防治杨树溃疡病的蜡样芽孢杆菌及生物防治制剂和方法技术

本发明专利技术公开了防治杨树溃疡病的蜡样芽孢杆菌及生物防治制剂和方法，其菌株为蜡样芽孢杆菌菌株SM02，从盐碱土中分离获得，可用于生物防治制剂，该蜡样芽孢杆菌菌株具有生长速度快、产孢量大、抗逆性强，在植物表面能够快速大量定殖等特点，因此具有良好的应用前景；此外，由该蜡样芽孢杆菌制备的生物防治制剂，不仅能够高效的防治杨树溃疡病，还能有效促进杨树生长，是一种极具应用前景的生物防治制剂，该微生物制剂可以作为生物农药或生物肥料，防治杨树溃疡病。

Bacillus cereus against poplar canker and its biological control agents and methods

【技术实现步骤摘要】
防治杨树溃疡病的蜡样芽孢杆菌及生物防治制剂和方法
本专利技术涉及植物病害生物防治
，具体为防治杨树溃疡病的蜡样芽孢杆菌及生物防治制剂和方法。
技术介绍
杨树是我国重要的工业人工林树种，由于长期连作经营，导致林地生产力逐代下降，病害发生频繁，严重影响杨树生产的稳定和可持续发展。杨树溃疡病又叫水泡型溃疡病，是杨树上危害最严重的病害之一，其病原真菌有葡萄座腔菌属（Botryosphaeria）、疡壳孢属（Dothichiza）、盾囊霉属（Coniothyrium）、腐皮壳属（Valsa）、棒盘孢属（Coryneum）、从赤壳属（Nectria）、茎点霉属（Phoma）等；在我国，多报道为葡萄座腔菌属（Botryosphaeria），该属真菌是一类世界广泛分布的病原真菌。杨树溃疡病主要发生在枝干部，引起皮层局部溃疡性坏死等。该病在4月份开始发病，5月下旬至6月形成第1个发病高峰，7～8月病势减缓，9月出现第2个发病高峰，10月以后病势减弱。目前，杨树溃疡病在我国各杨树栽植区均有发生且危害严重，是阻碍杨树产业发展的重要因素之一。对于杨树溃疡病的防治，目前生产上主要依靠林业栽培管理措施和化学农药进行防治。但由于该病具有较长的潜伏期、较长的发病周期和多点危害的特点，在防治中需要一个生长周期多次处理、多次施用化学农药，才能较好的控制其危害。存在防治成本高、耗时长、污染环境等问题。因此，寻求新的经济高效、绿色环保的防治技术与途径已成为当前杨树溃疡病防治中迫切解决的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供防治杨树溃疡病的蜡样芽孢杆菌及生物防治制剂和方法，具有生长速度快、产孢量大、抗逆性强，在植物表面能够快速大量定殖等优点，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：防治杨树溃疡病的蜡样芽孢杆菌，菌株为蜡样芽孢杆菌（Bacilluscereus）菌株SM02；从盐碱土中分离获得，其生物学特性为：在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基或LB（Luria-Bertani）培养基上该菌株形状为杆状，鞭毛特征明显，单菌落为圆形，污白色、不透明、中央隆起、边缘整齐，后期有褶皱；在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，28℃下培养两天后，镜检，菌体细胞呈杆状，能运动；以大肠杆菌为对照，经革兰氏染色呈阳性；经芽孢染色后观察芽孢呈椭圆形或柱状。更进一步地，蜡样芽孢杆菌菌株SM02的培养方法，包括以下步骤：S1：普通培养保存采用LB培养基，配方为胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，琼脂15-20g，蒸馏水1000mL，pH调至7.0-7.2；S2：实验室液体培养采用LB液体培养基，配方为胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水1000mL，pH调至7.0-7.2；S3：固体培养基配方：固料和无机盐溶液，所述固料和无机盐的比例为质量比98.7∶0.3；所述固料由质量比为稻壳∶玉米粉∶豆粕粉∶麸皮=55∶25∶15∶5的组成；所述无机盐按质量百分比计，包含20%磷酸二氢钾，5%硫酸镁，10%硫酸铵，65%轻质碳酸钙；S4：大量发酵培养配方：同S3中固体培养基配方。本专利技术提供另一种技术方案：防治杨树溃疡病的生物防治制剂，包括所述的蜡样芽孢杆菌（B.cereus）菌株SM02。更进一步地，防治杨树溃疡病的生物防治制剂的制备方法如下：S1：制备所述蜡样芽孢杆菌的种子液；S2：将S1中制备的种子液接种到固体培养基中，28-30℃下恒温培养；S3：将S2中培养的培养物用无菌水按质量比1∶15的比例混合，过滤，将滤液接种至大量发酵培养基，在室温28-30℃、相对湿度85%以上的发酵室中进行发酵培养。本专利技术还提供一种技术方案为：防治杨树溃疡病的生物防治方法，包括向具有溃疡病的杨树植株施用上述蜡样芽孢杆菌（B.cereus）菌株SM02或者上述生物防治制剂。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：1、本专利技术提供的防治杨树溃疡病的蜡样芽孢杆菌及生物防治制剂和方法，其蜡样芽孢杆菌菌株具有生长速度快、产孢量大、抗逆性强，在植物表面能够快速大量定殖等特点，因此具有良好的应用前景。2、本专利技术提供的防治杨树溃疡病的蜡样芽孢杆菌及生物防治制剂和方法，由该蜡样芽孢杆菌制备的生物防治制剂，不仅能够高效的防治杨树溃疡病，还能有效促进杨树生长，是一种极具应用前景的生物防治制剂，该微生物制剂可以作为生物农药或生物肥料，防治杨树溃疡病。具体实施方式以下将详细说明本专利技术实施例，然而，本专利技术实施例并不以此为限。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术实施例中：防治杨树溃疡病的蜡样芽孢杆菌，菌株为蜡样芽孢杆菌（Bacilluscereus）菌株SM02，从盐碱土中分离获得，已于2019年3月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址：北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所），保藏号为CGMCCNo.17337；其生物学特性为：在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基或LB（Luria-Bertani）培养基上该菌株形状为杆状，鞭毛特征明显，单菌落为圆形，污白色、不透明、中央隆起、边缘整齐，后期有褶皱；在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，28℃下培养两天后，镜检，菌体细胞呈杆状，能运动；以大肠杆菌为对照，经革兰氏染色呈阳性；经芽孢染色后观察芽孢呈椭圆形或柱状。本实施例中，蜡样芽孢杆菌菌株SM02的培养方法或繁殖方法，包括以下步骤：步骤1）：普通培养保存采用LB培养基，配方为胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，琼脂15-20g，蒸馏水1000mL，pH调至7.0-7.2；步骤2）：实验室液体培养采用LB液体培养基，配方为胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水1000mL，pH调至7.0-7.2；步骤3）：固体培养基配方：固料和无机盐溶液，所述固料和无机盐的比例为质量比98.7∶0.3；所述固料由质量比为稻壳∶玉米粉∶豆粕粉∶麸皮=55∶25∶15∶5的组成；所述无机盐按质量百分比计，包含20%磷酸二氢钾，5%硫酸镁，10%硫酸铵，65%轻质碳酸钙；步骤4）：大量发酵培养配方：同步骤3）中固体培养基配方。本专利技术提供另一种用于防治杨树溃疡病的生物防治制剂，包括所述的蜡样芽孢杆菌（B.cereus）菌株SM02；并且，还提供用于防治杨树溃疡病的生物防治制剂的制备方法，包括以下步骤：步骤1）：制备所述蜡样芽孢杆菌的种子液；步骤2）：将S1中制备的种子液接种到固体培养基中，28-30℃下恒温培养；步骤3）：将S2中培养的培养物用无菌水按质量比1∶15的比例混合，过滤，将滤液接种至大量发酵培养基，在室温28-30℃、相对湿度85%以上的发酵室中进行发酵培养。在本专利技术的一个具体实施方案中，上述制备方法包括以下步骤：第一步：将所述蜡样芽孢杆菌的孢子移植到LB液体培养基，28-30℃摇床振荡培养3-5d得到种子液；第二步：将第一步制备的种子液按质量比10%的比例接种到固体培养基中，28-30℃下振荡培养3-5d；第三步：将第二步培养的培养物用无菌水按质量比1∶15的比例混合，过滤，将滤液按体积比1∶6的比例接种至发酵培养基，室温28-30℃、相对湿度85%以上的发本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.防治杨树溃疡病的蜡样芽孢杆菌，其特征在于，菌株为蜡样芽孢杆菌（

【技术特征摘要】
1.防治杨树溃疡病的蜡样芽孢杆菌，其特征在于，菌株为蜡样芽孢杆菌（Bacilluscereus）菌株SM02；从盐碱土中分离获得，其生物学特性为：在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基或LB（Luria-Bertani）培养基上该菌株形状为杆状，鞭毛特征明显，单菌落为圆形，污白色、不透明、中央隆起、边缘整齐，后期有褶皱；在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，28℃下培养两天后，镜检，菌体细胞呈杆状，能运动；以大肠杆菌为对照，经革兰氏染色呈阳性；经芽孢染色后观察芽孢呈椭圆形或柱状。2.根据权利要求1所述的蜡样芽孢杆菌菌株SM02的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：普通培养保存采用LB培养基，配方为胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，琼脂15-20g，蒸馏水1000mL，pH调至7.0-7.2；S2：实验室液体培养采用LB液体培养基，配方为胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠10g，蒸馏水1000mL，pH调至7.0-7.2；S3：固体培养基配方：固料和无机...

【专利技术属性】
技术研发人员：马丙尧，马江燕，马春艳，高伟，朱升祥，牛赡光，马海林，杜振宇，刘方春，李宗泰，李宜明，刘幸红，张淑静，王霞，张文馨，高嘉，
申请(专利权)人：山东省林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：山东,37