一种葡萄糖氧化酶修饰的金属有机框架药物组合物的制备方法技术

本发明专利技术一种葡萄糖氧化酶修饰的金属有机框架药物组合物的制备方法，所述的金属有机框架为铈基MOF（Ce‑MOF），合成的Ce‑MOF在氮气保护煅烧的条件下进行碳化，将葡萄糖氧化酶通过酰胺键反应修饰在Ce‑MOF的表面，最后在Ce‑MOF的内部物理负载抗肿瘤药物，得粒径为150‑250nm葡萄糖氧化酶修饰的金属有机框架药物组合物，本发明专利技术制备方法稳定可靠，成本低，制得的葡萄糖氧化酶修饰的金属有机框架药物组合物在制备抗肿瘤药物方面可发挥三重打击交互综合治疗肿瘤的作用，增强抗肿瘤效果，是肿瘤治疗药物上的创新，经济和社会效益巨大。

Preparation method of a glucose oxidase modified metal organic framework pharmaceutical composition

【技术实现步骤摘要】
一种葡萄糖氧化酶修饰的金属有机框架药物组合物的制备方法
本专利技术涉及生物医药领域，特别是一种葡萄糖氧化酶修饰的金属有机框架药物组合物的制备方法。
技术介绍
近些年来，金属有机框架（Metalorganicframeworks,MOF）不仅被应用在传统的储存、分离和催化领域，也被深入研究在生物医学应用，比如成像和癌症治疗或作为生物传感器材料的用途，MOF具有可调尺寸、高表面积、大内部孔体积的优点，可成为优异的药物载体，且表面具有功能化官能团进而利于修饰大分子；其中，铈基MOF（Ce-MOF）中含有过氧化物酶活性的氧化铈（CeO2）纳米颗粒，故在肿瘤弱酸性环境中可与过氧化氢（H2O2）发生类芬顿反应产生活性氧（Reactiveoxygenspecies,ROS）；然而，肿瘤部位的H2O2含量较低，使得ROS的产量较低，抗肿瘤活性较差，因此，提高内源性H2O2的含量是解决该问题的关键因素。与正常分化细胞依靠氧化磷酸化产能不同，肿瘤细胞在氧气充足的情况下优先利用糖酵解产能，该特殊代谢被称为“Warburg效应”；葡萄糖氧化酶（GOx）本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种葡萄糖氧化酶修饰的金属有机框架药物组合物的制备方法，其特征在于，所述的金属有机框架为铈基MOF（Ce-MOF），合成的Ce-MOF在氮气保护煅烧的条件下进行碳化，将葡萄糖氧化酶通过酰胺键反应修饰在Ce-MOF的表面，最后在Ce-MOF的内部物理负载抗肿瘤药物，得粒径为150-250nm葡萄糖氧化酶修饰的金属有机框架药物组合物，具体包括以下步骤：/n（1）将280-290 mg的对苯二甲酸溶解到5-10 mL的N,N-二甲基甲酰胺溶剂中，称取930-940mg的硝酸铈铵溶于5-10 mL的超纯水中成硝酸铈铵水溶液，密封，将对苯二甲酸的N,N-二甲基甲酰胺溶液与硝酸铈铵水溶液混合，于90-...

【技术特征摘要】
1.一种葡萄糖氧化酶修饰的金属有机框架药物组合物的制备方法，其特征在于，所述的金属有机框架为铈基MOF（Ce-MOF），合成的Ce-MOF在氮气保护煅烧的条件下进行碳化，将葡萄糖氧化酶通过酰胺键反应修饰在Ce-MOF的表面，最后在Ce-MOF的内部物理负载抗肿瘤药物，得粒径为150-250nm葡萄糖氧化酶修饰的金属有机框架药物组合物，具体包括以下步骤：
（1）将280-290mg的对苯二甲酸溶解到5-10mL的N,N-二甲基甲酰胺溶剂中，称取930-940mg的硝酸铈铵溶于5-10mL的超纯水中成硝酸铈铵水溶液，密封，将对苯二甲酸的N,N-二甲基甲酰胺溶液与硝酸铈铵水溶液混合，于90-110℃油浴下搅拌15-20min，10000-15000rpm离心10min取沉淀，沉淀先用N,N-二甲基甲酰胺洗3-5次，除去多余的对苯二甲酸，再用丙酮洗3-5次，除去残留的N,N-二甲基甲酰胺，70℃下烘干24h，研磨成过100-120目筛的白色粉末，得Ce-MOF；
（2）将步骤（1）所制备的Ce-MOF在氮气保护下煅烧，以4-6℃/min升温至390-410℃，煅烧3-5h，冷却至20℃以下，得煅烧后碳化的Ce-MOF；
（3）将10-20mg煅烧后碳化的Ce-MOF溶于10-15mL的溶剂中，探头超声使分散均匀，得白色混悬液；另取1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐15-20mg、N-羟基琥珀酰亚胺10-15mg分别溶于3mL的溶剂中，再取葡萄糖氧化酶（GOx）5-10mg溶于4mL的溶剂中，配好溶液；将Ce-MOF溶液、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液、N-羟基琥珀酰亚胺溶液依次加入到100mL圆底烧瓶中，再加2-4mL溶剂，室温搅拌20-40min，加入葡萄糖氧化酶溶液，再加5-10mL的溶剂，室温搅拌反应24h，反应结束后，10000-15000rpm离心10min，弃去上清液，用PH为7.2-7.4的PBS洗涤沉淀，重复离心洗涤3-5次，将沉淀洗至中性，于30-40℃烘干，研磨成过100-120目筛的粉末，得Ce-MOF-GOx；
所述的溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、PH为7.2-7.4的PBS或MES的一种；
（4）将0.5-2mg的Ce-MOF-GOx与1mg的小分子化疗药物分散于3-5mL甲醇和水的混合液中，甲醇与水的体积比为1:1，室温、避光下，2000-2400rpm搅拌24h，反应结束后，10000-15000rpm离心10min弃去上清液，得沉淀，沉淀用3-5mL甲醇与水的体积比为1:1的混合液洗三次，随后用超纯水洗四次，烘干，即得葡萄糖氧化酶修饰的负载小分子化疗药物的Ce-MOF药物组合物，所述的小分子化疗药物为阿霉素、紫杉醇、多烯紫杉醇、羟基喜树碱或米托蒽醌。


2.根据权利要求1所述的葡萄糖氧化酶修饰的金属有机框架药物组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将285mg的对苯二甲酸溶解到7mL的N,N-二甲基甲酰胺溶剂中，称取935mg的硝酸铈铵溶于7mL的超纯水中成硝酸铈铵水溶液，密封，将对苯二甲酸的N,N-二甲基甲酰胺溶液与硝酸铈铵水溶液混合，于100℃油浴下搅拌17min，12500rpm离心10min取沉淀，沉淀先用N,N-二甲基甲酰胺洗4次，除去多余的对苯二甲酸，再用丙酮洗4次，除去残留的N,N-二甲基甲酰胺，70℃下烘干24h，研磨成过110目筛的白色粉末，得Ce-MOF；
（2）将步骤（1）所制备的Ce-MOF在氮气保护下煅烧，以5℃/min升温至400℃，煅烧4h，冷却至20℃，得煅烧后碳化的Ce-MOF；
（3）将15mg煅烧后碳化的Ce-MOF溶于12.5mL的N,N-二甲基甲酰胺中，探头超声使分散均匀，得白色混悬液；另取1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐17.5mg、N-羟基琥珀酰亚胺12.5mg分别溶于3mL的N,N-二甲基甲酰胺中，再取葡萄糖氧化酶（GOx）7.5mg溶于4mL的N,N-二甲基甲酰胺中，配好溶液；将Ce-MOF溶液、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐溶液、N-羟基琥珀酰亚胺溶液依次加入到100mL圆底烧瓶中，再加3mLN,N-二甲基甲酰胺，室温搅拌30min，加入葡萄糖氧化酶溶液，再加7.5mL的N,N-二甲基甲酰胺，室温搅拌反应24h，反应结束后，12500rpm离心10min，弃去上清液，用PH为7.3的PBS洗涤沉淀，重复离心洗涤4次，将沉淀洗至中性，于35℃烘干，研磨成过110目筛的粉末，即得Ce-MOF-GOx；
（4）将1.25mg的Ce-MOF-GOx与1mg的阿霉素分散于4mL甲醇和水的混合液中，甲醇与水的体积比为1:1，室温、避光下，2200rpm搅拌24h，反应结束后，12500rpm离心10min得沉淀，沉淀用4mL甲醇与水的体积比为1:1的混合液洗三次，随后用超纯水洗四次，烘干，即得葡萄糖氧化酶修饰的负载阿霉素的Ce-MOF药物组合物。


3.根据权利要求1所述的葡萄糖氧化酶修饰的金属有机框架药物组合物的制备方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯倩华，郝雨桐，王宁，王泽颖，张雪莉，张振中，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：河南;41