一种枸杞中甜菜碱的提取检测方法技术

本发明专利技术公开了一种枸杞中甜菜碱的提取检测方法，其原理为：经沸水浴提取枸杞中甜菜碱，用活性炭、亚铁氰化钾、硫酸锌去除色素、蛋白质、脂肪等干扰性成分，在酸性条件下，甜菜碱盐酸盐能与雷氏盐生成红色沉淀，离心过滤弃去上清液后，用70％丙酮溶液溶解沉淀后呈淡粉色液体，反应液在波长为525nm处出现最大吸收峰。本发明专利技术所述的甜菜碱检测方法不仅能够有效提高设备的使用率，而且该方法简单易操作，使用仪器设备均为实验室基本配置，使用化学试剂毒性小，检验人员只需具备基本的化学检验基础就能操作，适合中小型企业及基层检验机构开展提取及检测实验。

A Method for Extraction and Detection of Betaine from Lycium barbarum L.

【技术实现步骤摘要】
一种枸杞中甜菜碱的提取检测方法
本专利技术涉及甜菜碱检测领域，具体涉及一种枸杞中甜菜碱的提取检测方法。
技术介绍
枸杞为“药食同源”物质，《中国药典》记载枸杞有滋补肝肾，益精明目的效用。近年来我国枸杞产业发展迅速，种植面积和产量逐年增长，因其具有极强的耐旱、耐盐碱和耐贫瘠性，主要产区分布在宁夏、甘肃、青海、新疆、内蒙等西北地区，逐渐已成为当地主要经济支柱，为精准扶贫提供助力。但枸杞加工尚处于初级阶段，当地企业生产模式单一、初级产品多、产品深加工少、产品附加值低，对枸杞的有效成分开发研究较少。枸杞作为一种经济作物全身是宝，有效成分主要有枸杞多糖、甜菜碱、枸杞色素等，目前针对枸杞有效成分的研究还主要集中于枸杞多糖，而对枸杞中甜菜碱的研究较少。甜菜碱(betaine)学名三甲基胺乙内酯，化学式为C5H11NO2，许多枸杞属植物果实、根皮、叶中均含有甜菜碱，作为一种渗透调节物质在高等植物体内普遍存在，有许多优良的药理作用，在体内起甲基供体作用，是枸杞中对脂类代谢或抗脂肪肝的主要活性物质。甜菜碱具有渗透调节作用，在高同型半胱氨酸血症的治疗中安全而有效，对多种肝脏疾病有很好的治疗作用，而且大肠杆菌具有明显抑菌作用。目前，甜菜碱的测定主要依托2项农业部推广标准，即：《枸杞中甜菜碱含量的测定高效液相色谱法》(NY/T2947-2016)和《甜菜中甜菜碱的测定比色法》(NY/T1746-2009)。其中，第一种测定方法是使用高效液相色谱法测定枸杞中的甜菜碱，枸杞中甜菜碱含量基本在1.0％～3.0％之间，采用液相色谱法，检出限为0.001g/100g，取样量需低于0.2g，降低了样品的代表性；使用此方法进行了多次测定实验可以发现：该测定方法的提取净化步骤仅将枸杞涡旋1min、均质2min、离心5min后上固相萃取柱，用有机试剂洗脱两次无法将甜菜碱有效分离出来，蛋白、脂肪、色素等杂质也去除不完全，上机后杂峰多，误差大，需实验人员自己摸索优化提取净化条件，试验难度较大；而且高效液相色谱价格较高，还必须配备固相萃取装置和氮吹仪，使用有机试剂也必须是色谱纯，实验人员也要具备大型精密仪器设备操作经验和优化试验方法的能力，不适合中小型企业和基层检验检测机构开展实验。第二种测定方法不适用于枸杞中甜菜碱的测定，其前处理时间过长，仅仅用水浸泡3h，无法对甜菜碱充分提取，枸杞中蛋白质含量在10～14％，粗脂肪含量在2～3％，必须要去除蛋白、脂肪、色素等干扰因素，否则最后的沉淀物为薄膜状，无法用有机试剂溶解检测；此方法是离心后弃去上清液，留存沉淀为目标物，可上清液无法准确移除，导致标准曲线线性较差，样品测量结果误差大，而且此标准计算式中稀释倍数错误，导致结果相差50％，此标准不能正常使用。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种操作简单，适合中小企业及基层检验机构的枸杞中甜菜碱的提取检测方法。为了解决上述技术问题，本专利技术采用以下技术方案：一种枸杞中甜菜碱的提取检测方法，包括以下步骤：(1)制备甜菜碱提取液精确称取一定量的枸杞粉末置于具塞锥形瓶中，依次加入活性炭和适量蒸馏水，沸水浴提取1.0～2.0h，提取完毕后，冷却至室温后定量转移至容量瓶中，加入亚铁氰化钾溶液和硫酸锌溶液，充分混匀，加入蒸馏水定容、摇匀，放置5min后采用定量滤纸过滤上清液，即可得到甜菜碱提取液；(2)制备甜菜碱待测液吸取一定量的所述甜菜碱提取液置于刻度离心管中，加盖后置于冰箱中在4℃下存放15min，打开盖滴加一定量的雷氏盐溶液，加盖后置于冰箱中在4℃下存放1h；取出置于离心机中离心后，定量滤纸过滤弃去上清液，用少量冰水轻轻冲洗滤纸1—2次；小心取下滤纸后展开，用丙酮溶液分三次将滤纸上的少量滤渣小心洗入原离心管，即可得到甜菜碱待测液；(3)绘制标准曲线精确吸取甜菜碱标准品溶液，配制形成一系列具有相同体积、不同浓度的甜菜碱标准液，并将该系列甜菜碱标准液置于冰箱中，在4℃下存放15min，分别滴加一定量的雷氏盐溶液后，再次置于冰箱中在4℃下存放1h；取出置于离心机中离心后，定量滤纸过滤弃去上清液，用少量冰水轻轻冲洗滤纸1—2次；小心取下滤纸后展开，用丙酮溶液分三次将滤纸上的少量滤渣小心洗入原离心管后，分别置于紫外-可见分光光度计中测定525nm处的吸光度，并以质量浓度为横坐标、吸光度为纵坐标作图，获得甜菜碱的标准曲线和标准曲线方程；(4)获取样品检测结果将步骤(2)中制备的所述甜菜碱待测液置于紫外-可见分光光度计中测定525nm处的吸光度，并将检测结果带入步骤(3)所得标准曲线方程中，计算得出待测样品中甜菜碱的质量浓度，进而换算得到枸杞中甜菜碱的含量。进一步，步骤(1)中，所述枸杞粉末的制备方法为：将枸杞样品置于冰箱中，在-18℃下持续冷冻18h后采用高速粉碎机粉碎。进一步，步骤(1)中，所述枸杞粉末与所述活性炭的质量比为1.0:0.50。进一步，步骤(1)中，所述亚铁氰化钾溶液的浓度为150g/L，所述硫酸锌溶液的浓度为300g/L，所述枸杞粉末与所述亚铁氰化钾溶液、硫酸锌溶液的添加比例为1g:2.0mL:2.0mL。进一步，所述雷氏盐溶液的浓度为15g/L，步骤(2)中，所述甜菜碱提取液与所述雷氏盐溶液的体积比为1.0:5.0，步骤(3)中，所述甜菜碱标准液与所述雷氏盐溶液的体积比为1.0:5.0。进一步，所述丙酮溶液的浓度为70％，步骤(2)、(3)中，所述丙酮溶液的用量相同。进一步，步骤(3)中，所述甜菜碱标准品溶液的配制方法为：精确称取0.0180g的甜菜碱标准品置于10mL烧杯中，加入适量蒸馏水，搅拌使之溶解后，转移至10mL容量瓶中定容。进一步，所述甜菜碱标准品为纯度＞92.0％的C5H11NO2。进一步，步骤(2)、(3)中，离心条件为在10000r/min下持续15min。本专利技术所述枸杞中甜菜碱的提取检测方法的原理为：经沸水浴提取枸杞中甜菜碱，用活性炭、亚铁氰化钾、硫酸锌去除色素、蛋白质、脂肪等干扰性成分，在酸性条件下，甜菜碱盐酸盐能与雷氏盐生成红色沉淀，离心过滤弃去上清液后，用70％丙酮溶液溶解沉淀后呈淡粉色液体，反应液在波长为525nm处出现最大吸收峰。本专利技术与现有技术相比具有以下优点：(1)本专利技术采用紫外可见分光光度法测定枸杞中甜菜碱的含量，该方法是《枸杞》(GB/T18672-2014)中测定枸杞多糖的指定方法，方法成熟，而且紫外-可见分光光度计现已成为各检测机构和食品生产企业的必要配置设备之一，因此本专利技术所述的甜菜碱检测方法不仅能够有效提高设备的使用率，而且该方法简单易操作，使用仪器设备均为实验室基本配置，使用化学试剂毒性小，检验人员只需具备基本的化学检验基础就能操作，适合中小型企业及基层检验机构开展提取及检测实验。(2)在枸杞中甜菜碱的提取方法中，本专利技术选取纯水作为提取剂，与现有技术中常用的甲醇、乙醇相比，不仅能够保证甜菜碱的溶解性，而且能够更加有利于甜菜碱产品在食品、化妆品中的添加；在加热提出过程中，为了去除色素对比色的影响，本专利技术采取一份样品中加入0.25～0.50份活性炭的方式，能够有效除去提取液原有的橙黄色；本专利技术选取浓度为150g/L的亚铁氰化钾溶液和浓度为300g/L的硫酸锌溶液的复合沉淀剂，巧妙地利用了乙酸锌与亚铁氰化钾反应生成能够本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种枸杞中甜菜碱的提取检测方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)制备甜菜碱提取液精确称取一定量的枸杞粉末置于具塞锥形瓶中，依次加入活性炭和适量蒸馏水，沸水浴提取1.0～2.0h，提取完毕后，冷却至室温后定量转移至容量瓶中，加入亚铁氰化钾溶液和硫酸锌溶液，充分混匀，加入蒸馏水定容、摇匀，放置5min后采用定量滤纸过滤上清液，即可得到甜菜碱提取液；(2)制备甜菜碱待测液吸取一定量的所述甜菜碱提取液置于刻度离心管中，加盖后置于冰箱中在4℃下存放15min，打开盖滴加一定量的雷氏盐溶液，加盖后置于冰箱中在4℃下存放1h；取出置于离心机中离心后，定量滤纸过滤弃去上清液，用少量冰水轻轻冲洗滤纸1—2次；小心取下滤纸后展开，用丙酮溶液分三次将滤纸上的少量滤渣小心洗入原离心管，即可得到甜菜碱待测液；(3)绘制标准曲线精确吸取甜菜碱标准品溶液，配制形成一系列具有相同体积、不同浓度的甜菜碱标准液，并将该系列甜菜碱标准液置于冰箱中，在4℃下存放15min，分别滴加一定量的雷氏盐溶液后，再次置于冰箱中在4℃下存放1h；取出置于离心机中离心后，定量滤纸过滤弃去上清液，用少量冰水轻轻冲洗滤纸1—2次；小心取下滤纸后展开，用丙酮溶液分三次将滤纸上的少量滤渣小心洗入原离心管后，分别置于紫外‑可见分光光度计中测定525nm处的吸光度，并以质量浓度为横坐标、吸光度为纵坐标作图，获得甜菜碱的标准曲线和标准曲线方程；(4)获取样品检测结果将步骤(2)中制备的所述甜菜碱待测液置于紫外‑可见分光光度计中测定525nm处的吸光度，并将检测结果带入步骤(3)所得标准曲线方程中，计算得出待测样品中甜菜碱的质量浓度，进而换算得到枸杞中甜菜碱的含量。...

【技术特征摘要】
1.一种枸杞中甜菜碱的提取检测方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)制备甜菜碱提取液精确称取一定量的枸杞粉末置于具塞锥形瓶中，依次加入活性炭和适量蒸馏水，沸水浴提取1.0～2.0h，提取完毕后，冷却至室温后定量转移至容量瓶中，加入亚铁氰化钾溶液和硫酸锌溶液，充分混匀，加入蒸馏水定容、摇匀，放置5min后采用定量滤纸过滤上清液，即可得到甜菜碱提取液；(2)制备甜菜碱待测液吸取一定量的所述甜菜碱提取液置于刻度离心管中，加盖后置于冰箱中在4℃下存放15min，打开盖滴加一定量的雷氏盐溶液，加盖后置于冰箱中在4℃下存放1h；取出置于离心机中离心后，定量滤纸过滤弃去上清液，用少量冰水轻轻冲洗滤纸1—2次；小心取下滤纸后展开，用丙酮溶液分三次将滤纸上的少量滤渣小心洗入原离心管，即可得到甜菜碱待测液；(3)绘制标准曲线精确吸取甜菜碱标准品溶液，配制形成一系列具有相同体积、不同浓度的甜菜碱标准液，并将该系列甜菜碱标准液置于冰箱中，在4℃下存放15min，分别滴加一定量的雷氏盐溶液后，再次置于冰箱中在4℃下存放1h；取出置于离心机中离心后，定量滤纸过滤弃去上清液，用少量冰水轻轻冲洗滤纸1—2次；小心取下滤纸后展开，用丙酮溶液分三次将滤纸上的少量滤渣小心洗入原离心管后，分别置于紫外-可见分光光度计中测定525nm处的吸光度，并以质量浓度为横坐标、吸光度为纵坐标作图，获得甜菜碱的标准曲线和标准曲线方程；(4)获取样品检测结果将步骤(2)中制备的所述甜菜碱待测液置于紫外-可见分光光度计中测定525nm处的吸光度，并将检测结果带入步骤(3)所得标准曲线方程中，计算得出待测样品中甜菜碱的质量浓度，进而换算得到枸杞中甜菜碱的含量。2.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：史蓉，周丽，刘兴斌，马正华，曾文锦，任兴权，李婷婷，苏菊，段亭，王蓉，刘盼，
申请(专利权)人：酒泉市食品检验检测中心，
类型：发明
国别省市：甘肃,62