一种胶原的提取方法技术

本发明专利技术公开一种胶原的提取方法，包括：提供经预处理后的动物胎皮，得到预制件；将所述预制件经过脂肪处理剂浸泡处理，并用梯度浓度的酒精进行清洗，进行脱脂处理；将所述脱脂处理后的预制件，在酶消化液中进行消化处理；将所述消化处理后的混合物进行过滤、溶解、盐析、透析，得到胶原。本发明专利技术提供的方法在使用动物胎皮进行胶原提取时，能够提高胶原的收率，易操作，成本低。

A method of collagen extraction

【技术实现步骤摘要】
一种胶原的提取方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种胶原的提取方法。
技术介绍
胶原是由动物细胞合成的一种具有三股超螺旋结构的高分子蛋白，具有良好的生物学特性，是结缔组织的主要结构蛋白。在牛、猪和羊等动物真皮中，约70％是胶原。动物真皮中的胶原提取纯化后可作为组织的支持物，对细胞、组织乃至器官行使正常功能，并对外伤修复有很好的辅助效果。相对于其他年龄段的动物真皮中提取的胶原，胎皮(包含胎牛皮、胎猪皮和胎羊皮等)具有胶原稳定、易提取、胶原含量较高等优点，所以更适用于美容填充、细胞支架、矫形、组织损伤修复、创面止血等生物医用材料领域。胎皮在提取胶原时，虽然比成年动物皮毛的预处理容易，但是在其他步骤中如果控制不当会导致胶原提取的不充分，损耗胶原，且胎皮相对成本较高，如果胶原提取不充分，整个损失较大。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供一种胶原的提取方法，在使用动物胎皮进行胶原提取时，能够提高胶原的收率，易操作，成本低。本专利技术的目的主要由原材料前处理-脱脂-消化-纯化等技术实现，其详细步骤如下：提供经预处理后的动物胎皮；将所述预制件经过脂肪处理剂浸泡处理，并用梯度浓度的酒精进行清洗，进行脱脂处理；将所述脱脂处理后的预制件，在酶消化液中进行消化处理；将所述消化处理后的混合物进行过滤、溶解、盐析、透析，得到胶原。优选的，所述预处理具体为：将动物胎皮进行1～2次盐洗后，再去除残留盐水；将盐洗后的动物胎皮在碱性溶液中碱洗1～8h，并洗涤至中性；将所述碱洗后的动物胎皮进行反复的冷冻解冻操作，并去除表皮和皮下脂肪；将去除表皮和皮下脂肪的动物胎皮在缓冲溶液中进行缓冲清洗，然后再洗涤至中性；将缓冲清洗后的动物胎皮进行反复冷冻解冻操作，得到预制件。优选的，所述预处理中原料与预处理液体总重的重量比预处理夜过量。优选的，所述脱脂处理具体为：将所述预制件在脂肪酶和/或有机溶剂浸泡处理，然后在梯度酒精中浸泡，浸泡后进行清洗；优选的，所述预制件与脂肪酶或有机溶剂的体积比为1：5。优选的，所述梯度酒精浸泡具体为，在体积浓度为98％酒精重浸泡4～8h，在体积浓度为60-70％酒精重浸泡2～6h，在体积浓度为20～40％酒精中浸泡0.5～2h。优选的，所述有机溶剂选自乙醇、氯仿、乙醚、或丙酮。优选的，所述消化处理具体为：在超声波环境中，将脱脂处理后的预制件在酶消化液浸泡直至消化完全；所述脱脂处理后的预制件与所述酶消化液的重量比为1:5-15。优选的，所述酶消化液选自，pH值为2.0-3.0的胃蛋白酶的酸性溶液。优选的，将消化处理后的混合物用50-200目滤网过滤去除未消化组织和杂质；并加入盐直至盐完全溶解，盐析15-30小时；排出下清将析出胶原加入透析袋(10-80KD)中透析5-10天，每天换液2-3次，得到纯化后的胶原。本专利技术提供了一种胶原的提取方法，包括，提供经预处理后的动物胎皮，得到预制件；将所述预制件经过脂肪处理剂浸泡处理，并用梯度浓度的酒精进行清洗，进行脱脂处理；将所述脱脂处理后的预制件，在酶消化液中进行消化处理；将所述消化处理后的混合物进行过滤、溶解、盐析、透析，得到胶原。本专利技术以毛发尚未成形的胎皮做原材料可提出相对稳定、纯度较高的胶原。利用碱及高浓度盐使胎皮反复溶胀及冻融的方法，可明显使胎皮分为三层即(表皮、真皮和皮下脂肪)可用刮棒快速除去表皮和皮下脂肪留取真皮以便胶原蛋白的提取，与此同时，此方法还可有效的去除非胶原杂蛋白，并通过增加脂肪处理剂和酶消化液，提高胶原的纯度和收率。选用适当的超声时间及功率辅助酶法可有效提高胶原蛋白提取效率，节省胶原消化提取时间，得到的胶原最大程度地保持了其天然结构适合用作生物医用材料。具体实施方式为了使本领域的技术人员更好地理解本专利技术的技术方案，下面结合具体实施方式对本专利技术作进一步的详细说明。为了进一步详细说明本专利技术技术方案，具体的胶原提取步骤如下：本专利技术具体实施方式中提到的收率是指胶原的重量和原料重量的比例。为了解决本专利技术的技术问题，本专利技术提供了一种胶原的提取方法，提供经预处理后的动物胎皮，得到预制件；将所述预制件经过脂肪处理剂浸泡处理，并用梯度浓度的酒精进行清洗，进行脱脂处理；将所述脱脂处理后的预制件，在酶消化液中进行消化处理；将所述消化处理后的混合物进行过滤、溶解、盐析、透析，得到胶原。预处理是对皮毛上的杂质，毛发进行清洗并且将脂肪层和真皮层以及胶原进行分离的步骤，是为后续进行脱脂、消化和纯化的步骤提供良好基础的先决条件，又由于本专利技术提供的是动物胎皮，所以毛发较软且真皮层和脂肪较少，相对发育不成熟，在预处理过程中，虽然条件要求并不苛刻，但是要谨慎处理，防止对动物胎皮胶原的破坏。本专利技术预处理步骤具体为：将动物胎皮进行1～2次盐洗后，再去除残留盐水；将盐洗后的动物胎皮在碱性溶液中碱洗1～8h，并洗涤至中性；将所述碱洗后的动物胎皮进行反复的冷冻解冻操作，并去除表皮和皮下脂肪；将去除表皮和皮下脂肪的动物胎皮在缓冲溶液中进行缓冲清洗，然后再洗涤至中性；将缓冲清洗后的动物胎皮进行反复冷冻解冻操作，得到预制件。其中，所述盐洗优选使用氯化钠(NaCl)水溶液，能够有效清洗胎皮表面的杂质，并且具有一定的溶胀作用，使动物胎皮脱水。所述NaCl的浓度优选为0.2～0.5M/L，更优选为0.3～0.4M/L。洗涤时间优选1～5h，更优选为2～4h，所述盐洗优选先清洗一次，倒掉清洗液，换新的氯化钠水溶液，重复清洗，清洗过程中不断进行搅拌。盐洗后，优选用去离子水除去所述动物胎皮表面残留的氯化钠水溶液，在碱性溶液中碱洗，所述碱性水溶液优选为氢氧化钠NaOH，所述氢氧化钠水溶液的浓度为0.05～0.5M/L，更优选为0.08～0.2M/L。碱洗时间优选为1～8h，更优选为2～6h，碱洗一次完成后，换新的氢氧化钠水溶液再重复碱洗2次，清洗过程中不断进行搅拌。碱洗完成后，用去离子水，洗涤至中性。在碱洗完成后，还优选使用NaCl-Tris-HCl水溶液清洗所述动物胎皮，所述NaCl-Tris-HCl水溶液的浓度优选为1～5M/L，清洗时间优选为1～3h，优选重复冲洗1～2次，再用去离子水清洗至中性。这里使用缓冲溶液的目的是为了更进一步的去除残留的细胞组织。第一次缓冲液冲洗完后，在-90℃～-70℃冻存10-18小时后取出解冻，如此反复冻融共2次，最后一次解冻后刮去表皮和皮下脂肪，注意不能破坏胶原，所以在刮去表皮和皮下脂肪时，需要很小心。最后一次解冻以后再次加入NaCl-Tris-HCl水溶液进行第二次缓冲清洗，所述NaCl-Tris-HCl水溶液的浓度优选为1～5M/L，清洗时间优选为1～3h，优选重复冲洗1～2次，再用去离子水清洗至中性。这里使用缓冲溶液的目的是为了更进一步的去除残留的细胞组织。优选的，第二次缓冲冲洗后，将所述动本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胶原的提取方法，其特征在于，包括：/n提供经预处理后的动物胎皮，得到预制件；/n将所述预制件经过脂肪处理剂浸泡处理，并用梯度浓度的酒精进行清洗，进行脱脂处理；/n将所述脱脂处理后的预制件，在酶消化液中进行消化处理；/n将所述消化处理后的混合物进行过滤、溶解、盐析、透析，得到胶原。/n

【技术特征摘要】
1.一种胶原的提取方法，其特征在于，包括：
提供经预处理后的动物胎皮，得到预制件；
将所述预制件经过脂肪处理剂浸泡处理，并用梯度浓度的酒精进行清洗，进行脱脂处理；
将所述脱脂处理后的预制件，在酶消化液中进行消化处理；
将所述消化处理后的混合物进行过滤、溶解、盐析、透析，得到胶原。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述预处理具体为：
将动物胎皮进行1～2次盐洗后，再去除残留盐水；
将盐洗后的动物胎皮在碱性溶液中碱洗1～8h，并洗涤至中性；
将所述碱洗后的动物胎皮进行反复的冷冻解冻操作，并去除表皮和皮下脂肪；
将去除表皮和皮下脂肪的动物胎皮在缓冲溶液中进行缓冲清洗，然后再洗涤至中性；
将缓冲清洗后的动物胎皮进行反复冷冻解冻操作，得到预制件。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述预处理中原料与所有预处理液的体重比为预处理液过量。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述脱脂处理具体为：
将所述预制件在脂肪酶和/或有机溶剂浸泡处理，然后在梯度酒精中浸泡，浸泡后进行清洗。


5....

【专利技术属性】
技术研发人员：岳崇霞，宋磊，
申请(专利权)人：成都奇璞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51