内源Rv2823c编码蛋白在结核杆菌基因插入、敲除、干扰及突变体文库筛选中的应用制造技术

本发明专利技术涉及原核生物内源性基因作为应用工具的领域，具体涉及一种内源Rv2823c编码蛋白在结核杆菌基因插入、敲除、干扰及突变体文库筛选中的应用，其中，内源Rv2823c编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；内源Rv2823c基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明专利技术将构建好的质粒pMV‑gRNA‑HDR导入结核杆菌中即可实现基因的插入、敲除或者干扰及突变体文库的筛选。与噬菌体或者转座子方法相比，该方法可以快速实现单一或多个基因的同时编辑，更优的是可以实现生长必需基因的干扰。

Application of Endogenous Rv2823c Encoding Protein in Gene Insertion, Knockout, Interference and Mutant Library Screening of Mycobacterium tuberculosis

【技术实现步骤摘要】
内源Rv2823c编码蛋白在结核杆菌基因插入、敲除、干扰及突变体文库筛选中的应用
本专利技术涉及原核生物内源性基因作为应用工具的领域，具体涉及一种内源Rv2823c编码蛋白在结核杆菌基因插入、敲除、干扰及突变体文库筛选中的应用。
技术介绍
据世界卫生组织(WorldHealthOrganization，WHO)的最新报道，由结核杆菌(Mycobacteriumtuberculosis，简称Mtb)感染导致的结核病是全世界十大死因之一，2016年全球新增结核病患者104万人，14万人死于该病。超过95％的结核病死亡发生在低收入和中等收入国家，我国也是结核病发生的主要国家之一。由于抗生素的不合理使用等原因，造成耐多药和广泛耐药结核杆菌菌株的出现，这为该病的防治带来了极大挑战。全球发布了终结结核病的战略，但是目前使用的卡介苗对结核病的预防效果变得越来越不明显，因此迫切需要开发新型弱毒疫苗。对结核杆菌基因功能及其致病分子机制的解析对挖掘新型药物靶点和疫苗候选基因至关重要。然而，当前使用的噬菌体侵染法敲除结核杆菌毒力基因具有很多缺点，如效率低、周期长、一些生长必须基因的敲除无法实现等，需要新型本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种内源Rv2823c编码蛋白在结核杆菌中进行基因插入、敲除或干扰以及生长必需基因突变体文库筛选中的应用，其中，内源Rv2823c编码蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；内源Rv2823c基因的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

【技术特征摘要】
1.一种内源Rv2823c编码蛋白在结核杆菌中进行基因插入、敲除或干扰以及生长必需基因突变体文库筛选中的应用，其中，内源Rv2823c编码蛋白的氨基酸序列如SEQIDNo.1所示；内源Rv2823c基因的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述插入、敲除或干扰的基因为结核杆菌的基因组中任意一个或多个基因。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：再进一步地，所述基因为生长必需基因。4.一种适用于权利要求1所述基因插入、敲除或干扰编辑功能的重组质粒，其特征在于：所述质粒内含有一个以上与结核杆菌靶基因互作的引导序列x，x为1、2、3、4……；其中，引导序列x为靶基因序列中任意选取40bp的核苷酸序列。5.一种适用于权利要求1所述生长必需基因突变体文库筛选的重组质粒文库，其特征在于：所述质粒文库内N个质粒，所有质粒中含有5658个与结核杆菌靶基因互作的引导序列x，x为1、2、3、4……；其中，引导序列为靶基因编码链上任意40bp的核苷酸序列。6.一种权利要求4所述适用于自身基因插入、敲除或干扰编辑功能的重组质粒的构建办法，其特征在于：包括以下步骤：1)设计重复序列，其中，重复序列repeat为tcgtcagacccaaaaccccgagagg...

【专利技术属性】
技术研发人员：曹罡，陈西，穆罕默德·贾迈勒，凯斯塔·拉赫曼，徐伟泽，周伟，杨冰，雷莹莹，曹晓建，林达，傅振芳，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42