一种茶树蜜的鉴别方法技术

本发明专利技术涉及一种茶树蜜的鉴别方法，属于食品安全质量控制领域。本发明专利技术的目的在于针对目前冒充茶树蜜问题，找到一种准确、简单而快速的茶树蜜鉴别检测方法。为了实现上述发明专利技术目的，本发明专利技术公开了一种茶树蜜的鉴别方法，包括样品前处理和高效液相色谱检测二个步骤。该方法是以茶氨酸为茶树蜜特征性标志物的液相色谱检测法。

Identification of tea honey

【技术实现步骤摘要】
一种茶树蜜的鉴别方法
本专利技术涉及一种蜂蜜的鉴别方法，特别是来自于茶树花蜜为蜜源的茶树蜜的检测方法，属于食品质量安全控制

技术介绍
茶树是我国南方的主要经济作物，每年开花时间从九月到十二月，盛花期在十月中下旬至十一月上中旬。茶树花期长，蜜流量大，是冬季少有的蜜源植物之一。茶树开花时，花蜜汁液外溢，香气发散，引诱蜜蜂等昆虫前来采蜜，帮助传粉。蜜蜂将采回的茶树花蜜进行生物化学反应，酿造加工成蜂蜜，即茶树蜜。蜜蜂在冬季酿造的蜂蜜也统称为冬蜜。由于冬季空气湿度相对小，巢蜜浓度大，所以冬蜜含有更多的矿物质和营养成分，质量比普通春蜜更高。茶树蜜为单一花种的冬蜜，它不仅具有普通蜂蜜的一般营养成分，还带有茶花的特殊香气和滋味，价格也更高。蜂蜜产业链的质量安全与品质控制直接关系到人民身体健康，对蜂蜜的辨识意义重大。对单一花种蜂蜜的鉴别通茶通过检测蜂蜜中来自蜜源植物花不同形态的花粉比例来实现。然而蜜蜂采集花蜜时候的周边环境、蜜源植物的品种、以及蜜蜂的采集习惯等等都会影响天然蜂蜜中花粉的数量和形态，导致鉴定蜂蜜的可靠性降低。另外的方法就是针对蜂蜜中某一种或某一类或某几类特殊物质如糖类、酚类、蛋白质和挥发成分的存在，借助色谱、光谱、稳定碳同位素、核磁共振等仪器进行测定，在此基础上建立模型，再对目标蜂蜜进行检测，通过数据比对，做出判断。在这方面我国已经公开46项专利涉及到不同蜜源植物蜂蜜的判定。然而这些蜜源都没有包括茶树花，46项技术均未提出对蜜蜂采集茶树花蜜后酿造的茶树蜜的辨识方法。我们对茶树花蜜及其茶树蜜的化学成分进行了检测，如表1。结果发现，由蜜蜂采集茶树花蜜加工酿造的茶树蜜含有极为丰富的营养成分，包括可溶性糖、蛋白质、游离氨基酸、多酚、咖啡因等物质。更重要的是我们还发现茶树花蜜和茶树蜜的氨基酸组成中均出现了茶氨酸。茶氨酸又名N-乙基-L-谷氨酰胺，化学式为C7H14N2O3，分子量174.20，是仅仅存在于山茶科个别植物如茶树中的一种非蛋白质氨基酸，是茶叶中重要的呈味物质，因对人体神经系统具有很好的调节作用而受到广泛的关注。蜂蜜中氨基酸的主要提供者就是蜜源植物。茶氨酸是茶树花蜜特有的天然产物，可以断定茶树蜜中的茶氨酸来自于茶树花蜜。因此可以通过检测蜂蜜中是否含有茶氨酸来辨别它是否为茶树蜜。本专利技术将通过茶树蜜特有的化学成分茶氨酸的存在，提出茶树蜜的鉴定检测技术。表1茶树花蜜与茶树蜜中的基本化学成分μg/mL
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有技术缺乏对茶树蜜鉴别问题，而提出一种对蜜蜂采集茶树花蜜酿造制成的茶树蜜的快速而准确的判断方法。本专利技术提供了一种茶树蜜的鉴别方法，其以茶氨酸为茶树蜜特征标志物，对蜂蜜进行高效液相色谱(HPLC)检测，检测出茶氨酸的蜂蜜即为茶树蜜。为解决上述问题，本专利技术所采用的技术方案是这样的：一种茶树蜜的鉴别方法，包括如下步骤：1、样品前处理取2mL茶树蜜，用纯化水稀释5倍，涡旋溶解，通过分子量为3000Da的超滤膜，以除去蛋白质等大分子物质。滤液在进样前用0.45μm水相滤膜推滤。2、茶氨酸标准品溶液将茶氨酸标准品(L-茶氨酸，纯度≥99％)用纯化水配成0.20～0.30mg/mL溶液。进样前溶液用0.45μm水相滤膜推滤。3、检测(1)HPLC色谱条件色谱柱选用氨基酸分析专用柱；柱温为35℃±5℃；检测波长为209.00nm；流动相为100％纯化水；流速为0.5mL/min～1.0mL/min；检测时间为10min。(2)样品检测待流速和柱温稳定后，进行空白运行。首先加样茶氨酸标准溶液，获得茶氨酸标准图谱。然后在相同的色谱条件下加样测试液。测试液在与茶氨酸标准品相同的保留时间出峰即表明样品中含有茶氨酸。通过该方法可提高鉴别茶树蜜的准确度，杜绝假阳性茶树蜜的错误判断。附图说明图1是茶氨酸标准品的吸收光谱扫描图；图2是茶氨酸标准品的HPLC谱图；图3是茶树花蜜的HPLC谱图；图4是茶树蜜的HPLC谱图；图5是百花蜜的HPLC谱图。具体实施方式以下实施例用以说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。实施例1茶树蜜中特征性标志物茶氨酸的确定1、茶树花蜜、茶树蜜、其它蜂蜜以及茶氨酸标准物的获取茶树花蜜采集于黄山市某茶园；茶树蜜为采集本茶园花粉、花蜜酿造的蜜，由养蜂场蜂农出售。其它蜂蜜为购买的一种春蜜百花蜜，茶氨酸标准品为购买。2、茶氨酸特征谱图的确定(1)茶氨酸吸收光谱扫描将茶氨酸标准品溶液在全光谱分光光度仪上进行扫描范围为190.0～400.00nm的光谱扫描，光谱带宽设为2.00nm，扫描间隔0.10nm。旨在获得茶氨酸的最高吸收峰值。扫描后可以看出茶氨酸的最高吸收峰在209.10nm，因此可以选择209.00nm作为HPLC的检测波长。茶氨酸吸收光谱见附图1。(2)茶氨酸的HPLC谱图设置HPLC的检测参数，色谱柱为大连依利特Elite～AAK氨基酸分析专用柱；柱温为40℃；检测波长为209.00nm；流动相为100％纯化水；流速为0.5mL/min。将茶氨酸标准品加样，运行10min。得到茶氨酸标准品的HPLC谱图(附图2)，它在保留时间为4.8min时候出现峰，为茶氨酸的峰。(3)样品的HPLC谱图为了尽可能呈现较多蜜源植物的氨基酸组成，选择了产于春季的百花蜜作为对照样品。将茶树花蜜、茶树蜜以及百花蜜用纯化水稀释5倍，超滤膜超滤净化后用HPLC进行检测。得到各个样品的HPLC谱图(附图3，茶树花蜜的HPLC谱图；附图4，茶树蜜的HPLC谱图；附图5，百花蜜的HPLC谱图)。通过与标准品茶氨酸HPLC谱图对比，茶树花蜜和茶树蜜HPLC谱图中均出现了相同保留时间(4.8min)的蜂，说明它们均含有茶氨酸，而百花蜜HPLC谱图中在相同保留时间没有出峰，说明百花蜜不含有茶氨酸。百花蜜虽然由多种蜜源植物花蜜加工而成，但因为是春蜜，茶树尚未开花，所以不含有茶氨酸。因此确认茶氨酸是茶树蜜区别于其他蜂蜜的特征性差异物质，可以使用茶氨酸作为茶树蜜的特征性标志物。实施例2茶树蜜中茶氨酸检测方法的确定1、样品前处理取2mL茶树蜜，用纯化水稀释5倍，通过分子量为3000Da的超滤膜，以除去蛋白质等大分子物质。滤液在进样前用0.45μm水相滤膜推滤。2、试剂(1)茶氨酸标准品：L-茶氨酸，纯度≥99％。称取0.01g茶氨酸，用水溶解后移入10mL容量瓶中，稀释至刻度，混匀，此溶液每毫升含1mg茶氨酸，为茶氨酸标准储备溶液。此溶液保存在冰箱冷藏，有效期为一年。准确吸取以上茶氨酸标准储备溶液0.3mL，用水定容至10mL，得到浓度为0.03mg/mL的茶氨酸标准溶液。过0.45μm水相滤膜。(2)HPLC流动相：纯化水，为国标GB/T6682规定的三级本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种茶树蜜的鉴别方法，其特征在于，以L-茶氨酸为茶树蜜特征标志物，对蜂蜜进行检测，检测出L-茶氨酸的蜂蜜即为茶树蜜。/n

【技术特征摘要】
1.一种茶树蜜的鉴别方法，其特征在于，以L-茶氨酸为茶树蜜特征标志物，对蜂蜜进行检测，检测出L-茶氨酸的蜂蜜即为茶树蜜。


2.如权利要求1所述的鉴别方法，其特征在于，该方法以高效液相色谱法进行检测。


3.如权利要求1-2任一项所述的鉴别方法，其特征在于，其中液相色谱的分离条件为：色谱柱选用氨基酸专用柱；柱温为30℃～40℃；检测波长为209.00nm；流动相为100％纯化水；流速为0.5mL/min～1.0mL/min；检测时间为10min。


4.如...

【专利技术属性】
技术研发人员：马雪泷，陈阳，马寅集，房江育，钱小琳，
申请(专利权)人：宁波奉源生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33