【技术实现步骤摘要】
一种联用双抗生素进行毕赤酵母转化子维持培养的方法
本专利技术涉及一种联用双抗生素以维持毕赤酵母转化子生长及外源基因保持的培养方法，属于毕赤酵母转化子维持培养领域。
技术介绍
在生物发酵技术中，毕赤酵母作为重要的真核细胞宿主，可以表达多种具有复杂三级及四级结构的外源蛋白。本专利技术联用氨苄西林和遗传霉素两种抗生素进行毕赤酵母转化子的液体培养。毕赤酵母作为基因重组技术中重要的真核细胞宿主，在复杂的外源蛋白表达中具有重要的应用。但作为真核细胞，毕赤酵母对多数抗生素不敏感，这使得毕赤酵母转化子的阳性克隆筛选和维持培养具有一定的难度；同时毕赤酵母的不同亚型具有不同的代谢特征，使得毕赤酵母很难以代谢特征作为通用的阳性筛选和维持培养手段。遗传霉素（Geneticin,G418）是一种氨基糖苷类抗生素，通过抑制转座子Tn601及Tn5而干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成，在不同浓度下对原核细胞、真菌、高等植物细胞及哺乳动物细胞都具有一定的毒性。但遗传霉素的使用存在短期效价不高且易产生天然抗性等缺点，因此以遗传霉素进行转化子的维持...
【技术保护点】
1.一种联用双抗生素进行毕赤酵母转化子维持培养的方法，其特征在于，培养步骤如下：/n（1）用去离子水配制10mg/mL氨苄西林溶液，用去离子水配制100mg/mL遗传霉素溶液，并将溶液过滤除菌；/n（2）制备培养基，灭菌；/n（3）待培养基冷却后，加入10mg/mL氨苄西林溶液及100mg/mL遗传霉素溶液摇匀；/n（4）将酵母转化子接种于步骤（3）配置的培养基中进行培养。/n
【技术特征摘要】
1.一种联用双抗生素进行毕赤酵母转化子维持培养的方法，其特征在于，培养步骤如下：
（1）用去离子水配制10mg/mL氨苄西林溶液，用去离子水配制100mg/mL遗传霉素溶液，并将溶液过滤除菌；
（2）制备培养基，灭菌；
（3）待培养基冷却后，加入10mg/mL氨苄西林溶液及100mg/mL遗传霉素溶液摇匀；
（4）将酵母转化子接种于步骤（3）配置的培养基中进行培养。
2.根据权利要求1所述的一种联用双抗生素进行毕赤酵母转化子维持培养的方法，其特征在于：所述步骤（2）中培养基的制备步骤为溶液培养或者平板培养。
3.根据权利要求2所述的一种联用双抗生素进行毕赤酵母转化子维持培养的方法，其特征在于，所述溶液培养的制备步骤如下：将YEPD固体加入去离子水中，使得YEPD的最终浓度为50g/L，即可得到。
4.根据权利要求2所述的一种联用双抗生素进行毕赤酵母转化子维持培养的方法，其特征在于，所述平板培养的制备步骤如下...
【专利技术属性】
技术研发人员：王婷，屈冠雯，王楚，冯章启，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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