一种南美白对虾性腺组织冷冻切片的制作方法技术

本发明专利技术公开了一种南美白对虾性腺组织冷冻切片的制作方法，包括如下步骤：甲醛固定后组织的脱水处理、组织包埋、冷冻切片、染色与封片。本发明专利技术提供的方法，针对经甲醛固定后的南美白对虾性腺组织的冷冻切片技术，区别于新鲜组织的冷冻切片技术。相对于传统的石蜡切片方法，具有更高的切片效率，节约了时间。相比于一般的冷冻切片方法，具有更好的切片效果，有利于染色观察。

A Method for Making Frozen Sections of Gonad Tissue of Penaeus vannamei

【技术实现步骤摘要】
一种南美白对虾性腺组织冷冻切片的制作方法
本专利技术涉及一种冷冻切片的制作方法，更具体地说它涉及一种南美白对虾性腺组织冷冻切片的制作方法。
技术介绍
凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)又称南美白对虾，隶属十足目(Deeapoda)，对虾科(Penaeidae)，滨对虾属(Litopenaeus)，原产于中南美洲秘鲁到墨西哥的太平洋沿岸，是世界对虾养殖业的主导品种，1988年作为中国明对虾(Fenneropenaeuschinensis)的替代种引入中国，由于凡纳滨对虾具有生长速度快、养殖周期短、养殖适应性强等优势，2000年以后养殖面积迅速扩大，目前已经是中国水产养殖的支柱产业之一。传统的冷冻切片技术主要应用于切新鲜组织，而通过甲醛将样品固定后，采用石蜡切片技术进行切片，需要花费较多的时间，效率不高，采用的冷冻切片技术对甲醛固定后的样品进行切片染色虽然效率较高，但是往往切片效果又不好，因此本专利技术开发了针对甲醛固定后样品切片染色的方法，不但效率较好，而且染色效果也好。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足，本专利技术在于提供一种南美白对虾性腺组织冷冻切片的制作方法，具本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种南美白对虾性腺组织冷冻切片的制作方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)甲醛固定后组织的脱水处理：取南美白对虾卵巢组织，固定于10％甲醛溶液中备用，再用手术刀片切取长度为0.5‑1.0cm的卵巢组织，浸泡在20％蔗糖溶液与OTC冷冻包埋剂体积为1:1的液体，浸泡时间至少16个小时；(2)组织包埋：将步骤(1)中浸泡好的卵巢组织取出，放入盛放OTC冷冻包埋剂的圆柱形软管模型中，用镊子夹取模型在液氮中速冻15‑20s，然后放进冷却好的冷冻切片机中，去除模型后得到样品，将样品用OTC冷冻包埋剂固定在预冷过的样品托上，放在速冻架上等待包埋剂完全冷冻；(3)冷冻切片：调节冷冻切片机冷冻箱温度为‑1...

【技术特征摘要】
1.一种南美白对虾性腺组织冷冻切片的制作方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)甲醛固定后组织的脱水处理：取南美白对虾卵巢组织，固定于10％甲醛溶液中备用，再用手术刀片切取长度为0.5-1.0cm的卵巢组织，浸泡在20％蔗糖溶液与OTC冷冻包埋剂体积为1:1的液体，浸泡时间至少16个小时；(2)组织包埋：将步骤(1)中浸泡好的卵巢组织取出，放入盛放OTC冷冻包埋剂的圆柱形软管模型中，用镊子夹取模型在液氮中速冻15-20s，然后放进冷却好的冷冻切片机中，去除模型后得到样品，将样品用OTC冷冻包埋剂固定在预冷过的样品托上，放在速冻架上等待包埋剂完全冷冻；(3)冷冻切片：调节冷冻切片机冷冻箱温度为-18℃，样品头温度为-15℃，将样品托插入样品头，调整好样品与刀片的位置，先用修块模式进行修块使包埋的卵巢组织露出，后调至切片模式，将切片厚度调为5μm，进行切片；(4)切片...

【专利技术属性】
技术研发人员：张敏，王瑶华，李方，冀德伟，胡利华，闫茂仓，柴雪良，
申请(专利权)人：浙江省海洋水产养殖研究所，
类型：发明
国别省市：浙江,33