一种CTL细胞的制备方法及应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体涉及一种CTL细胞的制备方法及应用。所述方法包括以下步骤：采用肿瘤抗原PAP‑GM‑CSF致敏的DC细胞诱导产生CTL细胞；敲除所述CTL细胞的PD‑1基因，得到PD‑1敲除的CTL细胞。本发明专利技术制备方法得到的特异性CTL细胞制剂在回输体内后不会因肿瘤表达的PD‑L1而引起CTL衰竭和失能，从而对肿瘤细胞产生高效特异性细胞毒作用，提高其疗效并降低副作用，可用于治疗前列腺癌，尤其是治疗PAP阳性的前列腺癌患者，具有广阔的临床应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种CTL细胞的制备方法及应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种CTL细胞的制备方法及应用。
技术介绍
前列腺癌(prostatecancer，PC)是男性泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，为局部器官性癌变疾病，其病程可以分为两个阶段，即激素依赖期和非激素依赖期。在激素依赖期可以采用前列腺切除手术、放射性疗法、药物去势的方案来治疗，伴随产生严重的毒副作用，影响病人的生活质量。在经过激素依赖期以后病情会进展到激素非依赖期，几乎所有的患者均发展为去势抵抗性前列腺癌(CastrationResistantProstateCancer，CRPC)，而转移性去势抵抗性前列腺癌(metastaticCastrationResistantProstateCancer，mCRPC)更是前列腺癌的主要致死因素，进展至mCRPC患者平均中位生存时间少于2年。因此开发出新的、有效的前列腺癌治疗方案十分迫切。细胞治疗作为肿瘤治疗的新手段成为了研究热点，尤其是基于树突状细胞(DC)疫苗的前列腺癌治疗取得了较好的临床效果。通过前列腺癌相关抗原肽致敏DC，能诱导强效的抗肿瘤免疫效应，但是存在输注的DC细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CTL细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：采用经肿瘤抗原PAP‑GM‑CSF致敏的DC细胞诱导产生CTL细胞；敲除所述CTL细胞的PD‑1基因，得到PD‑1敲除的CTL细胞。

【技术特征摘要】
1.一种CTL细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：采用经肿瘤抗原PAP-GM-CSF致敏的DC细胞诱导产生CTL细胞；敲除所述CTL细胞的PD-1基因，得到PD-1敲除的CTL细胞。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述肿瘤抗原PAP-GM-CSF由PAP和GM-CSF经两个氨基酸Gly-Ser连接构成；优选地，所述肿瘤抗原PAP-GM-CSF的PAP上游含有信号肽。3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述肿瘤抗原PAP-GM-CSF的核苷酸如SEQIDNO.：1所示；所述肿瘤抗原PAP-GM-CSF的氨基酸如SEQIDNO.：2所示。4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述肿瘤抗原PAP-GM-CSF由基因工程方法表达得到，所述基因工程方法选自昆虫细胞杆状病毒表达系统、HEK293细胞表达系统、酵母表达系统、大肠杆菌表达系统中的一种；优选地，所述肿瘤抗原PAP-GM-CSF由基因工程方法表达后纯化得到；所述基因工程方法为昆虫细胞杆状病毒表达系统。5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述纯化的方法为超滤和连续柱层析。6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述连续柱层析选自离子交换、疏水层析、羟基磷灰石层析、亲和层析中的至少一种；优选地，所述连续柱层析为阳离子柱EMDSO3-(M)流穿、阴离子柱EMDTMAE(M)和疏水柱CaptoButyl中的一种或多种。7.根据权利要求1或2或4～6任一项所述的制备方法，其特征在于，所述肿瘤抗原PAP-GM-CSF纯度不小于98％。8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述肿瘤抗原PAP-GM-CSF的制备方法，包括如下步骤：(1)以pFast-Bac1为骨架载体，构建穿梭质粒pFast-Bac1-PAP-GM-CSF；(2)将所述穿梭质粒转化进入大肠杆菌，筛选得到重组杆...

【专利技术属性】
技术研发人员：周超，安鸿，卢有德，周玲，杜永彪，涂嘉琦，尹海滨，
申请(专利权)人：广州安捷生物医学技术有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44