【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】融合脂质体、组合物、试剂盒及其治疗癌症的用途专利或申请文件包含至少一幅彩色附图。在请求并缴纳必要费用后,专利局将提供带有彩色附图的该专利或专利申请公开的副本。
本专利技术大体上涉及用于癌症疗法用途中的超分子组装体,其包括脂质体构建体。
技术介绍
免疫疗法被认为是癌症疗法中最有前途的领域之一,因为它可以利用人体自身的免疫系统抵抗癌症1,2。据表明3,肿瘤形成始于异种肿瘤细胞(包含足够的驱动突变和伴随(passenger)突变)4,这些异种肿瘤细胞受到免疫细胞的攻击5,引起异源性肿瘤生态位减少6,然后其逃避免疫细胞有效识别并招募抗炎性细胞(诸如调节性T细胞和肿瘤浸润巨噬细胞(TAM))7。不同类型的癌症采用使其能够逃避免疫检测的机制,并从而逃避免疫细胞的杀伤。通常用作一线治疗方案的替代方案(化疗)通常包括脱靶副作用,这些副作用会损害粘膜、皮肤、骨髓以及其他组织,从而严重影响患者的生活质量。主要的抗癌免疫疗法包括嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞8,用于原发性和转移性癌症的肿瘤浸润白细胞(TIL)9,以及使用抑制性阻断抗体的免疫检查点阻断10。这些方法取决于癌细胞通过免疫细胞进行识别以使得能够杀死癌症7。例如,CAR-T细胞方法需要癌细胞(例如,YescartaTM和CD19阳性癌细胞)上存在的标志物,TIL方法需要大量与肿瘤相关的突变,而免疫检查点阻断则需要抑制性分子的癌症高表达水平(例如,PD1L/PD2L水平高于50%)3,11。这些方法具有数种长期存在的严重副作用。CAR-T细胞需要分离和转染T细胞, ...
【技术保护点】
1.一种通过用免疫系统活化剂标记癌细胞来治疗癌症的方法,所述方法包括向癌症患者施用融合脂质体,其中,所述方法包括以下步骤:/n(i)向所述癌症患者施用活化免疫系统的融合脂质体,所述活化免疫系统的融合脂质体包含:(a)脂质双层,所述脂质双层包含多个具有14至24个碳原子的脂质分子,和特异性结合对的第一官能团,所述特异性结合对的第一官能团能够与所述结合对的互补第二官能团结合;和(b)免疫系统活化剂,所述免疫系统活化剂包含与所述第一官能团结合的所述结合对的互补第二官能团;或者/n(ii)向所述癌症患者施用官能化的融合脂质体,所述官能化的融合脂质体包含脂质双层,所述脂质双层包含多个具有14至24个碳原子的脂质分子,其中,至少一种所述脂质分子被特异性结合对的第一官能团官能化,所述特异性结合对的第一官能团能够与所述结合对的互补第二官能团结合;并且在步骤(ii)之后,/n(iii)施用用所述结合对的互补第二官能团官能化的免疫系统活化剂,所述结合对的互补第二官能团能够与所述脂质分子的第一官能团结合。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170419 US 62/487105;20180305 US 62/6384081.一种通过用免疫系统活化剂标记癌细胞来治疗癌症的方法,所述方法包括向癌症患者施用融合脂质体,其中,所述方法包括以下步骤:
(i)向所述癌症患者施用活化免疫系统的融合脂质体,所述活化免疫系统的融合脂质体包含:(a)脂质双层,所述脂质双层包含多个具有14至24个碳原子的脂质分子,和特异性结合对的第一官能团,所述特异性结合对的第一官能团能够与所述结合对的互补第二官能团结合;和(b)免疫系统活化剂,所述免疫系统活化剂包含与所述第一官能团结合的所述结合对的互补第二官能团;或者
(ii)向所述癌症患者施用官能化的融合脂质体,所述官能化的融合脂质体包含脂质双层,所述脂质双层包含多个具有14至24个碳原子的脂质分子,其中,至少一种所述脂质分子被特异性结合对的第一官能团官能化,所述特异性结合对的第一官能团能够与所述结合对的互补第二官能团结合;并且在步骤(ii)之后,
(iii)施用用所述结合对的互补第二官能团官能化的免疫系统活化剂,所述结合对的互补第二官能团能够与所述脂质分子的第一官能团结合。
2.根据权利要求1所述的方法,其中,所述免疫系统活化剂通过所述第二官能团与至少一种所述脂质分子的第一官能团在所述融合脂质体的外叶处结合。
3.根据权利要求1所述的方法,其中,所述免疫系统活化剂通过所述第二官能团与至少一种所述脂质分子的第一官能团在所述融合脂质体的内叶处结合。
4.根据权利要求1所述的方法,其中,所述免疫系统活化剂通过所述第二官能团与至少一种所述脂质分子的第一官能团在所述融合脂质体的外叶和内叶处结合。
5.根据权利要求1所述的方法,其中,所述免疫系统活化剂选自T细胞活化剂;促炎性细胞因子;记忆杀伤T细胞活化肽;呈递病毒肽的可溶性人白细胞抗原(sHLA);和超级抗原。
6.根据权利要求5所述的方法,其中,所述免疫系统活化剂是T细胞活化剂。
7.根据权利要求6所述的方法,其中,所述T细胞活化剂选自抗CD3抗体、抗CD8抗体、抗NKG2D抗体或它们的组合、能够结合CD3和CD8的抗体,以及能够结合CD3和NKG2D的抗体。
8.根据权利要求1所述的方法,其中,至少一种所述脂质分子进一步包含阳离子基团、阳离子天然聚合物或合成聚合物、阳离子氨基糖、阳离子聚氨基酸或两亲癌细胞结合肽。
9.根据权利要求8所述的方法,其中,包含阳离子基团的所述至少一种所述脂质分子选自1,2-二油酰基-3-三甲基铵丙烷氯化物(DOTAP)、双十八烷基酰胺基甘氨酰基精胺(DOGS)、1,2-二-O-十八碳烯基-3-三甲铵丙烷(DOTMA)、二甲基双十八烷基铵(18:0DDAB)和N1-[2-((1S)-1-[(3-氨基丙基)氨基]-4-[二(3-氨基丙基)氨基]丁基-甲酰胺基)乙基]-3,4-二[油烯基氧基]-苯甲酰胺(MVL5)。
10.根据权利要求9所述的方法,其中,包含阳离子基团的所述至少一种所述脂质分子是DOTAP。
11.根据权利要求8所述的方法,其中,所述合成聚合物选自聚乙烯亚胺(PEI)和聚(2-(二甲基氨基)乙基甲基丙烯酸酯)。
12.根据权利要求8所述的方法,其中,所述天然聚合物是壳聚糖。
13.根据权利要求8所述的方法,其中,所述氨基糖是葡糖胺。
14.根据权利要求8所述的方法,其中,所述阳离子聚氨基酸选自聚(L-赖氨酸)、聚(L-精氨酸)、聚(D-赖氨酸)、聚(D-精氨酸)、聚(L-鸟氨酸)和聚(D-鸟氨酸)。
15.根据权利要求8所述的方法,其中,所述两亲癌细胞结合肽选自天蚕素A;天蚕素A1-8;和环状CNGRC。
16.根据权利要求1所述的方法,其中,所述至少一种所述脂质分子是选自由以下项所组成的组的磷脂:磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酸或它们的组合,它们中的每一种包含一个或两个相同或不同的脂肪酸残基,其中,磷脂酰部分中的所述脂肪酸残基为饱和的、单不饱的和或多不饱和的并且碳链长度为14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24个碳,如磷脂和溶血磷脂构型的肉豆蔻酰基、硬脂酰基、棕榈酰基、油酰基、亚油酰基、亚麻酰基(包括共轭亚麻酰基)、花生四烯酰基,及它们的组合。
17.根据权利要求16所述的方法,其中,所述磷脂选自由以下项组成的组:1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(POPC)和1,2-二油酰基-3-磷脂酰乙醇胺(DOPE);1,2-二肉豆蔻酰基-3-磷脂酰胆碱(DMPC);1,2-二硬脂酰基-3-磷脂酰胆碱(DSPC);1,2-二肉豆蔻油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(14:1(Δ9-顺式)PC);1,2-二反肉豆蔻油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(14:1(Δ9-反式)PC);1,2-二棕榈油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(16:1(Δ9-顺式)PC);1,2-二反棕榈油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(16:1(Δ9-反式)PC);1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(18:1(Δ6-顺式)PC);1,2-二油酰基-3-磷脂酰胆碱(18:1(Δ9-顺式)PC(DOPC));1,2-二反油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(18:1(Δ9-反式)PC);1,2-二亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(18:2(顺式)PC(DLPC));1,2-二亚麻酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(18:3(顺式)PC);1,2-二(二十碳烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(20:1(顺式)PC);1,2-二(花生四烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(20:4(顺式)PC);1,2-二(二十二碳六烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(22:6(顺式)PC);1,2-二芥酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(22:1(顺式)PC);1,2-二(二十四碳烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(24:1(顺式)PC);1,2-二肉豆蔻酰基-3--3-磷脂酰乙醇胺(DMPE);1,2-二棕榈酰基-3-磷脂酰乙醇胺(DPPE);二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC);1,2-二油酰基-3-磷脂酰乙醇胺(DOPE);1,2-二硬脂酰基-3-磷脂酰乙醇胺(DSPE);1,2-二肉豆蔻酰基-3-磷脂酰丝氨酸(DMPS);1,2-二棕榈酰基-3-磷脂酰丝氨酸(DPPS);棕榈酰油酰基磷脂酰乙醇胺(POPE);和1,2-二油酰基-3-磷脂酰丝氨酸(DOPS)。
18.根据权利要求17所述的方法,其中,所述磷脂选自DOPC、POPC、DMPC、DPPC、DOPE、POPE、DSPE、DMPE和DPPE。
19.根据权利要求1所述的方法,进一步包括连接至至少一种所述脂质分子的稳定部分。
20.根据权利要求19所述的方法,其中,所述稳定部分选自聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、右旋糖酐、聚氨基酸、甲基-聚噁唑啉、聚甘油、聚(丙烯酰基吗啉)和聚丙烯酰胺。
21.根据权利要求20所述的方法,其中,所述稳定部分是分子量为约106Da至约4kDa的PEG。
22.根据权利要求21所述的方法,其中,所述PEG具有约2kDa的分子量。
23.根据权利要求19所述的方法,其中,所述稳定部分通过可剪切的肽接头与至少一种所述脂质分子连接。
24.根据权利要求1所述的方法,其中,所述特异性结合对的第一官能团能够与所述结合对的互补第二官能团形成共价键。
25.根据权利要求24所述的方法,其中,所述特异性结合对的第一官能团能够通过点击化学反应与所述结合对的互补第二官能团形成共价键。
26.根据权利要求24所述方法,其中,i)所述特异性结合对的第一官能团是炔烃或膦,而所述结合对的第二官能团是叠氮化物,或反之亦然;ii)所述特异性结合对的第一官能团是环烯、环炔、环丙烷、异腈(异氰化物)或乙烯基硼酸,而所述结合对的第二官能团是四嗪,或反之亦然;iii)所述特异性结合对的第一官能团为炔烃或马来酰亚胺,而所述结合对的第二官能团为硫醇,或反之亦然;iv)所述特异性结合对的第一官能团是共轭二烯,而所述结合对的第二官能团是经取代的烯烃,或反之亦然;v)所述特异性结合对的第一官能团是烯烃、炔烃或乙炔铜,而所述结合对的第二官能团是硝酮,或反之亦然;vi)所述特异性结合对的第一官能团是醛或酮,而所述结合对的第二官能团是烷氧基胺、羟胺、肼或酰肼,或反之亦然;或vii)所述特异性结合对的第一官能团是醛、酮、异硫氰酸盐/酯、羧酸或其衍生物,诸如酯、酸酐、酰基卤、甲苯磺酰基和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS),而所述结合对的第二官能团是胺,或反之亦然;viii)官能团。
27.根据权利要求26所述的方法,其中,所述特异性结合对是炔烃-叠氮化物。
28.根据权利要求1所述的方法,其中,所述特异性结合对的第一官能团能够与所述结合对的互补第二官能团形成非共价键。
29.根据权利要求28所述的方法,其中,所述特异性结合对的第一官能团是生物素,而所述结合对的第二官能团是所述生物素的结合伴侣,所述结合伴侣选自生物素结合肽或生物素结合蛋白,或反之亦然。
30.根据权利要求29所述的方法,其中,所述生物素结合蛋白选自抗生物素蛋白、链霉亲和素和抗生物素抗体。
31.根据权利要求29所述的方法,其中,所述生物素结合肽选自AEGEFCSWAPPKASCGDPAK(SEQIDNO:11)、CSWRPPFRAVC(SEQIDNO:12)、CSWAPPFKASC(SEQIDNO:13)和CNWTPPFKTRC(SEQIDNO:14)。
32.根据权利要求1所述的方法,其中,所述融合脂质体进一步包含在所述脂质双层与所述第一官能团之间的第一间隔子。
33.根据权利要求1所述的方法,其中,所述免疫系统活化剂进一步包含在所述免疫系统活化剂与所述第二官能团之间的第二间隔子。
34.根据权利要求32或33所述的方法,其中,所述第一间隔子或第二间隔子选自由以下项组成的组:PEG;(C6-C12)烷基;酚的、苯甲酸的或萘的一元、二元或三元羧酸,四氢芘的一元、二元或三元羧酸,或它们的盐;环醚;戊二酸;琥珀酸;粘康酸;己二酸;庚二酸;辛二酸;壬二酸;和癸二酸;以及肽,例如,长度约为2~20个氨基酸残基,如长度为3个氨基酸残基的聚甘氨酸肽。
35.根据权利要求34所述的方法,其中,所述第一间隔子或第二间隔子是分子量为约106Da至约4kDa的PEG。
36.根据权利要求35所述的方法,其中,所述PEG具有约194Da的分子量(PEG4)。
37.根据权利要求34所述的方法,其中,所述第一间隔子或第二间隔子为(C6-C12)烷基,优选为庚基或十二烷酰基。
38.根据权利要求1所述的方法,其中,所述融合脂质体进一步包含胆固醇(CHO)或其衍生物。
39.根据权利要求1所述的方法,其中,所述脂质体的尺寸最大为200nm,例如,约15nm至约200nm、约20nm至约100nm、约50nm至约150nm、约50nm至约90nm、约80nm至约100nm、约110nm至约200nm,例如约100nm。
40.根据权利要求1所述的方法,其中,所述免疫系统活化剂通过所述第二官能团与至少一种所述脂质分子的第一官能团在所述融合脂质体的外叶、内叶,或者外叶和内叶处结合;所述免疫系统活化剂选自T细胞活化剂;促炎性细胞因子;记忆杀伤T细胞活化肽;呈递病毒肽的可溶性人白细胞抗原(sHLA);和超级抗原;至少一些所述脂质进一步包含阳离子基团、阳离子天然聚合物或合成聚合物、阳离子氨基糖、阳离子聚氨基酸或两亲癌细胞结合肽;至少一些所述脂质是选自由以下项组成的组的磷脂:磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酸或它们的组合,它们中的每一种包含一个或两个相同或不同的脂肪酸残基,其中,磷脂酰部分中的所述脂肪酸残基是饱和的、单不饱和的或多不饱和的,并且碳链长度为14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24个碳,如磷脂和溶血磷脂构型的肉豆蔻酰基、硬脂酰基、棕榈酰基、油酰基、亚油酰基、亚麻酰基(包括共轭亚麻酰基)、花生四烯酰基,及它们的组合;所述脂质体进一步包含连接至至少一种所述脂质或所述阳离子聚合物的稳定部分;所述特异性结合对的第一官能团能够与所述结合对的互补第二官能团形成共价键,或者所述特异性结合对的第一官能团能够与所述结合对的互补第二官能团形成非共价键;所述第一间隔子或第二间隔子选自由以下项组成的组:PEG;(C6-C12)烷基;酚的、苯甲酸的或萘的一元、二元或三元羧酸,四氢芘的一元、二元或三元羧酸,或它们的盐;环醚;戊二酸;琥珀酸;粘康酸;己二酸;庚二酸;辛二酸;壬二酸;和癸二酸,肽,例如,长度约为2~20个氨基酸残基,如长度为3个氨基酸残基的聚甘氨酸肽;所述脂质体的尺寸最大为200nm,例如,约15nm至约200nm、约20nm至约100nm、约50nm至约150nm、约50nm至约90nm、约80nm至约100nm、约110nm至约200nm,例如约100nm。
41.根据权利要求40所述的方法,其中,所述免疫系统活化剂是T细胞活化剂;包含阳离子基团的所述至少一种所述脂质分子选自1,2-二油酰基-3-三甲基铵丙烷氯化物(DOTAP)、双十八烷基酰胺基甘氨酰基精胺(DOGS)、1,2-二-O-十八碳烯基-3-三甲铵丙烷(DOTMA)、二甲基双十八烷基铵(18:0DDAB),和N1-[2-((1S)-1-[(3-氨基丙基)氨基]-4-[二(3-氨基丙基)氨基]丁基-甲酰胺基)乙基]-3,4-二[油烯基氧基]-苯甲酰胺(MVL5),所述合成聚合物选自聚乙烯亚胺(PEI)和聚(2-(二甲基氨基)乙基甲基丙烯酸酯),所述天然聚合物为壳聚糖,所述氨基糖为葡糖胺;所述阳离子聚氨基酸选自聚(L-赖氨酸)、聚(L-精氨酸)、聚(D-赖氨酸)、聚(D-精氨酸)、聚(L-鸟氨酸)和聚(D-鸟氨酸),或所述两亲癌细胞结合肽选自天蚕素A;天蚕素A1-8;和环状CNGRC;所述至少一种所述脂质分子选自由以下项组成的组:1-棕榈酰基-2-油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(POPC)和1,2-二油酰基-3-磷脂酰乙醇胺(DOPE);1,2-二肉豆蔻酰基-3-磷脂酰胆碱(DMPC);1,2-二硬脂酰基-3-磷脂酰胆碱(DSPC);1,2-二肉豆蔻油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(14:1(Δ9-顺式)PC);1,2-二反肉豆蔻油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(14:1(Δ9-反式)PC);1,2-二棕榈油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(16:1(Δ9-顺式)PC);1,2-二反棕榈油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(16:1(Δ9-反式)PC);1,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(18:1(Δ6-顺式)PC);1,2-二油酰基-3-磷脂酰胆碱(18:1(Δ9-顺式)PC(DOPC));1,2-二反油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(18:1(Δ9-反式)PC);1,2-二亚油酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(18:2(顺式)PC(DLPC));1,2-二亚麻酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱(18:3(顺式)PC);1,2-二(二十碳烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(20:1(顺式)PC);1,2-二(花生四烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(20:4(顺式)PC);1,2-二(二十二碳六烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(22:6(顺式)PC);1,2-二芥酰-sn-甘油-3-磷酸胆碱(22:1(顺式)PC);1,2-二(二十四碳烯酰基)-sn-甘油-3-磷酸胆碱(24:1(顺式)PC);1,2-二肉豆蔻酰基-3--3-磷脂酰乙醇胺(DMPE);1,2-二棕榈酰基-3-磷脂酰乙醇胺(DPPE);二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC);1,2-二油酰基-3-磷脂酰乙醇胺(DOPE);1,2-二硬脂酰基-3-磷脂酰乙醇胺(DSPE);1,2-二肉豆蔻酰基-3-磷脂酰丝氨酸(DMPS);1,2-二棕榈酰基-3-磷脂酰丝氨酸(DPPS);棕榈酰油酰基磷脂酰乙醇胺(POPE);和1,2-二油酰基-3-磷脂酰丝氨酸(DOPS);所述稳定部分选自聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、右旋糖酐、聚氨基酸、甲基-聚噁唑啉、聚甘油、聚(丙烯酰基吗啉)和聚丙烯酰胺;所述特异性结合对的第一官能团能够通过点击化学反应与所述结合对的互补第二官能团形成共价键,i)所述特异性结合对的第一官能团是炔烃或膦,而所述结合对的第二官能团是叠氮化物,或反之亦然;ii)所述特异性结合对的第一官能团是环烯、环炔、环丙烷、异腈(异氰化物)或乙烯基硼酸,而所述结合对的第二官能团是四嗪,或反之亦然;iii)所述特异性结合对的第一官能团为炔烃或马来酰亚胺,而所述结合对的第二官能团为硫醇,或反之亦然;iv)所述特异性结合对的第一官能团是共轭二烯,而所述结合对的第二官能团是经取代的烯烃,或反之亦然;v)所述特异性结合对的第一官能团是烯烃、炔烃或乙炔铜,而所述结合对的第二官能团是硝酮,或反之亦然;vi)所述特异性结合对的第一官能团是醛或酮,而所述结合对的第二官能团是烷氧基胺、羟胺、肼或酰肼,或反之亦然;或vii)所述特异性结合对的第一官能团是醛、酮、异硫氰酸盐/酯、或羧酸或其衍生物,诸如酯、酸酐、酰基卤、甲苯磺酰基和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS),而所述结合对的第二官能团是胺,或反之亦然,或者所述特异性结合对的第一官能团是生物素,而所述结合对的第二官能团是所述生物素的结合伴侣,所述结合伴侣选自生物素结合肽或生物素结合蛋白,或反之亦然;以及所述第一间隔子或第二间隔子是分子量为约106Da至约4kDa的PEG,或(C6-C12)烷基,优选庚基或十二烷酰基。
42.根据权利要求41所述的方法,其中,所述T细胞活化剂选自抗CD3抗体、抗CD8抗体、抗NKG2D抗体或它...
【专利技术属性】
技术研发人员:I·努德尔曼,Y·路普哈珀,G·卡奈提,D·吉尔逊,H·阿尔卡雷,A·思科罗德,
申请(专利权)人:APA先进技术有限公司,
类型:发明
国别省市:以色列;IL
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