一种紫菜黄斑病的治疗方法技术

本发明专利技术提供一种紫菜黄斑病的治疗方法，是使用噬菌体来预防治疗发生黄斑病的不同生长阶段的紫菜丝状体；所述的噬菌体，为vB_VmeM‑Yong噬菌体，其保藏编号为CGMCC No.17098。所述的不同生长阶段，为贝壳丝状体阶段或自由丝状体阶段。本发明专利技术采用噬菌体Yong控制紫菜养殖中的黄斑病，可以在短期内并且安全有效的预防紫菜黄斑病的发生，进而提高紫菜的生产效益。

A treatment of Porphyra macular disease

【技术实现步骤摘要】
一种紫菜黄斑病的治疗方法
本专利技术属于养殖海藻病害防治
，具体涉及一种紫菜黄斑病的治疗方法。
技术介绍
紫菜黄斑病(yellow-spotdisease)是一种紫菜丝状体育苗阶段常见的严重病害。一般认为该病是由嗜盐性细菌引起的。由于该病发生在育苗阶段，往往对紫菜栽培生产造成根本性损失。紫菜丝状体黄斑病屡见报道，有研究认为黄斑病是假单胞菌属(Pseudomonas)和弧菌属(Vibrio)细菌侵入藻体受伤部位并增殖，菌体分泌酶破坏叶状体组织引起的；也有人认为水温偏高、突降大雨，河道中有机物进入养殖海区等原因是造成紫菜黄斑病的原因。目前紫菜黄斑病已成为紫菜养殖中急需攻克的难题。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种紫菜黄斑病的治疗方法，从而弥补现有技术的不足。本专利技术所提供的紫菜黄斑病的防治方法，是使用噬菌体来预防治疗发生黄斑病的不同生长阶段的紫菜丝状体；所述的噬菌体，为地中海弧菌噬菌体vB_VmeM-Yong，于2019年01月22日保藏在北京市朝阳区北辰西路1号院2号的中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.17098。所述的不同生长阶段，为贝壳丝状体阶段或自由丝状体阶段。本专利技术的方法具有如下的优点：(1)采用噬菌体Yong控制紫菜养殖中的黄斑病，可以在短期内并且安全有效的预防紫菜黄斑病的发生，进而提高紫菜的生产效益。(2)噬菌体Yong是一种可靠、无品质破坏的生物防治剂。(3)噬菌体Yong对V.mediterranei117-T6感染的紫菜自由丝状体有很好的保护作用，使其存活率高达85％。附图说明图1：噬菌体Yong对V.mediterranei117-T6感染的贝壳丝状体黄斑病的生物防治效果图；图2：噬菌体Yong对V.mediterranei117-T6感染的自由丝状体存活率的影响，其中F1：V.mediterranei117-T6浓度为108CFU/mL，噬菌体YongMOI＝0。F2：V.mediterranei117-T6浓度为108CFU/mL，噬菌体YongMOI＝1。F3：V.mediterranei117-T6浓度为108CFU/mL，噬菌体YongMOI＝0.1。F4：V.mediterranei117-T6浓度为106CFU/mL，噬菌体YongMOI＝0。F5：V.mediterranei117-T6菌浓度为106CFU/mL，噬菌体YongMOI＝0.1。F6：V.mediterranei117-T6菌浓度为106CFU/mL，噬菌体YongMOI＝0.01。F7：V.mediterranei117-T6菌浓度为106CFU/mL，噬菌体YongMOI＝0.001。图3：噬菌体Yong对V.mediterranei117-T6感染的自由丝状体的保护图。具体实施方式本专利技术使用从宁波市北仑区梅山湾海水中分离的噬菌体Yong，可以高效的防治种紫菜黄斑病，从而促成了本专利技术的建立。对于本专利技术所涉及的术语，申请人记载如下：1、紫菜贝壳丝状体：接种到贝壳上，并转入贝壳内生长的紫菜丝状体。2、紫菜自由丝状体：在培养体系中自由生长的游离的紫菜丝状体，呈藻丝或藻丝团状态。3、菌浓度：以每毫升中细菌菌落形成单位(CFU，Colony-FormingUnits)CFU/mL表示，指单位体积中的细菌、霉菌、酵母等微生物的群落总数。本例中特指V.mediterranei117-T6的浓度。4、噬菌体MOI(multiplicityofinfection)：噬菌体感染复数，指感染时噬菌体与细菌的数量比值，也就是平均每个细菌感染噬菌体的数量。5、噬菌体浓度：也指噬菌体的效价，即每毫升样品含噬菌体的个数。通常是在含敏感菌的平板上形成噬菌斑进行噬菌体的计数，以每毫升中含有噬菌斑形成单位(plaqueformingunit)，即PFU/mL表示。对于本专利技术中所使用的药品试剂，以及生物学方法，本领域技术人员可在本专利技术构思的基础上选择其它常规的药品试剂及方法进行替换。下面结合实施例对本专利技术进行详细的描述。实施例1噬菌体的筛选及理化指标本专利技术所提供的vB_VmeM-Yong噬菌体分离自浙江省宁波市北仑区梅山岛表层海水，水样采集的具体位置为Northlatitude:29.7831421；Eastlongitude:121.9586032；具体的分离步骤如下：1)地中海弧菌117-T6的活化、培养取117-T6菌种划线接种于含1.5％琼脂的海水营养固体培养基平板上，26℃倒置培养过夜；从平板上挑取单菌落，接种到装有5mL海水营养培养基的试管内，摇床上26℃、180rpm培养12小时；从试管中取1mL液体培养液稀释至装有100mL海水营养培养基的锥形瓶中，放置于摇床上26℃、180rpm扩大培养至菌液OD600≈0.6，即得到对数期菌液；其中海水营养培养基配方：蛋白胨10g，牛肉膏3g,加入过滤海水定容至1L，pH7.2,高压灭菌；2)噬菌体的富集从浙江省宁波市北仑区梅山岛海边采集表层水样，置冰盒内，并立即带回实验室，充分颠倒混匀后，10000g离心10min,取上清80mL到250mL锥形瓶中，在锥形瓶中加入40ml3×海水营养培养基和2mL新鲜培养的对数期117-T6菌液，混匀后放置于摇床上26℃、180rpm培养3-4小时进行噬菌体富集；将富集培养液离心4℃、10000g、10min，取上清液依次经过0.45μm、0.22μm孔径硝酸纤维素滤膜过滤，滤液即为的噬菌体富集液；点板验证：取融化状态下于42-45℃保温超过半小时的含0.7％琼脂的海水营养培养基与500μL对数期117-T6菌液迅速混匀，立即倾倒于含1.5％琼脂的海水营养培养基单层平板上，铺平，冷却凝固后，点2μL噬菌体原液于平板上，28℃过夜培养，翌日双层平板上点噬菌体富集液出出现明显透明噬菌斑；噬菌体的进一步富集：取两根试管，其中一根用作实验组，添加如下组分：6mL上述噬菌体富集液、2mL3×海水营养培养基、100μL新鲜的对数期117-T6菌液，对照组添加如下组分：8ml1×海水营养培养基+100μL新鲜的对数期117-T6菌液；将试管置于26℃、180rpm摇床培养过夜；翌日，实验组培养液较对照组明显澄清，将培养液4℃、10000g离心10min，取上清液依次经过0.45μm、0.22μm孔径硝酸纤维素滤膜过滤，滤液即为的二次噬菌体富集液；其中3×海水营养培养基配方：蛋白胨30g，牛肉膏9g,加入过滤海水定容至1L，pH7.2,121℃高压灭菌20min；3)噬菌体的分离纯化将步骤2)获得的二次噬菌体富集液用海水营养培养基做10倍系列梯度稀释，分别取10-4、10-5、10-6、10-7稀释度的稀释液各100μL与200μL新鲜的对数期117-T6菌液混合，在室温下，摇床上孵育10min，将该混合物加入至5ml的预先融化并在42-45℃保温超过半小时的含0.7％琼脂的半固体海水营养培养基中，立即充分混匀并倾倒于29℃预热的含1.5％琼脂的海水营养培养基单层平板上，均匀铺平，待上层胶冷却凝固后放于28℃培养箱内过夜培养，平板上有噬菌斑形成；选取噬菌斑密度合适的平板，挑取单个噬菌斑中心位置至5mL新鲜的对数期本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种紫菜黄斑病的防治方法，其特征在于，所述的方法是使用噬菌体来预防治疗发生黄斑病的不同生长阶段的紫菜丝状体；所述的噬菌体的保藏编号为CGMCC No.17098。

【技术特征摘要】
1.一种紫菜黄斑病的防治方法，其特征在于，所述的方法是使用噬菌体来预防治疗发生黄斑病的不同生长阶段的紫菜丝状体；所述的噬菌体的保藏编号为CGMCCNo.17...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐梦雅，杨锐，杨杰，李登峰，秦伟南，陈海敏，陈娟娟，骆其君，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33