制备含生长因子的血小板释放物的方法技术

技术编号:22173839 阅读:19 留言:0更新日期:2019-09-21 14:31
本发明专利技术涉及从流体哺乳动物血小板浓缩物制备含有生长因子的血小板释放物的方法,该方法包括以下连续步骤:使血小板浓缩物经历病原体减少步骤以破坏无包膜病毒;使血小板浓缩物经历活化步骤以使血小板释放生长因子;回收排除了纤维蛋白原的流体血小板释放物;使排除了纤维蛋白原的流体血小板释放物经历第二病原体浓度降低步骤以破坏包膜病毒;使血小板释放物经历无菌过滤并回收含有生长因子的滤液。用本发明专利技术方法获得的血小板释放物可用作治疗剂,以增强再生医学中多谱系细胞的增殖以及控制非愈合伤口和抗性溃疡。第二个适应症是作为细胞培养基中胎牛血清的替代品。

Preparation of Platelet Release Containing Growth Factor

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】制备含生长因子的血小板释放物的方法本专利技术涉及根据第一项权利要求的前序部分所述的从哺乳动物血小板浓缩物中制备含有生长因子的血小板释放物的方法。哺乳动物血小板含有大量具有重要生理功能的生物活性剂。其中,生长因子特别令人感兴趣,因为它们在增强不同细胞系增殖和组织再生中起作用,这两者在再生医学、损伤和溃疡愈合中都具有重要意义。在20世纪90年代早期已经开发出在牙科、整形外科和再生医学中使用患者自己的富含血小板血浆(PRP)的概念。通过离心患者自身抗凝全血,或使用特殊装置如美敦力公司(Medtronic)的Magellan或哈伐斯特公司(Harvest)的SmartPrep获得血小板。然而,这种自体血小板的使用可能因为患者贫血或在需要大量使用或长时间使用的情况下受到限制。自体PRP最重要的限制之一是需要专用机器或实验室来制备血小板浓缩物。为了使它们适合使用,血小板即被激活以使它们释放其α颗粒的内容物。然而,从患者分离后必需在几小时内使用PRP,否则其中包含的生长因子有可能失去其大部分的生物活性。已经描述了几种用于保存血小板的技术。添加DMSO和海藻糖是延长血小板保存的合适方法的两个实例,对于本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从流体哺乳动物血小板浓缩物制备含有生长因子的血小板释放物的方法,其包括以下连续步骤:a.使血小板浓缩物经历第一病原体浓度降低步骤,目的是破坏血小板浓缩物中存在的微生物的DNA和RNA;b.通过使所述血小板浓缩物与活化剂接触使血小板浓缩物经历活化步骤,目的是使血小板释放至少部分α颗粒和存在于其中的生长因子,从而提供流体血小板释放物;c.使所述流体血小板释放物经历纤维蛋白原浓度降低步骤并回收排除了纤维蛋白原的流体血小板释放物;d.使所述排除了纤维蛋白原的流体血小板释放物经历第二病原体浓度降低步骤,目的是破坏包膜病毒;e.使所述血小板释放物经历无菌过滤并从过滤步骤回收含有生长因子的滤液。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2016.11.18 EP 16199628.51.一种从流体哺乳动物血小板浓缩物制备含有生长因子的血小板释放物的方法,其包括以下连续步骤:a.使血小板浓缩物经历第一病原体浓度降低步骤,目的是破坏血小板浓缩物中存在的微生物的DNA和RNA;b.通过使所述血小板浓缩物与活化剂接触使血小板浓缩物经历活化步骤,目的是使血小板释放至少部分α颗粒和存在于其中的生长因子,从而提供流体血小板释放物;c.使所述流体血小板释放物经历纤维蛋白原浓度降低步骤并回收排除了纤维蛋白原的流体血小板释放物;d.使所述排除了纤维蛋白原的流体血小板释放物经历第二病原体浓度降低步骤,目的是破坏包膜病毒;e.使所述血小板释放物经历无菌过滤并从过滤步骤回收含有生长因子的滤液。2.如权利要求1所述的方法,其中,对步骤e获得的包含生长因子的滤液进行冷冻干燥。3.如权利要求1或2所述的方法,其中,所述活化剂是含有一种或多种选自钙盐,凝血酶,胶原,血栓素A2和二磷酸腺苷(ADP)的化合物的溶液,优选含有凝血酶的溶液。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中,所述第一病原体浓度降低步骤包括将所述血小板浓缩物与光化学活性剂一起孵育并将所述血小板浓缩物暴露于UV照射。5.如权利要求4所述的方法,其中,所述UV照射是UVA照射,优选能量密度为1至10J/cm2的UVA照射,更优选能量密度为3J/cm2的UVA照射。6.如权利要求4或5所述的方法,其中,所述光化学活化剂是补骨脂素,特别是阿莫脂素或核黄素。7.如前述权利要求中任一项所述的方法,其中,所述第二病原体浓度降低步骤包括将所述血小板释放物与溶剂和/或洗涤剂一起孵育,然后除去溶剂和/或洗涤剂并回收排除了溶剂和/或洗涤剂的血小板释放物。8.如权利要求7所述的方法,其中,用于与血小板浓缩物一起孵育的溶剂选自磷酸二烷基酯或磷酸三烷基酯,优选磷酸三正丁酯。9.如权利要求7或8所述的方法,其中,所述洗涤剂选自以下一种或多种:脂肪酸的聚氧乙烯衍生物,山梨糖醇酐的偏酯,非离子洗涤剂,脱氧胆酸钠和磺...

【专利技术属性】
技术研发人员:T·古力斯H·M·法米
申请(专利权)人:血小板力量私人有限公司
类型:发明
国别省市:新加坡,SG

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