术还保护一种用于治疗过敏性鼻炎的药物，其活性成分为间充质细胞。所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞。所述脐带间充质干细胞是以脐带沃顿区组织块为原料制备得到的脐带间充质干细胞。以脐带沃顿区组织块为原料制备脐带间充质干细胞的过程中采用低血清培养基。所述脐带为离体脐带。所述脐带间充质干细胞可为原代脐带间充质干细胞也可为传代后的脐带间充质干细胞。传代后的脐带间充质干细胞可为传代20代以内的脐带间充质干细胞，具体为传代10代以内的脐带间充质干细胞，更具体为传代3-5代的脐带间充质干细胞。本专利技术还保护一种用于治疗过敏性鼻炎的药物，其活性成分为所述细胞制剂。以上任一所述低血清培养基为含3-5％(体积比)血清的细胞培养基。以上任一所述低血清培养基的组成如下：人上皮生长因子10ng/ml、人碱性成纤维生长因子10ng/ml、重组人胰岛素样生长因子5μg/ml、血小板衍生因子10ng/ml、肝素5μg/ml、氢化可的松1μg/ml、抗坏血酸10μg/ml、非必需氨基酸溶液1％(体积百分比)、L-谷氨酰胺2mmol/L、胎牛血清3-5％(体积百分比)、青霉素50U/ml、链霉素50μg/ml，余量为DMEM高糖培养基。胎牛血清的浓度具体可为4％(体积百分比)。非必需氨基酸溶液中含有Glycine10.0mM、L-Alanine10.0mM、L-Asparagine10.0mM、L-Asparticacid10.0mM、L-GlutamicAcid10.0mM、L-Proline10.0mM、L-Serine10.0mM。本专利技术中采用了低血清培养基来进行培养。在间充质干细胞培养方面，通常使用10％(体积百分数)的胎牛血清，有的血清浓度高达20％(体积百分数)。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、碳水化合物本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.间充质干细胞在制备用于治疗过敏性鼻炎的药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.间充质干细胞在制备用于治疗过敏性鼻炎的药物中的应用。


2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：所述间充质干细胞为脐带间充质干细胞。


3.如权利要求2所述的应用，其特征在于：所述脐带间充质干细胞是以脐带沃顿区组织块为原料制备得到的脐带间充质干细胞。


4.一种细胞制剂的制备方法，包括如下步骤：以脐带沃顿区组织块为原料，制备得到脐带间充质干细胞，制备过程中采用低血清培养基。


5.一种细胞制剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)采用低血清培养基培养离体的脐带沃顿区组织块7-10天；
(2)完成步骤(1)后，弃除组织块，采用低血清培养基培养细胞至80％汇合度；
(3)完成步骤(2)后，收集细胞，胰酶消化，收集细胞，即为P0代脐带间充质细胞；
(4)将P0代脐带间充质细胞1：2传代，采用低血清培养基培养至80％汇合度；
(5)...

【专利技术属性】
技术研发人员：常智杰，付艳霞，王银银，任芳丽，
申请(专利权)人：清华大学，
类型：发明
国别省市：北京;11