一种同时检测常染色体和Y染色体STR基因座的复合扩增试剂盒制造技术

本发明专利技术公开同时检测常染色体和Y染色体STR基因座的复合扩增试剂盒，其含有对应38个基因座的36组特异性扩增引物对，包括序列SEQ ID NO.1～74。本申请可同时分析A‑STR及Y‑STR两种数据用于案件的快速排查，达到缩短检测时间同时提高排除和确定犯罪嫌疑人的效率。

A multiplex amplification kit for simultaneous detection of autosomal and Y-chromosome STR loci

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测常染色体和Y染色体STR基因座的复合扩增试剂盒
本专利技术属于分析遗传学领域，涉及人类染色体STR基因座的复合扩增检验系统，尤其涉及一种同时检测常染色体和Y染色体STR基因座的复合扩增试剂盒。
技术介绍
短串联重复序列(STR)是目前普遍应用的分子遗传标记，它片段小易扩增，适宜于检验微量和降解生物检材，各基因座的扩增条件相似而能够实现复合扩增和自动化检测，因而具有灵敏、准确、快速、信息量大等优点，非常适用于建立DNA数据库，因此DNA-STR分型技术已成为法医物证检验的主要手段之一。目前，用于法医检测的STR分型包括常染色体STR分型和Y染色体分型检测，且常染色体STR分型检测与Y染色体STR分型检测一般都是分开的。最多在常染色体检测中加入了DYS391。因为DYS391多态性差，主要用于辅助性别判定。例如，当一个重大刑事案件发生时，往往会对现场提取的物证先进行常染色体STR检测，当确认为男性犯罪嫌疑人遗留的物证时，再加做Y染色体STR检测，由此增加侦查线索。同时STR分型技术因受到检材状态、扩增位点个数、扩增体系等因素的影响，仅PCR过程的时间长达3个小时左右，由此往往因为增加了检测时间而延误抓获犯罪嫌疑人的最佳机会，同时也会因为犯罪嫌疑人遗留在现场的物证量少导致检测失败，最终失去侦查线索。总而言之，随着刑事案件的增多，现有检测试剂盒已无法很好的满足公安实战对于法医DNA的快速检验和现场检验能力的要求，如何实现常染色体STR基因座和Y染色体STR基因座同时检测，并且具有达到缩短检测时间同时提高排除和确定犯罪嫌疑人的效率成为有待解决的问题。专利
技术实现思路
鉴于上述现有技术存在的缺陷，本专利技术的目的是提出一种同时检测常染色体和Y染色体STR基因座的复合扩增试剂盒。本专利技术的目的将通过以下技术方案得以实现：一种同时检测常染色体和Y染色体STR基因座的复合扩增试剂盒，其特征在于，至少包括36组特异性扩增引物对，其序列分别依次为：SEQIDNO.1～2、SEQIDNO.3～4、SEQIDNO.5～6、SEQIDNO.7～8、SEQIDNO.9～10、SEQIDNO.11～12、SEQIDNO.13～14、SEQIDNO.15～16、SEQIDNO.17～18、SEQIDNO.19～20、SEQIDNO.21～22、SEQIDNO.23～24、SEQIDNO.25～27、SEQIDNO.28～29、SEQIDNO.30～31、SEQIDNO.32～33、SEQIDNO.34～35、SEQIDNO.36～37、SEQIDNO.38～39、SEQIDNO.40～41、SEQIDNO.42～43、SEQIDNO.44～45、SEQIDNO.46～47、SEQIDNO.48～49、SEQIDNO.50～51、SEQIDNO.52～53、SEQIDNO.54～55、SEQIDNO.56～57、SEQIDNO.58～60、SEQIDNO.61～62、SEQIDNO.63～64、SEQIDNO.65～66、SEQIDNO.67～68、SEQIDNO.69～70、SEQIDNO.71～72、SEQIDNO.73～74。在一些实施例中，所述特异性扩增引物对应38个STR基因座，所述38个STR基因座位于至少一个常染色体和至少一个Y染色体上，所述基因座依次为：DYS391、D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、DYS527a/b、DYS635、DYS458、DYS456、TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、DYS385a/b、DYS438、DYS448、DYS437、D19S433、vWA、DYS19、D18S51、DYS576、Amelogenin、D8S1179、D5S818、D21S11、FGA、DYS533、DYS393、DYS389I、DYS389II、DYS439、DYS392、Y_GATA_H4、DYS390及DYS481。在一些实施例中，所述特异性扩增引物的终浓度为0.025μM～0.51μM。在一些实施例中，将所述38个STR基因座分组。在一些实施例中，将所述38个STR基因座至少分为5组：DYS391、D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、DYS527a/b、DYS635和DYS458为第一组；DYS456、TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、DYS385a/b、DYS438和DYS448为第二组；DYS437、D19S433、vWA、DYS19、D18S51、DYS576为第三组；Amelogenin、D8S1179、D5S818、D21S11、FGA、DYS533为第四组；DYS393、DYS389I、DYS389II、DYS439、DYS392、Y_GATA_H4、DYS390及DYS481为第五组。在一些实施例中，将所述特异性扩增引物中的至少一条引物的5’端进行标记。在一些实施例中，所述各组基因座对应的特异性扩增引物的5’端采用荧光染料标记。在一些实施例中，所述荧光染料包括6-FAM、HEX、SUM、LYN、和/或PUR。在一些实施例中，所述试剂盒包括反应混合液、特异性复合扩增引物、热启动Taq酶、DNA标准品、sdH2O、AllelicLadder、荧光分子量内标，其中反应混合液的组成为：Tris-HCl50mM、MgCl22.0mM、KCl50mM、dNTPs0.2mM、BSA0.8mg/ml。在一些实施例中，所述试剂盒的扩增体系为反应混合液：10.0μL；热启动Taq酶：1.0μL；引物混合物：5.0μL；基因组DNA：0.125ng～5.0ng；sdH2O补足至25.0μL。一种根据上述的复合扩增试剂盒的使用方法，当所述特异性扩增引物用于扩增时，扩增程序为：预变性，95℃2min；15个循环，94℃30s，60℃40s，72℃1min；15个循环，94℃30s，58℃1min，65℃1min20s；终延伸，60℃20min；4℃保温维持。在一些实施例中，将所述特异性扩增引物采用所述扩增程序扩增，其扩增产物的片段长度为600bp。一种上述的复合扩增试剂盒在法医个体识别、嫌疑人家系排查、恶性事件中微量男性样本检测、常染色体数据库、Y染色体数据库、和/或亲权鉴定中的应用。在一些实施例中，所述复合扩增试剂盒适用于多种类型的检材，所述检材包括利用Chelex法、磁珠提取法或有机法抽提法中任意一种方法提取的人基因组DNA、和/或通过滤纸、FTA卡、棉签、纱布中任意一种载体收集的人类血液或口腔细胞。与现有技术相比，本专利技术提供的一种同时检测38个染色体基因座的复合扩增试剂盒，达到的技术效果是：1)本申请即能用Y染色体基因座信息于嫌疑人的快速排查，又能根据常染色体基因座信息确定嫌疑人；2)本专利技术包含了公安部DNA数据库推荐使用的15个A-STR基因座，同时涵盖了22个高多态性的Y-STR基因座，实现单管同时扩增检测38个基因座；3)本申请采用AGCUMarkerSIZ-600分析，将STR试剂盒检测片段提升至600bp，实现了一次实验同时分析A-STR及Y-STR两种数据，可同时用于案件的快速排查，达到缩短检测时间同时提高排本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种同时检测常染色体和Y染色体STR基因座的复合扩增试剂盒，其特征在于，至少包括36组特异性扩增引物对，其序列分别依次为：SEQ ID NO.1～2、SEQ ID NO.3～4、SEQ ID NO.5～6、SEQ ID NO.7～8、SEQ ID NO.9～10、SEQ ID NO.11～12、SEQ ID NO.13～14、SEQ ID NO.15～16、SEQ ID NO.17～18、SEQ ID NO.19～20、SEQ ID NO.21～22、SEQ ID NO.23～24、SEQ ID NO.25～27、SEQ ID NO.28～29、SEQ ID NO.30～31、SEQ ID NO.32～33、SEQ ID NO.34～35、SEQ ID NO.36～37、SEQ ID NO.38～39、SEQ ID NO.40～41、SEQ ID NO.42～43、SEQ ID NO.44～45、SEQ ID NO.46～47、SEQ ID NO.48～49、SEQ ID NO.50～51、SEQ ID NO.52～53、SEQ ID NO.54～55、SEQ ID NO.56～57、SEQ ID NO.58～60、SEQ ID NO.61～62、SEQ ID NO.63～64、SEQ ID NO.65～66、SEQ ID NO.67～68、SEQ ID NO.69～70、SEQ ID NO.71～72、SEQ ID NO.73～74。...

【技术特征摘要】
1.一种同时检测常染色体和Y染色体STR基因座的复合扩增试剂盒，其特征在于，至少包括36组特异性扩增引物对，其序列分别依次为：SEQIDNO.1～2、SEQIDNO.3～4、SEQIDNO.5～6、SEQIDNO.7～8、SEQIDNO.9～10、SEQIDNO.11～12、SEQIDNO.13～14、SEQIDNO.15～16、SEQIDNO.17～18、SEQIDNO.19～20、SEQIDNO.21～22、SEQIDNO.23～24、SEQIDNO.25～27、SEQIDNO.28～29、SEQIDNO.30～31、SEQIDNO.32～33、SEQIDNO.34～35、SEQIDNO.36～37、SEQIDNO.38～39、SEQIDNO.40～41、SEQIDNO.42～43、SEQIDNO.44～45、SEQIDNO.46～47、SEQIDNO.48～49、SEQIDNO.50～51、SEQIDNO.52～53、SEQIDNO.54～55、SEQIDNO.56～57、SEQIDNO.58～60、SEQIDNO.61～62、SEQIDNO.63～64、SEQIDNO.65～66、SEQIDNO.67～68、SEQIDNO.69～70、SEQIDNO.71～72、SEQIDNO.73～74。2.根据权利要求1所述的一种复合扩增试剂盒，其特征在于，所述特异性扩增引物对应38个STR基因座，所述38个STR基因座位于至少一个常染色体和至少一个Y染色体上，所述基因座依次为：DYS391、D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、DYS527a/b、DYS635、DYS458、DYS456、TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、DYS385a/b、DYS438、DYS448、DYS437、D19S433、vWA、DYS19、D18S51、DYS576、Amelogenin、D8S1179、D5S818、D21S11、FGA、DYS533、DYS393、DYS389I、DYS389II、DYS439、DYS392、Y_GATA_H4、DYS390及DYS481。3.根据权利要求1所述的一种复合扩增试剂盒，其特征在于，所述特异性扩增引物的终浓度为0.025μM～0.51μM。4.根据权利要求2所述的一种复合扩增试剂盒，其特征在于，将所述38个STR基因座分组。5.根据权利要求4所述的一种复合扩增试剂盒，其特征在于，将所述38个STR基因座至少分为5组：DYS391、D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、DYS527a/b、DYS635和DYS...

【专利技术属性】
技术研发人员：周如华，石云杰，张健，王鑫，陈维忠，陈晶晶，崔扬，秦东梅，柳勇，李发院，郭育林，夏子芳，
申请(专利权)人：苏州市公安局刑事科学技术研究所，无锡中德美联生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32