【技术实现步骤摘要】
一种制备金针菇子实体组织切片的方法
本专利技术涉及生物组织学
，具体而言，涉及一种制备金针菇子实体组织切片的方法。
技术介绍
目前针对金针菇子实体的发育研究主要集中在环境调控、基因分析和遗传育种等方面，而针对其子实体的细胞学结构研究还比较少见，这一缺失极大限制了金针菇生理、病理和形态学的研究的深入开展。金针菇子实体的组织观察对于金针菇生理、病理和形态学的研究极为关键。现有技术中，石蜡切片常采用二甲苯作为透明剂。而二甲苯具有细胞学毒性，具体体现在诱导线粒体解偶联和氧化应激反应且能通过呼吸道和皮肤粘膜进入人体，损害神经和血液系统，引起神经衰弱、植物神经紊乱和皮肤粘膜刺激等症状。因此，提供一种制备金针菇子实体组织切片的方法尤为重要。鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种制备金针菇子实体组织切片的方法，该方法采用柠檬烯作为金针菇石蜡切片操作中重要的透明剂和脱蜡剂，在获得清晰图像质量的金针菇子实体组织切片的同时，极大减少了操作环境的污染，保证了操作人员的人身安全。本专利技术是这样实现的：一种制备金针菇子实体组织切片的方法，包括如下依次进行的...
【技术保护点】
1.一种制备金针菇子实体组织切片的方法，其特征在于，包括如下依次进行的步骤，先将经脱水处理后的金针菇材料浸泡于柠檬烯与纯乙醇的混合液中进行初步透明处理，再将初步透明处理的金针菇材料浸泡于柠檬烯中进行二次透明处理；将经二次透明处理后的金针菇材料放入柠檬烯与液体石蜡混合液中进行初步浸蜡处理，再将初步浸蜡处理后的金针菇材料放入液体石蜡中进行二次浸蜡处理；然后将经二次浸蜡处理后的金针菇材料依次进行包埋处理，切片和烤片，将烤片处理的载玻片放入柠檬烯中浸泡脱蜡。
【技术特征摘要】
1.一种制备金针菇子实体组织切片的方法，其特征在于，包括如下依次进行的步骤，先将经脱水处理后的金针菇材料浸泡于柠檬烯与纯乙醇的混合液中进行初步透明处理，再将初步透明处理的金针菇材料浸泡于柠檬烯中进行二次透明处理；将经二次透明处理后的金针菇材料放入柠檬烯与液体石蜡混合液中进行初步浸蜡处理，再将初步浸蜡处理后的金针菇材料放入液体石蜡中进行二次浸蜡处理；然后将经二次浸蜡处理后的金针菇材料依次进行包埋处理，切片和烤片，将烤片处理的载玻片放入柠檬烯中浸泡脱蜡。2.根据权利要求1所述的制备金针菇子实体组织切片的方法，其特征在于，所述初步透明处理具体包括先将金针菇材料浸泡于柠檬烯与纯乙醇的体积比为0.8-1.2:1.8-2.2的溶液中处理25-35min，再将处理后的金针菇材料浸泡于柠檬烯与乙醇染色液的体积比为1.7-2.3:0.9-1.1的混合液中染色处理25-35min，所述二次透明处理包括将染色处理后的金针菇材料在柠檬烯中处理1-3次，每次25-35min；优选的，所述初步透明处理具体包括先将金针菇材料浸泡于柠檬烯与纯乙醇的体积比为1:2的溶液中处理30min，再将处理后的金针菇材料浸泡于柠檬烯与乙醇染色液的体积比为2:1的混合液中染色处理30min，所述乙醇染色液为乙醇番红O染色液，所述乙醇番红O染色液的浓度为10g/L，所述二次透明处理包括将染色处理后的金针菇材料在柠檬烯中处理2次，每次30min。3.根据权利要求1所述的制备金针菇子实体组织切片的方法，其特征在于，所述柠檬烯为D-柠檬烯，L-柠檬烯或DL-柠檬烯中的任意一种，优选的，所述柠檬烯为D-柠檬烯。4.根据权利要求1所述的制备金针菇子实体组织切片的方法，其特征在于，所述初步浸蜡处理具体包括将二次透明处理后的金针菇材料放入柠檬烯中，在52-57℃下，每隔1.8-2.2h向柠檬烯中添加1-2g石蜡，当总的溶液体积达到柠檬烯体积的1.9-2.1倍时，停止添加石蜡，保温12h完成初步浸蜡处理，再将初步浸蜡处理后的金针菇材料置于新的液体石蜡中进行二次浸蜡处理，在58℃下保温处理3-4次，每次处理2...
【专利技术属性】
技术研发人员：万佳宁，王瑞娟，龚明，鲍大鹏，尚晓冬，汪莹，茅文俊，尚俊军，唐利华，杨慧，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：上海,31
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