非黑素瘤皮肤癌(NMSC)的预防和治疗制造技术

本发明专利技术公开了用于预防和治疗非黑素瘤皮肤癌(NMSC)的干扰素α(IFN‑α)信使RNA(mRNA)以及用于向人患者施用该IFN‑αmRNA的试剂盒，其中所述mRNA具有5'帽区、5'非翻译区(5'‑UTR)、编码区、3'非翻译区(3'‑UTR)和多聚腺苷尾部(多聚A尾部)。

Prevention and treatment of non melanoma skin cancer (NMSC)

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】非黑素瘤皮肤癌(NMSC)的预防和治疗本专利技术涉及用于预防和治疗非黑素瘤皮肤癌(NMSC)的组合物和方法。非黑色素瘤皮肤癌(NMSC)是全球最常见的癌症形式。NMSC包括并非始于黑素细胞的所有形式的皮肤癌，最著名的是基底细胞癌(BCC)(约占所有NMSC的75-80％)和鳞状细胞癌(SCC)(约占所有NMSC的20-25％)。光化性角化病(AK)是重要的NMSC实体。在历史上，它被认为是SCC的前体病变。如今，科学界已将其理解为原位癌，其可能会发展为侵入性阶段。与其他NMSC相比，AK非常丰富。AK是一种通常在长期暴露于阳光下的皮肤区域发展的皮肤病。AK(现在被认为是原位癌)的病理生理学概念的改变是由以下事实驱动的：在细胞学水平上，AK与SCC难以区分，而在分子生物学水平上，它与SCC具有多个相似之处。根据表皮中非典型角质形成细胞的程度，AK在组织病理学上分为3个等级(AKI-III)。临床上，AK通常呈现为在红斑基部上的鳞斑。触诊显示出砂纸般的质感。周围的皮肤可能显示出长期阳光损伤的迹象，包括毛细血管扩张、色差和弹性形成。皮肤镜检查支持(例如面部色素沉着病变的)鉴别诊断和临床分级。解剖学分布(面部、秃头、颈部、手背)进一步凸显了长期暴露于阳光下是AK发展的主要危险因素的重要性。其他风险因素包括高龄、男性性别和白皙皮肤类型。免疫抑制(例如移植受者)也赋予AK更高的风险。UVB辐射能够导致直接DNA损伤。结果，诸如p53的肿瘤抑制蛋白的功能被抑制。实际上，p53途径的失调似乎在AK病变的发展及其进一步进展为SCC中起着最重要的作用。一些证据表明，人乳头瘤病毒感染是辅助因子。在区域性癌变(fieldcancerization)的情况下，AK可能以单个病变(≤5)以多个病变(≥6)或多个病变(≥6)的形式出现(即，在长期阳光损害的一个身体区域(region或field)以及相邻区域(area)中的至少6个AK病变)。通用分类推荐第四个亚组，免疫抑制的AK患者。关于AK的自然病史的可用数据表明，未经适当治疗的AK的存在是一种动态但长期的病况。对于个体病变，估计从AK进展为浸润性SCC的风险为10％。由于目前尚无法预测哪些AK病变会进展为SCC，因此重要的是在所有情况下均尽快进行干预。当前的AK治疗可分为两大类：病变定向和区域性定向。最常见的病变定向治疗是冷冻手术，然后进行手术切除。两种病变定向方法的主要缺点是它们只能处理可见的病变，而不能处理受损的区域。此外，据认为它们的美容效果不及区域性定向的效果。由于这些原因，越来越多地采用区域性定向的疗法来消除临床上可见的病变以及亚临床病变以防止其向SCC过渡。当前的区域性定向的疗法包括局部药剂，例如咪喹莫特(作为出售)、双氯芬酸(作为出售)、5-氟尿嘧啶(作为或出售)、巨大戟醇甲基丁烯酸酯(作为出售)和光动力疗法区域性定向的疗法有可能影响亚临床病变。这些当前的现有技术治疗通常需要使用频繁家庭应用的长期治疗期和大量的停工期。这严重降低患者的依从性，并限制了NMSC治疗在临床实践中的疗效。此外，对现有治疗的反应率也有所不同，据报道，标准治疗后AK的组织学清除率对于氟尿嘧啶治疗后为低至67％，和对于咪喹莫特治疗后为73％。关于区域性定向疗法的长期有效性和复发率的信息是稀缺和印象不深的。一年时间点的复发率为10％至56％。这些印象不深的低成功率使得需要开发新型治疗范式以满足NMSC治疗的医学需求。干扰素α(干扰素alpha、IFN-α、IFNa)(I型干扰素)具有抗病毒、抗血管生成以及促凋亡特性，并且是一种关键的免疫刺激分子，具有已证实的治疗性抗肿瘤功效。干扰素于1957年首次被描述。IFNa基因的克隆和后来的干扰素β(IFN-β；IFNb)和干扰素γ(IFN-γ；IFNg)在20世纪80年代初才被报道。在20世纪80年代，已经提出重组IFNα蛋白用于治疗AK和其他形式的NMSC。当时，有大量报道声称重组IFNa蛋白用于治疗BCC和SCC的安全性和有效性。发现对于大多数BCC和SCC，每周3次持续3周的1.5x106IU剂量的IFNa的重复病灶周围施用是足够的(大肿瘤需要更高的总剂量)。US5002764A和US5028422A公开了使用重组人IFNa-2蛋白的AK的病灶内施用治疗。各种BCC亚型似乎有不同的反应，其中表面和溃疡性类型比结节性类型更适合IFNa治疗。在EP0248583B1中还讨论了在三周的时间内三次病灶内施用重组人IFNα-2b用于治疗人BCC的方法。SCC通常比BCC更具侵入性，并且可能威胁生命。原发性皮肤SCC的总体5年复发率为8％(相比之下BCC<0.1％)。关于评估鳞状细胞癌中病灶内IFNa的研究，有少量报道。频繁且长期应用高剂量的病灶内IFNa有效治疗小鳞状细胞癌。对于AK，Edwards及其同事报告了6次高剂量的病灶周围注射，每剂量5x105IU，以清除AK(Arch.Dermatol.,1986.122(7):p.779-82)。较低剂量的IFNa蛋白(每次注射1x105、1x104IU)分别被证明对原位AK清除不太有效。IFNα在治疗各种类型的NMSC中的作用机制是部分已知的。抗肿瘤作用似乎是由于直接的抗增殖作用以及间接作用的结合，依赖于肿瘤基质和微环境。间接作用包括对先天和适应性免疫系统以及肿瘤血管的影响。IFNa在卡波西氏肉瘤和血管瘤中的有效性证明了其抗血管生成活性的临床意义。尽管已证明IFNa在NMSC中有效，特别是在AK、BCC和SCC中，但它从未成为临床常规治疗方法。原因很明显。治疗需要在数周内频繁(每天或每周三次)病灶周注射。同样，重组IFNα蛋白价格昂贵，并且制剂的质量和重要地生物活性不同。IFNa是使用基因工程大肠杆菌菌株通过重组DNA技术生产的。尽管通过大肠杆菌表达可产生高蛋白产量，但必须对产物进行大量纯化并测试其效能和生物活性，以对于在产品中使用不同程度的非活性和活性蛋白进行的治疗提供可比较水平的生物活性。现代医学中希望避免干扰素特别是IFNα的原因是这些蛋白质具有许多特有的毒性作用。发生的副作用主要有四大类：体质性、神经精神性、血液/免疫性和肝性。这些副作用的严重程度似乎与IFN蛋白治疗的剂量和持续时间直接相关(Borden等人,SeminOncol,1998.25(1Suppl1):p.3-8)。体质症状包括类似流感的症状，例如疲劳、发烧、发冷和僵硬。体质症状较早出现，通常在给药后3-6小时内。患者可能还会感到头痛、肌痛和心神不安。在治疗的最初几天内可能会发生转氨酶和中性粒细胞减少症，其可以通过减少剂量来控制。如果治疗不当，则可能导致致命的肝毒性。接受IFN治疗的患者最常出现的慢性症状包括疲劳(70-100％)、厌食症(40-70％)和神经精神疾病(高达30％)。这些症状是剂量相关的和累积的，随着时间的流逝而恶化。自身免疫毒性包括触发红斑狼疮、银屑病和甲状腺功能障碍。在接受IFNa治疗的患者中，有8-20％的患者甲状腺功能失调本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于预防和治疗人患者的非黑素瘤皮肤癌(NMSC)的干扰素α(IFN-α)信使RNA(mRNA)，其中所述mRNA具有5'帽区、5'非翻译区(5'-UTR)、编码人IFN-α的编码区、3'非翻译区(3'-UTR)和多聚腺苷尾部(多聚A尾部)，特别是其中NMSC是光化性角化病(AK)、基底细胞癌(BCC)和鳞状细胞癌(SCC)，特别是AK。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170331 EP 17164257.2;20171106 EP 17200162.01.用于预防和治疗人患者的非黑素瘤皮肤癌(NMSC)的干扰素α(IFN-α)信使RNA(mRNA)，其中所述mRNA具有5'帽区、5'非翻译区(5'-UTR)、编码人IFN-α的编码区、3'非翻译区(3'-UTR)和多聚腺苷尾部(多聚A尾部)，特别是其中NMSC是光化性角化病(AK)、基底细胞癌(BCC)和鳞状细胞癌(SCC)，特别是AK。


2.根据权利要求1使用的IFN-αmRNA，其中所述IFN-αmRNA选自IFN-α1型mRNA(IFNa1)、IFN-α2a型mRNA(IFNa2a)和IFN-α2b型mRNA(IFNa2b)。


3.根据权利要求1或2使用的IFN-αmRNA，其中所述多聚A尾部包含至少100个腺苷一磷酸，优选至少120个腺苷一磷酸。


4.根据权利要求1-3中任一项使用的IFN-αmRNA，其中5'-UTR或3'-UTR或5'-UTR和3'-UTR与天然IFN-αmRNA不同，优选其中5'-UTR或3'-UTR或5'-UTR和3'-UTR包含至少一个稳定序列，优选具有通式(C/U)CCANxCCC(U/A)PyxUC(C/U)CC(SEQIDNO:38)的稳定序列，其中“x”独立地在Nx和Pyx中为0至10的整数，优选为0至5的整数，特别是0、1、2、4和/或5。


5.根据权利要求1-4中任一项使用的IFN-αmRNA，其中5'-UTR或3'-UTR或5'-UTR和3'-UTR与天然IFN-αmRNA不同，其中5'-UTR和/或3'-UTR是与IFN-α不同的人mRNA的5'-UTR和/或3'-UTR，优选选自α珠蛋白、β珠蛋白、白蛋白、脂氧合酶、ALOX15、α(1)胶原蛋白、酪氨酸羟化酶、核糖体蛋白32L、真核延伸因子1a(EEF1A1)、正痘病毒中存在的5□-UTR元件及其混合物，特别是选自α珠蛋白、β珠蛋白、α(1)胶原蛋白及其混合物。


6.根据权利要求1至5中任一项使用的IFN-αmRNA，其中在所述IFN-αmRNA中，
-全部胞苷残基的至少5％、优选至少10％、优选至少30％、特别是至少50％被5-甲基胞苷残基取代，和/或
-全部胞苷残基的至少5％、优选至少10％、优选至少30％、特别是至少50％被2-氨基-2-脱氧胞苷残基取代，和/或
-全部胞苷残基的至少5％、优选至少10％、优选至少30％、特别是至少50％被2-氟-2-脱氧胞苷残基取代，和/或
-全部胞苷残基的至少5％、优选至少10％、优选至少30％、特别是至少50％被2-硫代胞苷残基取代，和/或
-全部胞苷残基的至少5％、优选至少10％、优选至少30％、特别是至少50％被5-碘代胞苷残基取代，和/或
-全部尿苷残基的至少5％、优选至少10％、优选至少30％、特别是至少50％被假尿苷残基取代，和/或
-全部尿苷残基的至少5％、优选至少10％、优选至少30％、特别是至少50％被1-甲基假尿苷残基取代，和/或
-全部尿苷残基的至少5％、优选至少10％、优选至少...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·曼德勒，A·施尼博格，W·施密特，F·玛特纳，
申请(专利权)人：阿卡尼斯生物技术FE有限责任两合公司，
类型：发明
国别省市：奥地利;AT