一种用于检测末梢血的25-羟基维生素D试剂盒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种用于检测末梢血的25‑羟基维生素D试剂盒及其制备方法和应用，该试剂盒包括25羟基维生素D免疫层析检测卡和释放剂，所述25‑羟基维生素D免疫层析检测卡包括试纸条，所述试纸条包括检测线及质控线，所述检测线上包被有25‑羟基维生素D完全抗原，所述质控线上包被有羊抗兔多克隆抗体。本发明专利技术所提供的25‑羟基维生素D试剂盒灵敏度高、稳定性强、线性范围宽，具有优异的准确性和精密度。

A 25 hydroxyvitamin D kit for detecting peripheral blood and its preparation and Application

The invention relates to a 25 \u2011 hydroxyvitamin D kit for detecting peripheral blood and its preparation method and application. The kit comprises a 25 \u2011 hydroxyvitamin D immunochromatographic detection card and a releasing agent. The 25 \u2011 hydroxyvitamin D immunochromatographic detection card comprises a test strip, which comprises a detection line and a quality control line, and the detection line is covered with a 25 \u2011 hydroxyvitamin D complete antigen The quality control line is coated with Sheep anti rabbit polyclonal antibody. The 25 \u2011 hydroxyvitamin D kit provided by the invention has high sensitivity, strong stability, wide linear range, excellent accuracy and precision.

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测末梢血的25-羟基维生素D试剂盒及其制备方法和应用
本专利技术属于体外诊断领域，涉及一种用于检测末梢血的25-羟基维生素D试剂盒及其制备方法和应用。
技术介绍
维生素D为类固醇衍生物，属于脂溶性维生素，有调节钙磷代谢、影响细胞增殖分化等作用，是维持人体健康必不可少的一种类固醇激素。人体内的维生素D主要通过阳光照射后合成，只有少部分从食物中摄入，维生素D在体内出现的主要形式是25-羟基维生素D。维生素D的主要作用是调节磷、钙代谢，促进磷和钙在肠道内的吸收，以及肾小管重吸收磷钙的方式，来提高血液中的磷钙水平，钙化的方法，与降钙素、甲状腺激素以及其他的激素共同作用，使骨质变得坚硬。除了具有传统意义上的骨骼效应，还能够影响肿瘤、糖尿病、心血管疾病、自身免疫疾病等非骨骼效应。目前，临床上25-OH-D的检测常用方法有化学发光、胶体金免疫层析、酶联免疫法、电化学发光，这些检测方法大部分都需要对采集的全血样本进行处理，耗时较长，操作繁琐，所采用的血液样本需求量大且均为静脉血。然而对于婴幼儿、儿童、大面积烧伤等患者而言，采足需求量的血样较为困难且不易反复抽取静脉。相比之下，末梢血的采集操作简便、快捷，采血量较少，不需要专业人员操作，对人体造成的创伤较小，并且临床上的一些检测指标与静脉血没有差异，是较好的血液样本的来源。目前临床上，25-羟基维生素D的检测几乎很少采用末梢血进行检测。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的主要目的在于提供用于检测末梢血的25-羟基维生素D试剂盒及其制备方法和应用。为了实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：一种用于检测末梢血的25-羟基维生素D试剂盒，包括25羟基维生素D免疫层析检测卡和释放剂，所述25-羟基维生素D免疫层析检测卡包括试纸条，所述试纸条包括检测线及质控线，所述检测线上包被有25-羟基维生素D完全抗原，所述质控线上包被有羊抗兔多克隆抗体；1L的所述释放剂包括以下含量的各组分：154mg～771mg的二硫苏糖醇、0.1g～2g的十二烷基硫酸钠、2.92g～14.61g的乙二胺四乙酸、11.76g～29.41g的柠檬酸钠、12.9g～25.81g的柠檬酸三钠、10g～50g的乙醇，余量为蒸馏水。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述试纸条还包括PVC板，所述PVC板上固定有依次连接的样品垫、标记物垫、包被垫及吸水垫，所述包被垫上依次设有检测线及质控线，所述样品垫和标记物垫连接为一体。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述包被垫靠近检测线的一端连接有标记物垫，靠近质控线的一端连接有吸水垫。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述标记物垫上包被有羊抗25-羟基维生素D单克隆抗体标记的乳胶荧光微球和兔IgG标记的乳胶荧光微球，所述羊抗25羟基维生素D单克隆抗体标记的荧光乳胶微球和兔IgG标记的荧光乳胶微球的摩尔比为1:0.2～4。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述25-羟基维生素D检测卡还包括用于卡设试纸条的卡壳。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述卡壳包括：底槽，其连接于所述PVC板；上盖，其连接于所述底槽，所述上盖上设置有用于向所述样品垫上加样的加样孔；观察窗，其设置于上盖上并用于检测线和质控线的数据采集。一种用于检测末梢血的25-羟基维生素D试剂盒的制备方法，包括以下步骤：1)包被垫的制备：将25-羟基维生素D完全抗原和羊抗兔多克隆抗体分别包被到硝酸纤维素膜上，干燥备用；2)标记物垫的制备：将羊抗25羟基维生素D单克隆抗体标记的乳胶荧光微球和兔IgG标记的乳胶荧光微球混合后，喷涂在玻璃纤维素膜上，干燥备用；3)组装试纸条：在PVC板上粘接包被垫，并在靠近该包被垫上的质控线的一端搭接吸水垫，在靠近该包被垫上的检测线的一端搭接标记物垫及其连接的样品垫；然后将其切成所需宽度的试纸条，之后将该试剂条放入卡壳。一种用于检测末梢血的25-羟基维生素D试剂盒的使用方法，包括以下步骤：1)将所采取的血液样本与释放剂按照1～10:10的体积比进行稀释；2)取30～100μL步骤1)中稀释后的血液样本滴加到所述25-羟基维生素D检测卡的加样孔(对应试纸条的样品垫)中，室温静置5～20min，然后将25-羟基维生素D检测卡插入到荧光免疫分析仪进行检测，即时可获得检测结果。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述血液样本选自末梢血。在本专利技术的一个具体方案中，其中所述末梢血选自指尖血或耳垂血。本专利技术的有益效果：1、本专利技术所提供的25-羟基维生素D试剂盒，可用于静脉血(血清、血浆、全血)、末梢血的检测以及用于维生素D缺乏相关疾病的诊断，特别是能够进行末梢血的检测，样本用量小，检测在5～20min之内即可完成，线性检测范围为5ng/mL～120ng/mL，极大地提高了检测效率，能够有效解决婴幼儿、儿童、大面积烧伤患者采血难得问题。2、本专利技术所提供的25-羟基维生素D试剂盒，其灵敏度高、稳定性强、线性范围宽，具有优异的准确性和精密度。3、血液样本采用本专利技术中的释放剂稀释后，无需长时间等待，即可进行样本检测，操作简单，样本处理时间短，降低了时间成本，适用于临床快速诊断检测。4、本专利技术所提供的25-羟基维生素D试纸条，其样品垫和标记物垫连接为一体，制备简单，减少了繁琐的程序，降低试剂盒的生产成本。附图说明图1为本专利技术所提供的25-羟基维生素D免疫层析检测卡中试纸条示意图；图2A为本专利技术所提供的25-羟基维生素D免疫层析检测卡中一种上盖的内部结构示意图；图2B为本专利技术所提供的25-羟基维生素D免疫层析检测卡中一种底槽的内部结构示意图；图3为本专利技术25-羟基维生素D试剂盒检测过程示意图；图4为实施例1中25羟基维生素D的标准曲线示意图；图5为实施3中本专利技术25-OH-D试剂盒检测指尖末梢血与西门子25-OH-D试剂盒检测静脉血(血清)的检测结果的相关性图。图6为实施6中本专利技术25-OH-D试剂盒检测指尖末梢血与西门子25-OH-D试剂盒检测静脉血(血清)的检测结果的相关性图；其中，1-PVC板，2-包被垫，3-标记物垫，4-吸水垫，5-检测线，6-质控线，7-标记物结合处，8-样本，9-样品垫，11-上盖，12-底槽，13-加样孔，14-检测窗，15-试纸条放置区域，16-固定柱，17-定位孔，18-第一限定部，19-第二限定部，20-第三限定部，21-血液样本，22-释放剂，23-稀释后的血液样本，24-25-羟基维生素D检测卡，25-荧光免疫层析仪。具体实施方式为了进一步理解本专利技术，下面结合实施例对本专利技术优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为进一步说明本专利技术的特征和优点，而不是对本专利技术权利要求的限制。以下材料或试剂，除非特别说明，均为市售。实施例1：25-羟基维生素D(25-OH-D)试剂盒的制备1.本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测末梢血的25-羟基维生素D试剂盒，其特征在于，包括25羟基维生素D免疫层析检测卡和释放剂，所述25-羟基维生素D免疫层析检测卡包括试纸条，所述试纸条包括检测线及质控线，所述检测线上包被有25-羟基维生素D完全抗原，所述质控线上包被有羊抗兔多克隆抗体；1L的所述释放剂包括以下含量的各组分：154mg～771mg的二硫苏糖醇、0.1g～2g的十二烷基硫酸钠、2.92g～14.61g的乙二胺四乙酸、11.76g～29.41g的柠檬酸钠、12.9g～25.81g的柠檬酸三钠、10g～50g的乙醇、余量为蒸馏水。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于检测末梢血的25-羟基维生素D试剂盒，其特征在于，包括25羟基维生素D免疫层析检测卡和释放剂，所述25-羟基维生素D免疫层析检测卡包括试纸条，所述试纸条包括检测线及质控线，所述检测线上包被有25-羟基维生素D完全抗原，所述质控线上包被有羊抗兔多克隆抗体；1L的所述释放剂包括以下含量的各组分：154mg～771mg的二硫苏糖醇、0.1g～2g的十二烷基硫酸钠、2.92g～14.61g的乙二胺四乙酸、11.76g～29.41g的柠檬酸钠、12.9g～25.81g的柠檬酸三钠、10g～50g的乙醇、余量为蒸馏水。


2.如权利要求1所述的25-羟基维生素D试剂盒，其特征在于，所述试纸条还包括PVC板，所述PVC板上固定有依次连接的样品垫、标记物垫、包被垫及吸水垫，所述包被垫上依次设有检测线及质控线，所述样品垫和标记物垫连接为一体。


3.如权利要求2所述的25-羟基维生素D试剂盒，其特征在于，所述包被垫靠近检测线的一端连接有标记物垫，靠近质控线的一端连接有吸水垫。


4.如权利要求3所述的25-羟基维生素D试剂盒，其特征在于，所述标记物垫上包被有羊抗25-羟基维生素D单克隆抗体标记的乳胶荧光微球和兔IgG标记的乳胶荧光微球，所述羊抗25羟基维生素D单克隆抗体标记的荧光乳胶微球和兔IgG标记的荧光乳胶微球的摩尔比为1:0.2～4。


5.如权利要求1-4任一项所述的25-羟基维生素D试剂盒，其特征在于，所述25-羟基维生素D检测卡还包括用于卡设试纸条的卡壳。


6.如权利要求5所...

【专利技术属性】
技术研发人员：林斯，
申请(专利权)人：北京华科泰生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11