【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】表达蜘蛛丝的转基因蚕背景1.专利
本公开内容涉及转基因蚕。更具体地，本公开内容涉及表达合成蜘蛛丝蛋白和复合蜘蛛丝-蚕丝蛋白的转基因蚕。还公开了合成蜘蛛丝蛋白、复合蜘蛛丝-蚕丝蛋白以及用于表达它们的核酸序列。还公开了用于产生这样的蚕的方法，包括利用优化的CRISPR/Cas9系统的方法。2.相关技术的描述蜘蛛丝具有强度和延展性的独特组合，这使得它们成为已知的最坚韧的材料之一。不幸的是，蜘蛛因其占领行为和同类相残行为而不能大规模养殖以满足商业应用的需求。对几种蜘蛛丝蛋白的cDNA和基因序列的克隆已经促进了合成蜘蛛丝基因的设计。牵丝由两种蛋白质组成，大壶状丝蛋白1和大壶状丝蛋白2(MaSp1和MaSp2)。蜘蛛丝蛋白的一级结构包括重复模块单元的大中心核心——占丝蛋白的约90％，其侧翼为非重复N末端结构域和C末端结构域。重复模块单元具有序列基序聚丙氨酸(AAAA)n和甘氨酸-甘氨酸-X的子单元，其中X表示大壶状蜘蛛丝蛋白MaSp1和小壶状蜘蛛丝蛋白MiSp1中的可变氨基酸(Eisolt等人.2010)。不同蜘蛛丝蛋白中基序的顺序和数目是不同的。这些特征为蜘蛛丝的二级结构和机械性质负责。合成蜘蛛丝基因已经被引入到各种生物体中以产生重组蜘蛛丝蛋白(rSSp)。已经研究了多种多样的异源宿主系统作为用于产生rSSp的平台，包括细菌、酵母、哺乳动物细胞系、转基因植物、哺乳动物和昆虫(Lazaris等人.2002；Menassa等人.2004；Xu等人.2007；Miao等人.2006)。尽管在这些宿主系统中...
【技术保护点】
1.一种转基因蚕，包含稳定整合的外源合成蜘蛛丝基因，所述外源合成蜘蛛丝基因可操作地连接至内源蚕启动子，其中所述外源蜘蛛丝基因的长度大于约3千碱基(3kb)。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170330 US 62/479,1561.一种转基因蚕，包含稳定整合的外源合成蜘蛛丝基因，所述外源合成蜘蛛丝基因可操作地连接至内源蚕启动子，其中所述外源蜘蛛丝基因的长度大于约3千碱基(3kb)。
2.如权利要求1所述的转基因蚕，其中所述外源合成蜘蛛丝基因可操作地连接至蚕腺体中的内源蚕启动子。
3.如权利要求1所述的转基因蚕，其中所述外源蜘蛛丝基因的长度大于约4千碱基(4kb)。
4.如权利要求1所述的转基因蚕，其中所述外源蜘蛛丝基因的长度大于约5千碱基(5kb)。
5.如权利要求1所述的转基因蚕，其中所述外源蜘蛛丝基因的长度为约1万碱基(10kb)。
6.如权利要求1所述的转基因蚕，其中所述外源蜘蛛丝基因包含SEQIDNO.25或SEQIDNO:26或其任一个的片段。
7.如权利要求1所述的转基因蚕，其中所述转基因蚕稳定表达所述蜘蛛丝基因。
8.如权利要求1所述的转基因蚕，其中所述外源合成蜘蛛丝基因被稳定地整合在丝心蛋白重链基因FibH的内含子中。
9.如权利要求1所述的转基因蚕，其中所述外源合成蜘蛛丝基因被稳定地整合在丝心蛋白轻链基因FibL的内含子中。
10.如权利要求9所述的转基因蚕，其中所述外源合成蜘蛛丝基因被稳定地整合在所述丝心蛋白轻链基因FibL的第六内含子中。
11.如权利要求1所述的转基因蚕，其中所述内源蚕启动子是蚕特异性U6启动子。
12.如权利要求1所述的转基因蚕，其中所述外源蜘蛛丝基因包括络新妇蛛(Nephilaclavipes)的MaSp1基因、MaSp2基因、Ac1基因、Flag基因、Piri基因或MiSp1基因。
13.如权利要求1所述的转基因蚕，其中所述蚕是蚕属物种(Bombyxsp.)。
14.如权利要求13所述的转基因蚕，其中所述蚕是家蚕(Bombyxmori)。
15.如权利要求1所述的转基因蚕的后代蚕，其中所述外源合成蜘蛛丝基因被稳定地整合。
16.一种转基因蚕属蚕，所述蚕包含：
在丝心蛋白重链基因FibH的内含子中且可操作地连接至蚕特异性U6启动子的稳定整合的络新妇蛛合成蜘蛛丝基因的MaSp1基因或MiSp1基因，
其中所述外源蜘蛛丝基因的长度大于约3千碱基(3kb)，
其中所述转基因蚕稳定表达所述蜘蛛丝基因。
17.如权利要求16所述的转基因蚕，其中所述外源蜘蛛丝基因包含SEQIDNO.25或SEQIDNO:26或其任一个的片段。
18.一种分离的核酸，所述分离的核酸包含合成蜘蛛丝基因，所述分离的核酸具有可操作地连接至内源蚕启动子的SEQIDNO:25或SEQIDNO:26或...
【专利技术属性】
技术研发人员：伦道夫·V·路易斯，夏礼尽，张晓丽，贾斯汀·A·琼斯，
申请(专利权)人：犹他州立大学，
类型：发明
国别省市：美国;US
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