铁皮石斛原球茎对皮肤祛斑及修复药效作用的方法技术

本发明专利技术涉及一种铁皮石斛原球茎对皮肤祛斑及修复药效作用的方法，包括如下步骤：S101：首先对铁皮石斛原球茎粉末进行样品处理；S102：将所述样品对裸鼠进行分组给药，然后解剖所述裸鼠并收集其皮肤组织和血清进行观察和测定，并对铁皮石斛原球茎的药效进行评价。本发明专利技术的铁皮石斛原球茎对皮肤祛斑及修复药效作用的方法，实验显示10mg/mL～50mg/mL的铁皮石斛原球茎混悬液经皮给药具有抗光老化作用，其中50mg/mL的原球茎混悬液的光老化修复作用更理想，光老化探索实验表明原球茎具有较高的开发潜能。

Effect of protocorm of Dendrobium officinale on skin freckle removal and repair

【技术实现步骤摘要】
铁皮石斛原球茎对皮肤祛斑及修复药效作用的方法
本专利技术涉及一种铁皮石斛原球茎对皮肤祛斑及修复药效作用的方法。
技术介绍
铁皮石斛石斛具有生津作用，主要表现为促进腺体分泌和脏器运动，铁皮石斛对可降低链脲霉素诱发糖尿血糖值。另外铁皮石斛颗粒(TPSH)可促进荷瘤动物巨噬细胞的吞噬功能，增强T淋巴细胞的增殖和分化及NK细胞的活性，并能明显提高荷瘤动物的血清溶血素值，提示TPSH无论是对非特异性免疫功能，或是特异性细胞免疫以及体液免疫功能，均有一定的提高作用。但是目前对于铁皮石斛抗光老化的药效研究却非常少有。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于提出一种铁皮石斛原球茎对皮肤祛斑及修复药效作用的方法。本专利技术的一种铁皮石斛原球茎对皮肤祛斑及修复药效作用的方法，其特征在于，包括如下步骤：S101：首先对铁皮石斛原球茎粉末进行样品处理；S102：将所述样品对裸鼠进行分组给药，然后解剖所述裸鼠并收集其皮肤组织和血清进行观察和测定，并对铁皮石斛原球茎的药效进行评价。本专利技术的铁皮石斛原球茎对皮肤祛斑及修复药效作用的方法，实验显示10mg/mL～50mg/mL的铁皮石斛原球茎混悬液经皮给药具有抗光老化作用，其中50mg/mL的原球茎混悬液的光老化修复作用更理想，光老化探索实验表明原球茎具有较高的开发潜能。另外，本专利技术上述的铁皮石斛原球茎对皮肤祛斑及修复药效作用的方法，还可以具有如下附加的技术特征：进一步地，所述步骤S101具体包括如下步骤：首先将铁皮石斛原球茎粉末溶于去离子水中，制备成50mg/mL的混悬液，然后制备25mg/mL的中剂量组和10mg/mL的低剂量组，将基肽制备成10mg/mL的水溶液作为对照的阳性给药组。其中，基肽为棕榈酰五肽-3。进一步地，所述步骤S102具体包括如下步骤：S1021：将裸鼠分为数量相等的6组，依次为空白组、模型组、阳性给药组、10mg/mL给药组、25mg/mL给药组、50mg/mL给药组，然后在22℃～27℃温度下、63％～67％的湿度下采用12h光暗周期进行适应性饲养6天～8天；S1022：对模型组、阳性给药组、10mg/mL给药组、25mg/mL给药组、50mg/mL给药组的小鼠从第二周开始照射紫外灯，连续照射4周，每隔3天照射1次～2次，每次0.8h～1.2h，然后从第5周开始停止照射紫外线，开始给药，连续给药6周，每隔1天～1.5天给药1次，观察并记录裸鼠皮肤的表观，然后在第11周给药结束，解剖所述裸鼠，并收集皮肤组织和血清，用于微观指标观察及测定，用以验证药效；其中，模型组裸鼠在结束4周照射之后，给空白溶剂。进一步地，采用气质联用方法分析所述裸鼠的皮肤组织和血清中的脂溶性成分。进一步地，所述气质联用方法的具体步骤如下：首先将铁皮石斛原球茎粉末与正己烷按照料液比0.5g：(38mL～42mL)混合后在65℃～75℃温度下回流2h～4h，然后回收所述正己烷，并将所述铁皮石斛原球茎粉末烘干后按照料液比为0.5g：(8mL～12mL)混合进行气质联用分析。进一步地，在进行气质联用分析时，气相柱温箱的初始温度为58℃～62℃，保留2min；然后按照38℃/min～42℃/min的升温速率升温至178℃～182℃，保持2分钟；然后按照5℃/min～9℃/min的升温速率升温至248℃～252℃，保持2分钟；然后按照8℃/min～12℃/min的升温速率升温至278℃～282℃并保持10min。进一步地，在进行气质联用分析时，质谱进样口温度为278℃～282℃，传送线温度为278℃～282℃，离子源温度为248℃～252℃。进一步地，在进行气质联用分析时，载气为氦气且流量为1.0mL/min；进样量为2μL，分流比为30:1。进一步地，在所述步骤S101中，所述铁皮石斛原球茎粉末的制备方法包括如下步骤：首先将铁皮石斛原球茎冻干，然后粉碎成粒径为2800目～3200目的粉末。本专利技术的另一个目的在于提出所述的方法在临床医学领域的应用。本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。附图说明图1是实验裸鼠皮肤水分和斑点量化图；其中，图(1A)皮肤水分图；(1B)为皮肤斑点图；图2是裸鼠背部皮肤组织切片增生皮脂腺和增厚表皮的量化图；其中，图(2A)为增生皮脂腺量化图，(2B)为皮肤表皮厚度量化图；图3是实验裸鼠血清抗氧化指标；其中，(3A)实验裸鼠血清中CAT的含量；(3B)实验裸鼠血清中SOD的含量；(3C)实验裸鼠血清中GSH-Px的含量；(3D)实验裸鼠血清中TBARS的含量。柱状图上的不同标记字母(a,b)用于表示分组间统计学差异情况，相同符号的分组间具有统计学差异(p<0.05)；图4是实验裸鼠皮肤组织基质金属蛋白酶MMPs指标图；(4A)为裸鼠皮肤组织MMP-1表达量柱状图；(4B)为裸鼠皮肤组织MMP-3表达量柱状图给；柱状图上的不同标记字母(a,b)用于表示分组间统计学差异情况，相同符号的分组间具有统计学差异(p<0.05)；图5为原球茎脂溶性成分气质联用检测图。具体实施方式下面详细描述本专利技术的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。1.1实验材料新鲜铁皮石斛原球茎(从广州中医药大学组培实验室获得，由广州中医药大学鉴定实验室张桂芳教授鉴定，确定为铁皮石斛原球茎)冻干，粉碎成超微粉，七周龄bc_nu裸鼠(广州中医药大学实验动物中心)，阳性药基肽，MDA试剂盒(碧云天生物科技有限公司)，SOD试剂盒、CAT试剂盒(南京建成生物工程研究院)，MMP-1、MMP-3ELISA试剂盒(瑞舒生物科技有限公司)，紫外灯，遮光帘。1.2实验方法1.2.1样品处理方法精密称取铁皮石斛原球茎超微粉0.25g溶于5.0mL去离子水中，制成50mg/mL的混悬液作为高剂量组。分别以高剂量的50％、20％作为中、低剂量(分别为25mg/mL，10mg/mL)。基肽制成10mg/mL水溶液作为阳性药。1.2.2光老化模型造模方法试验裸鼠分成6组，每组8只(空白组、模型组、阳性给药组、10mg/mL给药组、25mg/mL给药组、50mg/mL给药组),25℃65％湿度12小时光暗周期适应性饲养一周。非空白组裸鼠从第二周开始照射紫外灯(100mJ/cm2)，连续4周，每周2次，每次1h。从第5周开始停止照射开始给药，连续六周，每周4次。观察并记录裸鼠皮肤表观。第11周给药结束解剖裸鼠，收集皮肤组织和血清用于微观指标观察及测定。1.2.3脂溶性成分气质联用分析方法准确称取0.5g铁皮石斛原球茎超微粉于锥形瓶中，加入40mL正己烷70℃回流3h。回收正己烷，残留物溶于10mL氯仿用于气质联用分析。气相柱温箱初始温度为60℃，保留2min；以40℃/min升温至180℃，保持2分钟；6℃/min升温至250℃，保持2分钟；10℃/min升温至280℃并保持10min。质谱进样口温度为280℃，传送线温度280℃，离子源温度250℃。载气为氦气且流量为1.0mL/min；进样量为2μL，分本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种铁皮石斛原球茎对皮肤祛斑及修复药效作用的方法，其特征在于，包括如下步骤：S101：首先对铁皮石斛原球茎粉末进行样品处理；S102：将所述样品对裸鼠进行分组给药，然后解剖所述裸鼠并收集其皮肤组织和血清进行观察和测定，并对铁皮石斛原球茎的药效进行评价。

【技术特征摘要】
1.一种铁皮石斛原球茎对皮肤祛斑及修复药效作用的方法，其特征在于，包括如下步骤：S101：首先对铁皮石斛原球茎粉末进行样品处理；S102：将所述样品对裸鼠进行分组给药，然后解剖所述裸鼠并收集其皮肤组织和血清进行观察和测定，并对铁皮石斛原球茎的药效进行评价。2.根据权利要求1所述的铁皮石斛原球茎对皮肤祛斑及修复药效作用的方法，其特征在于，所述步骤S101具体包括如下步骤：首先将铁皮石斛原球茎粉末溶于去离子水中，制备成50mg/mL的混悬液，然后制备25mg/mL的中剂量组和10mg/mL的低剂量组，将基肽制备成10mg/mL的水溶液作为对照的阳性给药组。3.根据权利要求2所述的铁皮石斛原球茎对皮肤祛斑及修复药效作用的方法，其特征在于，所述步骤S102具体包括如下步骤：S1021：将裸鼠分为数量相等的6组，依次为空白组、模型组、阳性给药组、10mg/mL给药组、25mg/mL给药组、50mg/mL给药组，然后在22℃～27℃温度下、63％～67％的湿度下采用12h光暗周期进行适应性饲养6天～8天；S1022：对模型组、阳性给药组、10mg/mL给药组、25mg/mL给药组、50mg/mL给药组的小鼠从第二周开始照射紫外灯，连续照射4周，每隔3天照射1次～2次，每次0.8h～1.2h，然后从第5周开始停止照射紫外线，开始给药，连续给药6周，每隔1天～1.5天给药1次，观察并记录裸鼠皮肤的表观，然后在第11周给药结束，解剖所述裸鼠，并收集皮肤组织和血清，用于微观指标观察及测定，用以验证药效；其中，模型组裸鼠在结束4周照射之后，给空白溶剂。4.根据权利要求3所述的铁皮石斛原球茎对皮肤祛斑及修复药效作用的方法，其特征在于，采用气质联用方法分析所...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘卓斌，刘育坛，刘宏源，
申请(专利权)人：昆明斛之梦制药有限公司，
类型：发明
国别省市：云南,53