一株灵芝属菌株CZ06及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株灵芝属菌株CZ06及其应用。该菌株已于2019年4月15日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2019258。该菌株从一株野生灵芝子实体中分离纯化而来，具有菌丝生长迅速、以菌丝体扭结力强的特性，可用于生态可降解果品包装盒的研发，应用前景良好。

【技术实现步骤摘要】
一株灵芝属菌株CZ06及其应用
本专利技术属于微生物
，涉及一株灵芝属菌株CZ06及其应用。
技术介绍
我国是世界最大的水果生产和消费大国，据统计，2016年我国水果总产量达28351.1万t，且以年均9.9％比例增加。水果产业的蓬勃发展对满足人民生活需要，促进我国经济发展起到了重要的推动作用。在水果贮存及运输过程中，常采用聚苯乙烯塑料泡沫作为包装材料，使用结束被废弃，这些塑料包装难以被微生物降解，回收利用率低，是“白色污染”的重要来源。以苹果为例，2016年我国苹果产量达4300万吨，运输销售中产生的废弃塑料泡沫包装约500万吨左右，造成的环境问题不可忽视。白色污染严重威胁大气、水、土安全，已成为世界范围内影响可持续发展的一大公害。近年来，环保力度越来越大，我国每年投入白色污染防治高达2万亿元。因此，亟待开发环保型果品包装盒取代传统塑料泡沫。另一方面，我国每年可生产的农作物秸秆近7亿t，是农业生产的主要副产品。农作物秸秆含丰富的有机质及氮、磷、钾等营养成分，已应用于食用菌栽培、有机肥等产业。同时，我国有丰富的食用真菌资源，仅食用菌类的种质资源达930多种，包括丰富的灵芝种质资源，目前已经记载的灵芝属品种已达50个。我国对于灵芝的开发应用很早，但近年来开发应用力度越来越大，申报的专利数量大。查阅国家知识产权局专利公布公告网，截止2019年8月底，国家知识产权局公布了14006件与灵芝有关的中国专利，其中3110件获得专利技术专利授权；与灵芝栽培有关的专利公布541件，获得专利技术专利授权106件；与灵芝属有关的专利公布19件，获得专利技术专利授权的7件。分析这些所公布的专利授权及专利技术授权，主要涉及品种筛选、栽培技术、功能性产物提取，绝大多数专利与灵芝提取物深加工有关。而灵芝属真菌的菌丝体具有独特的特性，在形成子实体原基前，菌丝体迅速扭结，强度迅速增加，具备了天然的粘结剂的特性。我国是农业大国，农作物秸秆总量大但利用不充分。以农作物秸秆为原材料，筛选优良灵芝属菌株，利用其菌丝黏合能力强的特点，生产环保型果品包装盒取代传统塑料泡沫、聚苯乙烯塑料泡沫等果品包装，在解决塑料包装污染重等难题的同时，实现了农业副产物综合循环利用。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题为：针对现有塑料泡沫水果包装难降解、污染日益严重的问题，提供了一株从野生灵芝中分离纯化得到的灵芝菌株CZ06，以及其在生态可降解果品包装盒中的应用。本专利技术的技术方案为：一株灵芝属菌株Ganodermasp.CZ06，保藏单位：中国典型培养物保藏中心；地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内；保藏日期：2019年4月15日，保藏编号：CCTCCNO:M2019258。灵芝属菌株CZ06在制备生态可降解果品包装盒中的应用。本专利技术从四川省成都市大邑县安仁镇采集一朵野生灵芝子实体，寄主植物为法国梧桐，将试验材料子实体采集后带回实验室分离。通过分离纯化得到真菌菌株，命名为CZ06。在PDA培养基上培养，菌落呈辐射状生长，菌落质地为绒毛状，较为紧密，菌丝体为白色，生长中后期菌丝体产生黄至黄褐色水溶性色素并渗透至培养基内。提取该菌株的总DNA，扩增ITS片段，所述的菌株CZ06的ITS序列如SEQIDNO.1所示。将所测得的ITS序列在美国国立生物信息中心(NCBI)进行比对，获得相似性较高的菌株序列，MEGA7.0软件邻接法(Neighbor-joining)构建系统发育树。用DNAMAN8.0软件进行序列相似度的计算，结果表明，菌株CZ06与四川灵芝(G.sichuanense)JQ781878和G.subamboinenseKU569546序列相似性最高仅为98.9％。据此可初步判断CZ06在分类上属于灵芝属，与现有品种存在差异的一株新品种，初步命名为Ganodermasp.CZ06。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术提供了一株灵芝属菌株CZ06，该菌株最适培养条件为25℃，pH为7.0；母种培养基为PDA；最佳原种配方为玉米芯80％，麸皮10％，玉米粉10％；该菌株菌丝生长温度和初始生长pH范围较宽；菌丝扭结性强，以玉米芯、麸皮为原料，接种供试菌株培养7d，可生产出质量很好的生态可降解水果包装盒。该生态可降解水果包装盒洁白光滑，轻质美观，内部结构疏松多孔，透气性好，缓冲性佳，能有效防止果品运输中的损耗，使用后放置于自然环境可快速地降解，成为土壤有机质，具有培肥土壤的效果，既实现农业副产品的综合循环利用，又能有效解决塑料泡沫材料带来的环境问题，应用前景良好。保藏信息：灵芝属菌株Ganodermasp.CZ06，保藏单位：中国典型培养物保藏中心；地址：湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内；保藏日期：2019年4月15日，保藏编号：CCTCCNO:M2019258。附图说明图1是灵芝属菌株CZ06在PDA培养基上的菌落形态；图2是灵芝属菌株CZ06的ITS序列的系统发育图；图3是生态可降解枇杷包装盒产品图；图4是生态可降解苹果包装盒产品图。具体实施方式实施例1灵芝属菌株CZ06的分离、纯化和保存野生灵芝子实体采自四川省成都市大邑县安仁镇，寄主植物为法国梧桐，将灵芝子实体采集后带回实验室分离。制备PDA培养基：土豆200g，蔗糖20g，琼脂20g，pH自然，蒸馏水1L。采用组织分离法对供试菌种进行分离。在无菌条件下，将采集的灵芝用消毒酒精棉进行表面消毒，无菌切取灵芝子实体组织块，移至PDA斜面培养基中，25℃培养，观察菌丝生长情况，及时挑出污染管。根据菌丝生长，挑取尖端菌丝纯化，结合镜检得到纯培养物，命名为CZ06，PDA斜面试管培养，4℃保藏。如图1所示，本实验例的分离纯化得到的菌株CZ06在PDA平板培养5d，菌落呈辐射状生长，菌落质地为绒毛状，菌丝白色，生长中后期菌丝体产生黄至黄褐色水溶性色素并渗透至培养基内。实施例2菌株CZ06的ITS扩增及系统发育分析提取菌株总DNA，以总DNA为模板，用ITS4(5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’SEQIDNo.2)和ITS5(5’-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3’SEQIDNo.3)为引物扩增ITS片段，PCR反应用Bio-RADMyCyclerTM仪器。反应体系(30μl)如表1所示：2×Mix15μl，引物ITS4和ITS5各1μl，模板DNA1μl，超纯水补足至30μl。PCR反应条件：94℃预变性5min；94℃变性1min，54℃退火1min，72℃延伸2min，循环30次；72℃最终延伸8min。ITS扩增产物在1.0％的琼脂糖凝胶电泳上检测后，送到上海生工生物工程有限公司进行序列测定。所测序列结果如SEQIDNo.1。将所得的序列结果在美国国立生物信息中心(NCBI)进行比对，选择相似性较高的菌株序列作为参比菌株，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一株灵芝属菌株(Ganoderma sp.)CZ06，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCC NO:M 2019258。/n

【技术特征摘要】
1.一株灵芝属菌株(Ganodermasp.)CZ06，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号：CCTCCNO:M2019258。


2.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈强，曹舒蕾，刘轶豪，彭志立，陈琪川，张凌子，赵珂，余秀梅，向泉桔，辜运富，
申请(专利权)人：四川农业大学，
类型：发明
国别省市：四川;51