一种分离提取高纯度两性霉素B的方法技术

本发明专利技术涉及一种分离提取高纯度两性霉素B的方法。将烘干含有两性霉素B的菌丝体投入萃取罐并加入甲醇和盐酸水溶液调至PH＝3.0溶解两性霉素B，抽滤得到两性霉素B的提取液并过膜除去热源和大分子物质，然后在两性霉素B提取液中加入水和碱液调至PH＝6.0使其结晶沉淀，过滤得沉淀并干燥后获得高纯度两性霉素B固体。本发明专利技术采用固液分离去除发酵液中的杂质，提高了产品质量。通过超滤膜过滤热源和大分子物质和杂蛋白后进一步去除杂质，提高净化液质量。最后通过洗涤再次去除杂质，从而获得高纯度产品。所得产品颜色为浅黄色，纯度高，两性霉素B产品纯度为93％以上。

A method of separation and extraction of amphotericin B with high purity

The invention relates to a method for separating and extracting high purity amphotericin B. Put the dried mycelium containing amphotericin B into the extraction tank, add methanol and hydrochloric acid solution to adjust to pH = 3.0 to dissolve amphotericin B, extract amphotericin B by suction filtration, remove the heat source and macromolecular substances through the membrane, then add water and alkali solution to amphotericin B extraction solution to adjust to pH = 6.0 to make it crystallize and precipitate, filter to precipitate and dry to obtain high-purity amphotericin B solid Body. The invention adopts solid-liquid separation to remove impurities in the fermentation liquid and improves the product quality. After the heat source, macromolecular substance and heteroprotein are filtered by ultrafiltration membrane, the impurities are further removed and the quality of the purified liquid is improved. Finally, impurities are removed again by washing to obtain high-purity products. The purity of amphotericin B was over 93%.

【技术实现步骤摘要】
一种分离提取高纯度两性霉素B的方法(一)
本专利技术涉及一种分离提取高纯度两性霉素B的方法。(二)
技术介绍
两性霉素B(AmphotericinB，AmB)是由结节链霉菌(Streptomycesnodosus)产生的一种多烯大环内酯类抗生素，是一种黄色或橙黄色结晶粉。其菌株于1955年从委内瑞拉奥里诺科河三角洲的土样中收集分离获得，并发现其具有抗真菌活性。1959年，在结节链霉菌发酵液中提取获得AmB。1966年开始上市，已使用近半个世纪，目前仍然是临床上不可替代的抗真菌药物。AmB分子式C47H73NO17，分子量为924.09，结构式如下：两性霉素B是第一个用于深部真菌感染的药物，能有效抑制念珠菌、隐球菌和曲霉菌等大多数真菌，同时还具有有效的抗病毒、寄生虫药性，例如阮病毒、利什曼原虫等。AmB的抗真菌作用机制为：AmB能与真菌细胞膜上的麦角固醇结合，在膜上形成微孔，使膜的通透性发生改变，最终导致重要的细胞内容物K离子、核苷酸、氨基酸等无节制的流失而造成菌体死亡。然而AmB也会在较小程度上与哺乳动物细胞膜上的胆固醇本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分离提取高纯度两性霉素B的方法，所述方法包括：/n(1)将含有两性霉素B的发酵液固液分离得到两性霉素B菌丝体，烘干得到菌丝体；/n(2)烘干后的菌丝体投入萃取罐，加入甲醇，温度降至2～10℃，调节pH至3.0～4.0，搅拌1～2小时后固液分离，得到提取液；/n(3)提取液通过截留分子量为5000～30000 Da的超滤膜，除去热源、杂蛋白和色素等大分子量杂质后得到两性霉素B净化液；/n(4)两性霉素B净化液加入结晶罐，调节pH至5.0～6.5，升温至20～25℃，保温1～2小时待结晶完成，固液分离，得到高纯度两性霉素B结晶粉；/n(5)两性霉素B结晶粉加入甲醇洗涤，洗涤后固液分离烘干粉...

【技术特征摘要】
1.一种分离提取高纯度两性霉素B的方法，所述方法包括：
(1)将含有两性霉素B的发酵液固液分离得到两性霉素B菌丝体，烘干得到菌丝体；
(2)烘干后的菌丝体投入萃取罐，加入甲醇，温度降至2～10℃，调节pH至3.0～4.0，搅拌1～2小时后固液分离，得到提取液；
(3)提取液通过截留分子量为5000～30000Da的超滤膜，除去热源、杂蛋白和色素等大分子量杂质后得到两性霉素B净化液；
(4)两性霉素B净化液加入结晶罐，调节pH至5.0～6.5，升温至20～25℃，保温1～2小时待结晶完成，固液分离，得到高纯度两性霉素B结晶粉；
(5)两性霉素B结晶粉加入甲醇洗涤，洗涤后固液分离烘干粉碎得到两性霉素B成品。


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【专利技术属性】
技术研发人员：柳志强，张博，郑裕国，陈燏，张雨涵，姜圣贤，黄恺，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33