一种催化效率提高的内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶突变体制造技术

本发明专利技术公开了一种催化效率提高的内消旋‑二氨基庚二酸脱氢酶突变体，属于基因工程技术领域。本发明专利技术通过对SEQ ID NO.2的内消旋—二氨基庚二酸脱氢酶进行单点/双位点突变，并在大肠杆菌中成功表达并纯化出突变体酶D94A、W123K、D94A/W123K、W148K，通过酶活测定，发现所述三种内消旋—二氨基庚二酸脱氢酶突变体具有相对于野生型较高的催化活性，如突变体酶DAPDH‑D94A、DAPDH‑W123K、DAPDH‑D94A/W123K催化苯丙酮酸的效率分别提高了3.5、1.5、1.3倍，成功提高了关键酶的酶活。

A racemic diaminoheptanoate dehydrogenase mutant with improved catalytic efficiency

The invention discloses an internal racemic \u2011 diaminoheptanate dehydrogenase mutant with improved catalytic efficiency, belonging to the technical field of gene engineering. The invention successfully expresses and purifies mutant enzymes d94a, w123k, d94a / w123k and w148k in E The catalytic efficiency of H \u2011 d94a, dapdh \u2011 w123k and dapdh \u2011 d94a / w123k for phenylpyruvic acid increased by 3.5, 1.5 and 1.3 times respectively, and the enzyme activity of the key enzyme was successfully increased.

【技术实现步骤摘要】
一种催化效率提高的内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶突变体
本专利技术涉及一种催化效率提高的内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶突变体，属于基因工程

技术介绍
D-苯丙氨酸在食品、工业、农业、生物医药等方面有着很大的应用价值，如用于治疗糖尿病的雷奈酸锶干混悬剂、用于治疗糖尿病的那格列奈片等。内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶(DAPDH，EC1.4.1.16)已被广泛用于D型芳香族氨基酸如D-苯丙氨酸的制备(AkitaH,etal.Highlystablemeso-diaminopimelatedehydrogenasefromanUreibacillusthermosphaericusstrainA1isolatedfromaJapanesecompost:purification,characterizationandsequencing.AMBExpress,2011,1:43)。并且已有部分研究对内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶进行了定点突变改造其性质，都集中改造位于底物催化区域附近、酶表面或特定的氨基酸残基，如ParmeggianiF等选择了150位谷氨酰本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶突变体，其特征在于，所述突变体为(a)或(b)或(c)：/n(a)含有SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列；/n或，(b)含有SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列；/n或，(c)含有SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶突变体，其特征在于，所述突变体为(a)或(b)或(c)：
(a)含有SEQIDNO.2所示的氨基酸序列；
或，(b)含有SEQIDNO.4所示的氨基酸序列；
或，(c)含有SEQIDNO.6所示的氨基酸序列。


2.编码权利要求1所述内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶突变体的基因。


3.携带权利要求2所述基因的载体。


4.如权利要求3所述的载体，其特征在于，所述载体为pET系列载体。


5.一种提高内消旋-二氨基庚二酸脱氢酶催化活性的方法，其特征在于，是在SEQIDNO.2的基础上，将第94位天冬氨酸替换为丙氨酸，或/和将第123位色氨酸突变成赖氨酸。


6.表达权利要求1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：饶志明，陈佳杰，徐美娟，杨套伟，张显，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32