一种消化系统恶性肿瘤标志物及其制备抑制消化系统恶性肿瘤药物的方法技术方案

本发明专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种消化系统恶性肿瘤标志物及其制备抑制消化系统恶性肿瘤药物的方法。HYAL2作为临床诊断消化系统恶性肿瘤的应用，通过荧光定量PCR检测其在消化系统恶性肿瘤中的表达情况，根据表达情况，将HYAL2作为消化系统恶性肿瘤早期诊断的分子标志物。构建干扰HYAL2基因表达的载体用于抑制消化系统恶性肿瘤药物；利用构建的载体，制备用于离体施用或体内施用的药物。本发明专利技术通过大量的实验数据证明，HYAL2在消化系统恶性肿瘤的发生和发展过程中起着重要的调控作用，干扰HYAL2基因表达显著抑制消化系统恶性肿瘤细胞的增殖和迁移，HYAL2可望成为新的制备防治消化系统恶性肿瘤的药物。

A Marker of Malignant Tumor of Digestive System and the Method of Preparing Drugs for Inhibiting Malignant Tumor of Digestive System

【技术实现步骤摘要】
一种消化系统恶性肿瘤标志物及其制备抑制消化系统恶性肿瘤药物的方法
本专利技术属于生物医药领域，特别是指一种消化系统恶性肿瘤标志物及其制备抑制消化系统恶性肿瘤药物的方法。
技术介绍
随着社会经济发展和饮食结构的改变，消化系统恶性肿瘤的发病率明显上升，因消化系统恶性肿瘤导致的死亡人数约占所有因癌症死亡人数的四分之三，严重威胁人类的生命健康。消化系统恶性肿瘤主要包括食管癌、胃癌、结直肠癌、肝癌、胆管癌、胰腺癌。消化系统作为人体的主要系统之一，其恶性肿瘤的发生有着相似的病理生理学基础。虽然目前对其研究已取得一系列进展，但其发生的确切分子机制尚不能完全明确，且具体到某一类型的肿瘤也并不相同。目前多认为其发生是由于环境、遗传、免疫及内分泌等多重因素共同作用的结果。其中胃癌的发生多与幽门螺杆菌的感染相关，临床上约65%的胃癌患者可检测到幽门螺杆菌感染；食管癌的发生与亚硝胺类物质的摄入、某些微量元素及维生素的缺乏密切相关；结直肠癌的发生多因高脂肪饮食及纤维素摄入不足所致；胆结石等胆囊疾病的慢性刺激是胆囊癌发生的重要因素；乙肝病毒和丙肝病毒感染、酒精、肝硬化、亚硝胺类物质及黄曲霉素等与肝癌的发生相关；胰腺癌的致病因素尚不明确，但糖尿病及慢性胰腺炎患者的发病风险较高。在消化系统恶性肿瘤发生的早期阶段，通过外科切除术或联合放疗、化疗技术能够有效治疗此类疾病。此外，靶向治疗和免疫治疗等新式疗法在治疗消化系统恶性肿瘤方面已取得突破性进展。但到目前为止，中晚期消化系统恶性肿瘤患者的预后仍不理想，此类疾病仍无法被彻底治愈。胃镜、食管镜、肠镜检查，B超及CT等检查手段都能有效发现早期消化系统恶性肿瘤，因此近几十年来此类疾病的死亡率已呈明显下降趋势。但消化系统恶性肿瘤起病隐匿，早期症状多不明显，病人被确诊时多已进展至中晚期，治疗难度大，患者生存率差。因此筛查有效的分子标志物并揭示其在消化系统恶性肿瘤发生中的作用机制，对于此类疾病的早期诊断和开发相关治疗药物具有重要意义。透明质酸是一种大分子多聚糖，作为人体中的固有成分分布于细胞质和细胞间质中，对细胞和器官起着滋润和润滑作用。在美容、抗衰老和抗关节炎等领域中已有广泛的应用。透明质酸经透明质酸合成酶（Hyaluronansynthase,HAS）合成后被排至细胞外周或细胞外基质，与其受体结合后可以调节细胞的增殖与迁移。透明质酸被透明质酸酶（Hyaluronidase,HYAL）降解后可被细胞吞噬或经淋巴系统转运。体内的HYAL主要包括HYAL1和HYAL2，在许多恶性肿瘤中常可检测到大量的透明质酸片段。透明质酸也是恶性肿瘤的主要基质分子之一，其含量升高会直接影响恶性肿瘤的预后情况。临床上可通过检测透明质酸或HYAL来诊断恶性肿瘤的发生。透明质酸在恶性肿瘤的发生中并不是单独发挥作用。较多的研究表明，HAS、HYAL及透明质酸受体在恶性肿瘤组织中均有广泛分布，这些家族成员共同作用形成一条与细胞周围间质相互作用的代谢链，参与恶性肿瘤的发生、侵袭、转移、肿瘤血管生成及淋巴组织侵犯等病理过程。研究证实HYAL及透明质酸水平的升高与多种恶性肿瘤的发生密切相关。如：HYAL1在肺癌、前列腺癌、卵巢癌中过表达，也与乳腺癌的侵袭和转移相关；HYAL2在星形细胞瘤和三阴乳腺癌中表达升高，但在非霍奇金淋巴瘤和黑色素瘤中表达异常降低。其表达水平降低或升高与临床预后密切相关。但到目前为止，HYAL2在消化系统恶性肿瘤中的表达情况及与消化系统恶性肿瘤发生的关系还未曾有报道。因此本专利技术将检测HYAL2基因在不同类型的消化系统恶性肿瘤组织中的表达情况，旨在为消化系统恶性肿瘤检测及风险提示提供新的诊断标志物，并在此基础上研究HYAL2表达下调对消化系统恶性肿瘤发生的影响，旨在为消化系统恶性肿瘤的治疗提供新的药物靶向，这对于提高消化系统恶性肿瘤的早期诊断率及改善消化系统恶性肿瘤患者的生存状况具有潜在价值。
技术实现思路
为提高消化系统恶性肿瘤的早期诊断率，有效抑制其发生和发展，本专利技术公开了HYAL2作为消化系统恶性肿瘤早期诊断的分子标志物及其抑制消化系统恶性肿瘤的应用。本专利技术的技术方案是这样实现的：一种消化系统恶性肿瘤标志物，所述标志物为HYAL2。所述消化系统恶性肿瘤标志物的荧光定量PCR引物对为：正向引物如SEQIDNO：1所示，反向引物如SEQIDNO：2所示。消化系统恶性肿瘤标志物制备抑制消化系统恶性肿瘤药物方法，步骤如下：（1）以HYAL2为目标调控基因，构建干扰HYAL2基因表达的载体；（2）利用步骤（1）中的载体，制备用于离体施用或体内施用的药物。所述步骤（1）中干扰HYAL2表达的基因包括敲除或沉默HYAL2编码基因，抑制或降低HYAL2的转录和翻译功能，以及干扰HYAL2蛋白功能发挥的一种或多种基因。所述步骤（1）中的载体为病毒载体或非病毒基因沉默载体。所述病毒载体为腺病毒载体、腺相关病毒载体、逆转录病毒载体或疱疹病毒载体。所述非病毒基因沉默载体为CRISPR/Cas9系统基因敲除载体、RNAi系统基因沉默载体或在此基础上改造的载体。所述消化系统恶性肿瘤为人类的消化系统恶性肿瘤组织，包括食管癌、胃癌、结直肠癌、肝癌、胆管癌、胰腺癌。本专利技术的有益效果在于：第一：本专利技术通过可靠的荧光定量PCR方法，筛选发现HYAL2在多种类型的消化系统恶性肿瘤组织中的表达均发生明显升高，该方法的灵敏度高，特异性强，可作为消化系统恶性肿瘤临床早期诊断的标志物。第二：本专利技术通过大量的实验数据证明，HYAL2在消化系统恶性肿瘤的发生和发展过程中起着重要的促进作用，干扰HYAL2基因表达能够显著抑制消化系统恶性肿瘤细胞的增殖和迁移，HYAL2可望成为新的防治消化系统恶性肿瘤的药物靶点。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为荧光定量PCR分析HYAL2在不同类型消化系统恶性肿瘤组织及癌旁正常组织中的mRNA表达情况；（图A）其中食管癌组织来源于食管癌患者的癌组织（n=15），癌旁组织来源于食管癌患者的癌旁正常组织（n=15）；（图B）胃腺癌组织及癌旁正常组织（n=15）；（图C）结直肠腺癌组织及癌旁正常组织（n=15）；（图D）肝细胞癌组织及癌旁正常组织（n=15）；（图E）胆管癌组织及癌旁正常组织（n=15）；（图F）胰腺癌组织及癌旁正常组织（n=15）；β-actin作为HYAL2的内参对照基因。图2为荧光定量PCR分析，A：在结直肠癌HCT116细胞中转染靶向HYAL2的小干扰RNA(HYAL2-siRNA)后，细胞内HYAL2基因mRNA水平的变化；B：在结直肠癌HCT116细胞中转染HYAL2-siRNA后，细胞内HYAL2蛋白表达水平的变化。图3为干扰HYAL2基因对结直肠癌HCT116细胞增殖的影响，结直肠癌HCT116细胞转染HYAL2-siRNA24，48，72小时后，癌细胞的增殖情况。图4为划痕实验分析干扰HYAL2基因对结直肠癌HCT116细胞迁移的影响；A：结直肠癌HCT116细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种消化系统恶性肿瘤标志物，其特征在于：所述标志物为HYAL2。

【技术特征摘要】
1.一种消化系统恶性肿瘤标志物，其特征在于：所述标志物为HYAL2。2.权利要求1所述的消化系统恶性肿瘤标志物，其特征在于：所述消化系统恶性肿瘤标志物的荧光定量PCR引物对为：正向引物如SEQIDNO：1所示，反向引物如SEQIDNO：2所示。3.权利要求1所述的消化系统恶性肿瘤标志物制备抑制消化系统恶性肿瘤药物方法，其特征在于，步骤如下：（1）以HYAL2为目标调控基因，构建干扰HYAL2基因表达的载体；（2）利用步骤（1）中的载体，制备用于离体施用或体内施用的药物。4.根据权利要求3所述的消化系统恶性肿瘤标志物制备抑制消化系统恶性肿瘤药物方法，其特征在于：所述步骤（1）中干扰HYAL2表达的基因包括敲除或沉默HYAL2编码基因，抑制或降低HYAL2的转录和翻译功能，以及干扰HYAL2蛋白功能发挥的一种或多种...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈卫东，聂小博，王艳东，周云，叶文凌，
申请(专利权)人：河南大学，
类型：发明
国别省市：河南,41