一种洪湖碘泡虫极囊的分离纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种洪湖碘泡虫极囊的分离纯化方法，包括组织样品匀浆、孢子纯化、超声破碎、Percoll密度梯度离心、极囊回收、二次纯化、回收液重悬清洗。该方法主要利用极囊和其他杂质质量比重的不同实现极囊和杂质的分离，采用50%、70%、90%Percoll分离液对孢子破碎液进行密度梯度离心，在50%与70%Percoll溶液层之间以及70%Percoll分离液中部可获得纯度接近100%的完整极囊。本发明专利技术为粘孢子虫极囊的来源提供了一种新的途径，提纯的极囊将有助于研究洪湖碘泡虫生物学特性、解析生活史的薄弱环节、阐明致病机制以及建立早期检测手段等。

Isolation and Purification of the Polar Cyst of Echinococcus iodidus from Honghu Lake

【技术实现步骤摘要】
一种洪湖碘泡虫极囊的分离纯化方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种洪湖碘泡虫极囊的分离纯化方法。
技术介绍
粘孢子虫(myxozoans)是养殖鱼类常见寄生虫，部分种类能导致养殖鱼类重大病害的发生。其中，洪湖碘泡虫是异育银鲫“喉孢病”病原，会在鲫咽部形成豆腐渣样孢囊，夺取宿主营养、阻碍鱼体进食及造成机械压迫，最终导致鱼体死亡。“喉孢病”死亡率可超过90％，严重危害着异育银鲫养殖产业发展。当前“喉孢病”的防治面临着若干瓶颈。一方面，洪湖碘泡虫的生物学特性及其致病机制尚不清楚，难以有针对性地建立病害防治手段，另一方面，生产实践中缺乏快速和准确的物种鉴定技术，严重阻碍病害监测。极囊是粘孢子虫的重要结构，在粘孢子虫成熟后，极丝从极囊中释放出来，粘附于中间宿主，孢质进入其体内发育成放射孢子虫(actinosporean)。放射孢子虫在其感染鱼类宿主时，极丝粘附宿主表皮器官，孢质进入其体内发育为成熟孢子，因此极囊是粘孢子虫顺利完成生活史的关键因素。极囊里储存的毒素还被认为是碘泡虫的致病机制之一。此外，碘泡虫的极丝具有较好的免疫原性，可作为免疫学检测手段的潜在靶点。基于此，极囊是粘孢子虫病本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种洪湖碘泡虫极囊的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：A、组织样品匀浆：将镜检发现含有洪湖碘泡虫孢囊的鲫咽剪下，放入匀浆器中，加入0.1M PBS缓冲液充分研磨，直至匀浆器中无明显组织块；B、孢子纯化：用双层医用纱布过滤匀浆，收集滤液；用0.1M PBS缓冲液离心清洗2‑3次，重悬于PBS缓冲液；通过蔗糖密度梯度离心分离出孢子，PBS缓冲液清洗后重悬；C、超声破碎：将孢子悬液置于冰上，超声波破碎仪破碎，获得孢子破碎液；D、Percoll密度梯度离心：配制体积百分比为50％、70％、90％的Percoll分离液，依次将Percoll密度梯度离心液和孢子破碎液加入离心管中，2000‑40...

【技术特征摘要】
1.一种洪湖碘泡虫极囊的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：A、组织样品匀浆：将镜检发现含有洪湖碘泡虫孢囊的鲫咽剪下，放入匀浆器中，加入0.1MPBS缓冲液充分研磨，直至匀浆器中无明显组织块；B、孢子纯化：用双层医用纱布过滤匀浆，收集滤液；用0.1MPBS缓冲液离心清洗2-3次，重悬于PBS缓冲液；通过蔗糖密度梯度离心分离出孢子，PBS缓冲液清洗后重悬；C、超声破碎：将孢子悬液置于冰上，超声波破碎仪破碎，获得孢子破碎液；D、Percoll密度梯度离心：配制体积百分比为50％、70％、90％的Percoll分离液，依次将Per...

【专利技术属性】
技术研发人员：顾泽茂，郭庆祥，翟艳花，柳阳，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42