一种牡丹蛋白肽的制备方法技术

本发明专利技术涉及牡丹蛋白肽制备方法，具体步骤如下，从带种皮或者不带种皮的牡丹籽粕中提取出牡丹蛋白，利用超临界CO2萃取技术去除辛辣味，选择适宜的复合酶，通过适宜的组合，控制酶解反应条件，破坏不同位点的肽键，可以直接获得不同特定分子量的蛋白肽，特定分子量包括小于1000Da，1000Da‑2000Da，2000Da‑3000Da，特定分子量的蛋白肽得率都在95％以上，本发明专利技术制备牡丹蛋白肽的方法无需超滤分级，节省反应步骤，提高制备效率，降低生产成本。

Preparation of a Peony Protein Peptide

【技术实现步骤摘要】
一种牡丹蛋白肽的制备方法
本专利技术涉及牡丹籽粕蛋白肽
，特别涉及一种牡丹蛋白肽的制备方法。
技术介绍
牡丹是毛莨科芍药属灌木，广泛分布于河南洛阳、山东菏泽、安徽铜陵、陕西汉中、河北柏山等地，以洛阳、菏泽、铜陵种植最多，据统计，我国牡丹的种植面积已达30万亩，由于牡丹籽的含油量高，且富含亚油酸和亚麻酸，因此近几年，牡丹籽被大量应用于榨油，而榨油后的固体残渣牡丹籽粕，大多被直接废弃或者当做肥料，利用情况不理想，经过测定发现，牡丹籽粕中粗蛋白含量约为20％，因此，利用提取过牡丹籽油的牡丹籽粕来提取牡丹籽蛋白成为可能。蛋白质是食品的重要组成成分，蛋白质经酶解后得到蛋白肽，其功能特性和生物学特性，与原有蛋白质有较大差别，如酶解后可改善蛋白质的溶解性，乳化性，起泡性等功能特性，我国每年都有大量炼油后的牡丹籽粕产物，可以得到大量的牡丹蛋白，因此，如何高效率、低成本得到满足生活所需的牡丹蛋白肽，是现在的研究热点。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服上述问题，研究出可得到特定分子量牡丹蛋白肽的方法，该方法制备安全，工艺简便，不用利用超滤分级，提高了制备效率，降低了生产成本。本专利技术的目的通过以下技术方案予以实现：一种牡丹蛋白肽的制备方法，所述方法步骤为：S1：将牡丹籽粕粉碎，用超临界CO2萃取脱脂，过筛，按料液比1:20～30与水混合，加入NaOH调节pH9～10，50～60℃条件下磁力搅拌60～70min，离心(3500～4000r/min，13～18min)，取上清液，加入HCl，调节pH3～4，离心(3500～4000r/min，13～18min)，沉淀用少量去离子水清洗至中性后冷冻干燥，得牡丹籽蛋白；S2：将S1所得牡丹籽蛋白溶解，溶解液用超临界CO2萃取，萃取压力10-14MPa，萃取100～120min，萃取完后常温静置半小时，收集蛋白液，可以脱出牡丹蛋白中辛辣味；S3：取步骤S2所得蛋白液3份，加入复合蛋白酶进行酶解，所述复合蛋白酶包括胰凝乳蛋白酶1～2份，果胶酶3～5份，酶活力为110～120u/mL，酶解反应pH6.5～7.0，反应温度40～60℃，反应时间2～4h，酶解后，高温灭活，加入8％～12％的HCl，调节pH至4.0～4.5，在90～100r/min条件下搅拌，使未酶解的牡丹蛋白呈凝乳状析出，过滤分离，提纯后喷雾干燥得牡丹蛋白肽，SDS-PAGE电泳测定蛋白质相对分子质量为小于1000Da，凯氏定氮法测定得到小于1000Da蛋白肽的得率在95％以上。优选的，所述步骤S3中的复合蛋白酶为β-半乳糖苷酶和a-葡萄糖苷酶，加入β-半乳糖苷酶1～2份，a-葡萄糖苷酶4～5份，酶活力为80～90u/mL，酶解反应pH为6.0～7.0，反应温度40～45℃，反应时间3～4h，酶解后，高温灭活，加入8％～12％的HCl，调节pH至4.0～4.5，在70～80r/min条件下搅拌，使未酶解的牡丹蛋白呈凝乳状析出，过滤分离，提纯后喷雾干燥得牡丹蛋白肽，SDS-PAGE电泳测定蛋白质相对分子质量为1000～2000Da，凯氏定氮法测定得到1000～2000Da蛋白肽的得率在95％以上。优选的，所述步骤S3复合蛋白酶为胰凝乳蛋白酶1～2份，果胶酶3～5份，酶活力为110～120u/mL，酶解反应pH6.5～7.0，反应温度40～60℃，反应时间2～4h，酶解后，高温灭活，加入8％～12％的HCl，调节pH至4.0～4.5，在90～100r/min条件下搅拌，使未酶解的牡丹蛋白呈凝乳状析出，过滤分离，提纯后喷雾干燥得牡丹蛋白肽，SDS-PAGE电泳测定蛋白质相对分子质量为2000～3000Da，凯氏定氮法测定得到2000～3000Da蛋白肽的得率在95％以上。不同的复合酶组合，可以破坏牡丹蛋白不同位点的肽键，从而可以得到不同特定分子量的牡丹蛋白肽。优选的，所述牡丹籽粕为带种皮的牡丹籽粕，或者不带种皮的牡丹籽粕。优选的，所述S1中过80～100目筛。优选的，所述S3酶解反应pH为6.8，反应温度为58℃，反应时间为2.5h，酶解后95℃高温灭活15min。优选的，所述复合蛋白酶为β-半乳糖苷酶和a-葡萄糖苷酶时，所述酶解反应pH为6.5，反应温度为43℃，反应时间为3.5h，酶解后95℃高温灭活15min。优选的，所述复合蛋白酶为纤维素酶和糖化酶时，所述酶解反应pH为6.0，反应温度为50℃，反应时间为3.5h，酶解后95℃高温灭活15min。与现有技术相比本专利技术具有以下技术效果：对牡丹籽粕进行再利用，所述牡丹籽粕为带种皮的，或者不带种皮的，先制备牡丹分离蛋白，再利用超临界CO2技术萃取，脱除牡丹蛋白中辛辣味，所得牡丹蛋白用胰凝乳蛋白酶和果胶酶反应，可以得到特定分子量小于1000Da的牡丹蛋白肽，得率在95％以上；所得牡丹蛋白用β-半乳糖苷酶和a-葡萄糖苷酶反应，可以得到特定分子量为1000Da-2000Da的牡丹蛋白肽，得率在95％以上；所得牡丹蛋白用纤维素酶和糖化酶反应，可以得到特定分子量为2000Da-3000Da的牡丹蛋白肽，得率在95％以上。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。下例实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照本领域常规条件或按照制造厂商建议的条件。本领域的技术人员在本专利技术的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本专利技术所要求保护的范围。实施例1一种牡丹蛋白肽制备方法，所述方法步骤为：S1：将牡丹籽粕粉碎，用超临界CO2萃取脱脂，过筛，按料液比1:25与水混合，加入NaOH调节pH9.35，57.6℃条件下磁力搅拌66min，离心(3800r/min，15min)，取上清液，加入HCl，调节pH3.5，离心(3800r/min，15min)，沉淀用少量去离子水清洗至中性后冷冻干燥，得牡丹籽蛋白；S2：将S1所得牡丹籽蛋白溶解，溶解液用超临界CO2萃取，萃取压力12MPa，萃取110min，萃取完后常温静置半小时，收集蛋白液；S3：取步骤S2所得蛋白液3份，加入复合蛋白酶进行酶解，所述复合蛋白酶包括胰凝乳蛋白酶1份，果胶酶3份，酶活力为115u/mL，酶解反应pH6.5，反应温度55℃，反应时间2.5h，酶解后，高温灭活，加入10％的HCl，调节pH至4.3，在90r/min条件下搅拌，过滤分离，提纯后喷雾干燥得相对分子质量为小于1000Da牡丹籽蛋白肽，得率为96.5％。实施例2一种牡丹蛋白肽制备方法，所述方法步骤为：S1：将牡丹籽粕粉碎，用超临界CO2萃取脱脂，过筛，按料液比1:25与水混合，加入NaOH调节pH9.35，57.6℃条件下磁力搅拌66min，离心(3800r/min，15min)，取上清液，加入HCl，调节pH3.5，离心(3800r/min，15min)，沉淀用少量去离子水清洗至中性后冷冻干燥，得牡丹籽蛋白；S2：将S1所得牡丹籽蛋白溶解，溶解液用超临界CO2萃取，萃取压力12MPa，萃取110min，萃取完后常温静置半小时，收集蛋白液；S3：取步骤S2所得蛋白液3份，加入复合蛋白酶进行酶解，所述复合蛋白酶包括胰凝乳蛋白酶1.5份，果胶酶3.5份，酶活力为118u/mL，酶解反应pH6.8，反应温本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种牡丹蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述方法步骤为：S1：将牡丹籽粕粉碎，用超临界CO2萃取脱脂，过筛，按料液比1:20～30与水混合，加入NaOH调节pH9～10，50～60℃条件下磁力搅拌60～70min，离心(3500～4000r/min，13～18min)，取上清液，加入HCl，调节pH3～4，离心(3500～4000r/min，13～18min)，沉淀用少量去离子水清洗至中性后冷冻干燥，得牡丹籽蛋白；S2：将S1所得牡丹籽蛋白溶解，溶解液用超临界CO2萃取，萃取压力10‑14MPa，萃取100～120min，萃取完后常温静置半小时，收集蛋白液；S3：取步骤S2所得蛋白液3份，加入复合蛋白酶进行酶解，所述复合蛋白酶包括胰凝乳蛋白酶1～2份，果胶酶3～5份，酶活力为110～120u/mL，酶解反应pH6.5～7.0，反应温度40～60℃，反应时间2～4h，酶解后，高温灭活，加入8％～12％的HCl，调节pH至4.0～4.5，在90～100r/min条件下搅拌，过滤分离，提纯后喷雾干燥得牡丹蛋白肽。

【技术特征摘要】
1.一种牡丹蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述方法步骤为：S1：将牡丹籽粕粉碎，用超临界CO2萃取脱脂，过筛，按料液比1:20～30与水混合，加入NaOH调节pH9～10，50～60℃条件下磁力搅拌60～70min，离心(3500～4000r/min，13～18min)，取上清液，加入HCl，调节pH3～4，离心(3500～4000r/min，13～18min)，沉淀用少量去离子水清洗至中性后冷冻干燥，得牡丹籽蛋白；S2：将S1所得牡丹籽蛋白溶解，溶解液用超临界CO2萃取，萃取压力10-14MPa，萃取100～120min，萃取完后常温静置半小时，收集蛋白液；S3：取步骤S2所得蛋白液3份，加入复合蛋白酶进行酶解，所述复合蛋白酶包括胰凝乳蛋白酶1～2份，果胶酶3～5份，酶活力为110～120u/mL，酶解反应pH6.5～7.0，反应温度40～60℃，反应时间2～4h，酶解后，高温灭活，加入8％～12％的HCl，调节pH至4.0～4.5，在90～100r/min条件下搅拌，过滤分离，提纯后喷雾干燥得牡丹蛋白肽。2.根据权利要求1所述牡丹蛋白肽的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中的复合蛋白酶为β-半乳糖苷酶和a-葡萄糖苷酶，加入β-半乳糖苷酶1～2份，a-葡萄糖苷酶4～5份，酶活力为80～90u/mL，酶解反应pH为6.0～7.0，反应温度40～45℃，反应时间3～4h，酶解...

【专利技术属性】
技术研发人员：王世英，赵欣，谢瑞生，
申请(专利权)人：世堃堂广东生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44