一种EV-D68型假病毒及其包装方法技术

本发明专利技术公开一种包装用于包装EV‑D68型假病毒的表达子质粒，所述EV‑D68型假病毒的表达子质粒命名为D68‑EGFP‑CAPSID质粒，所述重组表达质粒具有序列表中SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列；一种用于包装EV‑D68型假病毒的复制子质粒，所述EV‑D68型假病毒的复制子质粒命名为D68‑LUC‑REPLICON质粒，所述复制子质粒具有序列表中SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。进一步的，所述质粒含有D68病毒5’UTR,P2‑P3‑3’UTR基因和萤火虫荧光素酶报告基因(Luciferase)基因。本发明专利技术一种EV‑D68型假病毒及其包装方法成功包装出单周期感染的D68假病毒，该假病毒可以用来替代D68活病毒、没有使用活病毒时的安全问题，可应用于D68病毒的多种研究，对D68病毒的基础研究有着重要的应用价值。

A pseudovirus of ev-d68 and its packaging method

The invention discloses an expression plasmid for packaging the EV \u2011 d68 pseudovirus. The expression plasmid of the EV \u2011 d68 pseudovirus is named as the d68 \u2011 EGFP \u2011 capsid plasmid. The recombinant expression plasmid has the nucleotide sequence shown in the sequence table of SEQ ID No: 1; a replicator plasmid for packaging the EV \u2011 d68 pseudovirus. The replicator plasmid of the EV \u2011 d68 pseudovirus has the life Named d68 \u2011 Luc \u2011 reply plasmid, the replicon plasmid has the nucleotide sequence shown in SEQ ID No: 2 in the sequence table. Furthermore, the plasmid contains d68 virus 5'UTR, P2 \u2011 P3 \u2011 3'UTR gene and luciferase gene. The invention provides an EV \u2011 d68 pseudovirus and a packaging method for successfully packaging a single cycle infected d68 pseudovirus. The pseudovirus can be used to replace the d68 live virus and solve the safety problems when the live virus is not used. The pseudovirus can be applied to a variety of researches on d68 virus and has important application value for the basic research on d68 virus.

【技术实现步骤摘要】
一种EV-D68型假病毒及其包装方法
本专利技术涉及生物
，具体为一种EV-D68型假病毒及其包装方法。
技术介绍
肠道病毒D组68型(EnterovirusD68，EV-D68)属于人类肠道病毒D组，原名鼻病毒87型，为无包膜二十面立体对称球形颗粒，大小23-30nm，内含一条约7500个核苷酸的单股正链RNA。核酸包括一个开放阅读框，编码一个多聚前体蛋白，可进一步水解为P1-P3三个前体蛋白，P1前体蛋白切割后可形成VP1-VP4四个病毒衣壳蛋白，P2和P3前体蛋白可形成2A、2B、2C、3A、3B、3C、3D七个功能性蛋白。D68在1962年美国的小儿肺炎中初次分离和鉴定。2014年8月，D68病毒从美国中西部地区开始流行随后蔓延至全国各州，全美49个州共有1153人感染D68，确诊患者中死亡病例达14例，多为婴幼儿，成为史无前例的D68大流行。之后在美洲、欧洲、亚洲、非洲等国家和地区均有D68感染报道。D68感染症状与其他肠道病毒不同，D68导致急性呼吸系统感染，更严重的是多项研究表明D68感染会导致急性迟缓性脊髓炎(AcuteF本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于包装EV-D68型假病毒的表达子质粒，其特征在于：所述EV-D68型假病毒的表达子质粒命名为D68-EGFP-CAPSID质粒，所述重组表达质粒具有序列表中SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种用于包装EV-D68型假病毒的表达子质粒，其特征在于：所述EV-D68型假病毒的表达子质粒命名为D68-EGFP-CAPSID质粒，所述重组表达质粒具有序列表中SEQIDNO：1所示的核苷酸序列。


2.根据权利要求1所述的重组表达质粒，其特征在于：所述重组质粒使用绿色荧光蛋白报告基因(EGFP基因)，所述质粒含有D68病毒结构蛋白基因(P1基因)；所述EGFP基因和P1基因之间插入2A蛋白酶切割位点(-NIVTT-)。


3.根据权利要求1所述的重组表达质粒的构建方法，其特征在于：包含以下步骤：1)绿色荧光蛋白的基因序列与D68所有结构蛋白的基因序列拼接；2)并将2A蛋白酶的酶切位点插入之间；3)设计引物；
所述引物序列为：
D68-EGFP-FgggagACCCAAGCTGGCTAg
D68-EGFP-RCTAGTAACTTGAGCCCCCATaagggtagtaatggccttgtaCAGc
D68-P1-FacaaggccattactacccttATGGGGGCTCAAGTTACTAGACAAC
D68-P1-RtgatggtgatgatgaccggtttaATTGGTCACTAACCTGATATCATGAGGc。


4.一种用于包装EV-D68型假病毒的复制子质粒，其特征在于，所述EV-D68型假病毒的复制子质粒命名为D68-LUC-REPLICON质粒，所述复制子质粒具有序列表中SEQIDNO：2所示的核苷酸序列。


5.根据权利要求4所述的一种复制子质粒，其特征在于：所述质粒含有D68病毒5’UTR,P2-P3-3’UTR基因和萤火虫荧光素酶报告基因(Luciferase)基因。


6.根据权利要求4所述的一种复制子质粒，其特征在于：所述质粒萤火虫荧光素酶报告基因(Luciferase)基因与P2-P3-3’UTR基因之间插入2A蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：李克雷，董方玉，吴星，梁争论，崔力沙，孙世洋，崔博沛，毛群颖，高帆，卞莲莲，马超，
申请(专利权)人：中国食品药品检定研究院，
类型：发明
国别省市：北京;11