一种带组氨酸标签的ADAMTS13底物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种带组氨酸标签的ADAMTS13底物，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，并具有被ADAMTS13酶切的蛋白活性。本发明专利技术所提供的ADAMTS13酶切底物，可以在体外高效大量表达纯化，并且不用做荧光修饰，进一步降低其成本，可大量应用于实际临床；并且本发明专利技术的底物分别带有两组不同的标签，不仅可以作为蛋白纯化时的标签工具，而且被ADAMTS13酶切后产生的产物各自带有一个不同特异性的标签，两个产物均可以被针对该标签的ELISA试剂盒检测出来。本发明专利技术所提供新型的ADAMTS13酶切底物可以高效被ADAMTS13酶切，可应用于检测ADAMTS13的活性高低。

ADAMTS13 substrate with histidine tag and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种带组氨酸标签的ADAMTS13底物及其制备方法和应用
本专利技术属于生物技术分子克隆领域，涉及一种带组氨酸标签的ADAMTS13底物及其制备方法和应用。
技术介绍
1996年首次报道了VWF裂解蛋白酶(VonWillebrandfactorcleavingprotease,vWF-cp)的存在，vWF-cp是具凝血酶敏感蛋白结构的去整合素域和金属蛋白酶域蛋白(ADAMTS)家族成员之一,命名为ADAMTS-13。I型血小板结合蛋白基序的解聚蛋白酶(ADisintegrinAndMetalloproteasewithThromboSpondintypeImotif,ADAMTS)13，属于含I型血小板反应蛋白的解聚素和金属蛋白酶家族成员之一,，为人血管性血友病因子(vonWillebrandfactor，vWF)裂解蛋白酶，主要由肝脏星状细胞合成。ADAMTS13于2001年首次发现并克隆，为存在血浆中的一种重要金属蛋白酶，近期研究发现，血管内皮细胞、巨噬细胞、血小板和肾脏多种细胞均表达ADAMTS13，并在多种疾病中发现其水平异常，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种带组氨酸标签的ADAMTS13底物，其特征在于，所述ADAMTS13底物的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种带组氨酸标签的ADAMTS13底物，其特征在于，所述ADAMTS13底物的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示。


2.根据权利要求1所述的带组氨酸标签的ADAMTS13底物，其特征在于，所述ADAMTS13底物具有被ADAMTS13酶切的蛋白活性。


3.根据权利要求1所述的带组氨酸标签的ADAMTS13底物，其特征在于，编码ADAMTS13底物的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示。


4.权利要求1-3任一项带组氨酸标签的ADAMTS13底物的制备方法，其特征在于，制备方法的具体步骤如下：
a.以核苷酸序列如SEQIDNo.2所示的cDNA为反应模板进行PCR扩增反应；
b.再将步骤a得到的PCR扩增反应产物及载体进行酶切，并将PCR反应产物构建到载体上得到重组载体；
c.将所述重组载体转化至感受态细胞中，培养并挑选阳性克隆；
d.再将阳性克隆转染至表达细菌株，并进行诱导培养，可表达得到带组氨酸标签的ADAMTS13底物。


5.根据权利要求4所述带组氨酸标签的ADAMTS13底物的制备方法，其特征在于，PCR扩增反应的条件为94℃变性3...

【专利技术属性】
技术研发人员：晏妮，
申请(专利权)人：浙江壹晨生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33