The invention provides a method for preparing human shaped endoderm cells, which belongs to the technical field of stem cell induction and regeneration. The method of the invention is to clone the GdF3 gene into a lentivirus vector and package the lentivirus; infect the packed lentivirus with human pluripotent stem cells and obtain a stable expression cell line through resistance screening; use small molecules to induce the cell line to differentiate into endodermic cells. The endoderm cell prepared by the invention is induced by GdF3, has low cost and is easy to operate, can be used for preparing endoderm derived cells, and is applied to tissue engineering, with broad application prospect.
【技术实现步骤摘要】
一种制备人定型内胚层细胞的方法
本专利技术属于干细胞诱导与再生医疗
，具体地说，涉及一种制备人定型内胚层细胞的方法。
技术介绍
干细胞由于具有强大的增殖能力和分化为各种体细胞的潜能，因此是一种新的细胞来源，可以应用于再生医疗和组织工程。多潜能干细胞由于具有分化的全能性，其无限的增殖能力和发育为所有体细胞的能力也都得到充分证明，因此是一种非常有前景的细胞来源。人多潜能干细胞包括人胚胎(ES)干细胞和诱导多潜能(iPS)干细胞，其分化产生的内胚层细胞可以进一步发育为肝脏、肺、胰腺、肠和胃，因此在治疗脏器疾病或者开发相关的药物上有着广泛的用途。内胚层细胞包括定型内胚层和胚外内胚层，能够定型发育为肝脏、肺、胰腺、肠和胃等组织的干细胞内胚层，称为定型内胚层细胞。转化生长因子beta(TransformingGrowthFactorbeta，TGFb)超家族成员包括TGF-beta蛋白,骨形成蛋白(BoneMorphogeneticProteins，BMPs),生长分化因子蛋白(GrowthDifferentiat...
【技术保护点】
1.一种制备人定型内胚层细胞的方法，其特征在于，在人诱导多潜能干细胞或者分化早期的多潜能干细胞中表达或过表达GDF3基因。/n
【技术特征摘要】
1.一种制备人定型内胚层细胞的方法，其特征在于，在人诱导多潜能干细胞或者分化早期的多潜能干细胞中表达或过表达GDF3基因。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述GDF3基因的cDNA序列具有以下：
(a)SEQIDNO.2所示的核苷酸序列，或
(b)SEQIDNO.2所示的核苷酸序列经一个或多个核苷酸的替换、缺失或插入形成的与SEQIDNO.2所示序列编码相同功能蛋白序列；或
(c)在严格条件下能够与如(a)或(b)所述的核苷酸序列杂交并编码相同功能蛋白的核苷酸序列。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)构建含有GDF3基因的表达盒，将表达盒连接至载体，构建含有GDF3基因表达盒的载体，所述表达盒含有或不含有强启动子；或将GDF3基因插入慢病毒载体中，并对慢病毒载体进行包装；
(2)将步骤(1)的载体转入人诱导多潜能干细胞或者分化早期的多潜能干细胞，并加抗生素筛选，获得稳定整合的干细胞；
(3)将步骤(2)的细胞加入小分子，诱导分化为人定型内胚层细胞。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的慢病毒载体为Tetone-Modifed，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述慢病毒载体Tetone-Modifed通过以下方法制备得到，以pLVX-TetOne-Puro质粒为骨架载体，去除了pLVX-TetOne-Puro质粒上一段SV40polyAsignal序列，并且将启动嘌呤霉素表达的SV40启动子更...
【专利技术属性】
技术研发人员：周云卿，陈昱安，刘凤林，孙浩，蔡军，
申请(专利权)人：北京协同创新研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11
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