软腐病致病菌Dickeya chrysanthemi的检测引物、检测方法及其应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，尤其涉及软腐病致病菌Dickeya chrysanthemi的检测引物、检测方法及其应用。该方法具有快速、精准，灵敏的特点，有效提高了检测Dickeya chrysanthemi引起半夏软腐病的便捷性、及时性和准确度。引物序列为：上游引物BXTF:5`CATCAGGGTTTCCCC 3`，见SEQ ID NO.1；下游引物BXTR：5`GTCTGGGGATCTGCC 3`，见SEQ ID NO.2。本发明专利技术采用巢式PCR(Nested PCR)对Dickeya chrysanthemi进行分子检测，检测操作简单、准确性好、灵敏度较高，国内外对该方法均未有报道。

Detection primer, detection method and application of Dickeya chrysanthemi

【技术实现步骤摘要】
软腐病致病菌Dickeyachrysanthemi的检测引物、检测方法及其应用
本专利技术属于生物
，尤其涉及软腐病致病菌Dickeyachrysanthemi的检测引物、检测方法及其应用。
技术介绍
半夏(Pinelliaternata)，为天南星目、天南星科、半夏属药用植物，为我国大宗常用药材，主要药用部位为其块茎，其燥湿化痰，降逆止呕，消痞散结。用于痰多咳喘，痰饮眩悸，风痰眩晕，痰厥头痛，呕吐反胃，胸脘痞闷，梅核气；生用外治痈肿痰核，是多种中成药的原料药。广泛分布于中国长江流域以及东北、华北等地区，在西藏也有分布，生长于海拔2500米以下。随着中医药事业的发展，半夏用量逐年增加，种植面积逐年扩大，但是由Dickeyachrysanthemi(GenBank登录号为MK181574)引起的软腐病目前在各大半夏产区大面积流行，该致病菌可以通过种苗、水和土壤进行传播，一旦染病，整株一周内彻底腐烂死亡，对半夏的产量和品质影响极大，同时严重阻碍了农户的种植积极性。申请人在湖北天门半夏基地调查发现，该菌导致的软腐病发病率高达70％(文献本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.软腐病致病菌Dickeya chrysanthemi的检测引物，其特征在于，所述引物序列为：/n上游引物BXTF:5`CATCAGGGTTTCCCC 3`，见SEQ ID NO.1；/n下游引物BXTR：5`GTCTGGGGATCTGCC 3`，见SEQ ID NO.2。/n

【技术特征摘要】
1.软腐病致病菌Dickeyachrysanthemi的检测引物，其特征在于，所述引物序列为：
上游引物BXTF:5`CATCAGGGTTTCCCC3`，见SEQIDNO.1；
下游引物BXTR：5`GTCTGGGGATCTGCC3`，见SEQIDNO.2。


2.软腐病致病菌Dickeyachrysanthemi的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：提取软腐病致病菌Dickeyachrysanthemi的基因组DNA；
步骤2：以步骤1中得到的DNA为模板，利用通用引物27F/1492R进行第一轮PCR扩增；
步骤3：以第一轮扩增产物为模板，利用权利要求1所述的检测引物进行第二轮PCR扩增；
步骤4：第二轮扩增产物进行电泳检测，如果出现348bp的DNA条带，则确定所测样品中存在致病菌Dickeyachrysanthemi。


3.根据权利要求2所述的软腐病致病菌Dickeyachrysanthemi的检测方法，其特征在于，步骤2中第一轮PCR和步骤3中第二轮PCR扩增体系为：1μL模板，2×TaqMasterMix12.5μL，10μM的上、下游引物各1μL，双蒸水9.5μL。


4.根据权利要求2所述的软腐病致病菌Dickeyachrysanthemi的检测方法，其特征在于：步骤2中第一轮PCR的扩增反应程序为预变性94℃3分钟，94℃30秒，54℃30秒，72℃1分30秒，35个循环，最后在72℃延...

【专利技术属性】
技术研发人员：游景茂，王帆帆，唐涛，郭杰，郭晓亮，段媛媛，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院中药材研究所，
类型：发明
国别省市：湖北;42