肺癌尿液分子标志物MDH2在用于肺癌辅助诊断方面的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种肺癌尿液分子标志物MDH2，主要包括与健康人群相比，MDH2蛋白在一部分女性肺癌患者尿液中高表达，尿液中MDH2蛋白浓度可作为肿瘤分子标志物，结合CT等影像学检查结果，辅助肺癌的诊断。本发明专利技术该标志物采用患者的尿液进行检查，无痛无创，方法是用真空抽滤的方式将人的新鲜尿液（20‑40毫升）保存在硝酸纤维素膜上；采用加热（温度55℃）洗脱的方式将硝酸纤维膜上的尿液蛋白洗脱，测定浓度；最后取等量蛋白质用MDH2酶联免疫吸附实验（ELISA）试剂盒检测MDH2浓度。结果显示：MDH2在女性肺癌患者尿液中高表达；使用ELISA的方法可以一次性大批量的检测尿液中MDH2的浓度，可以用于肺癌的辅助诊断。

Application of Urine Molecular Marker MDH2 in Assisted Diagnosis of Lung Cancer

【技术实现步骤摘要】
肺癌尿液分子标志物MDH2在用于肺癌辅助诊断方面的应用
本专利技术属于肿瘤标志物检查
，涉及一种可能辅助肺癌无创诊断的方法及应用。
技术介绍
早期肺癌患者较少出现典型的临床表现，依靠目前的肿瘤标志物检查和影像学检查有时难以鉴别，临床诊断和鉴别诊断较为困难，因此在患者就诊时病情可能已经进展，不能实施手术治疗，导致患者预后较差。目前临床上肿瘤标志物的检测主要是采用取静脉血的方式，检测血中包括癌胚抗原、糖类抗原19-9、神经元特异性烯醇化酶、鳞状细胞癌相关抗原等在内的肿瘤标志物，但是这些指标也并不是绝对指向性的指标，对于肺癌的诊断仅是参考的作用。目前还没有可靠的肺癌尿液分子标志物，临床上尿液取材方便，无创无痛。ELISA的检测方法比较简单，成本低，易于操作。MDH2由338个氨基酸构成。MDH2由两个在结构和功能上都相互独立的结构域构成，其中一个是与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）结合的结构域，存在于氨基端，包含一个平行折叠结构，其核心的二核苷酸结合结构由四个β折叠和一个α螺旋构成；另外一个结构域存在于羧基端，包含了底物的结合位点及与催化相关的氨基酸。MDH2与三羧酸循环密切相关，受三本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.肺癌尿液分子标志物MDH2在用于肺癌辅助诊断方面的应用。

【技术特征摘要】
1.肺癌尿液分子标志物MDH2在用于肺癌辅助诊断方面的应用。2.权利要求1所述的应用，其检测过程如下：一、用ELISA方法检测不同人群尿液中MDH2的表达通过ELISA的方法检测了36例健康人和44例肺癌患者尿液MDH2的表达，发现MDH2在女性肺癌患者尿液中高表达，肺癌病人共44例，女性23例，其中有9例高表达MDH2；扩大样本量，进一步检测了16例健康人和72例女性肺癌患者中MDH2的表达，有19例女性肺癌患者显著高表达MDH2，证实MDH2是一个新的肺癌尿液蛋白分子标志物，可能用于肺癌的辅助诊断；二、尿液蛋白MDH2的ELISA检测方法1、尿液蛋白膜上保存：（1）收集患者新鲜晨尿20-40毫升，新鲜尿液4℃5000g离心40分钟去除细胞和细胞碎片；（2）取尿液上清液20毫升，加入10毫升磷酸盐缓冲液，混匀；对于蛋白浓度过高的尿液，比如临床检测中1到2个加号的尿液，取尿液上清15毫升，加入7.5毫升磷酸盐缓冲液，混匀；其中尿液：磷酸盐缓冲液的体积比=2:1；（3）根据真空抽滤瓶面积剪裁合适滤纸和孔径0.22微米的硝酸...

【专利技术属性】
技术研发人员：王长利，张彬，陈良，马宇辰，陈智鹏，刘翠翠，岳东升，沙永生，田鹏飞，张华，潘家强，范真真，
申请(专利权)人：天津市肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：天津,12