软骨细胞的细胞外基质来源的肽制造技术

本发明专利技术涉及一种具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的肽，具体而言，本发明专利技术提供了一种从动物软骨细胞来源的细胞外基质分离的基于II型胶原蛋白α1的肽及其应用。

【技术实现步骤摘要】
软骨细胞的细胞外基质来源的肽本申请是申请日为2017年2月9日、专利技术名称为“软骨细胞的细胞外基质来源的肽”的申请号为201780035505.3的专利申请的分案申请。
本专利技术涉及一种新的肽及其应用。
技术介绍
细胞外基质(ECM)是组织中除细胞外的其余成分，其由细胞分泌的各种结构分子和功能分子的三维组合组成，并且由于其特性和功能尚未完全确定，因此无法对其进行人工合成。细胞外基质在维持细胞环境中扮演重要角色，同时还能决定组织的物理性质(如牵引力、抗压强度和组织形状的弹性)，并控制渗透压、离子的渗透性等。此外，细胞外基质具有很多生长因子和细胞因子，并在决定细胞功能方面扮演重要角色，并且特别是，其调节胎儿和生长阶段的细胞的分化或者为组织生长提供方向，同时增加或减少细胞粘附和代谢活动。细胞外基质具有：用于决定组织的物理性质的蛋白质，如胶原蛋白和弹性蛋白；以及用于连接细胞和细胞外基质的糖蛋白，如纤连蛋白、层粘连蛋白；以及充当支撑物以保持体积的多种蛋白聚糖，如硫酸软骨素。细胞外基质通过维持组织的形状和体积，并与组织中的细胞积极相互作用，得以作为独特的组织或器官来维持和发挥功能。然而，细胞外基质的组成和结构尚未完全阐明。
技术实现思路
技术问题本专利技术的目的是提供一种新的肽，所述肽通过抑制或改善由角膜的炎症、新生血管化、浑浊和纤维化引起的病理变化，能够预防或治疗眼表疾病。技术方案本专利技术提供了具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的肽。本专利技术提供了用于预防或治疗眼表疾病的药物组合物，所述药物组合物包含具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的肽作为活性成分。本专利技术提供了用于预防或改善眼表疾病的健康食品，所述健康食品包含具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的肽作为活性成分。本专利技术提供了用于预防或治疗黄斑变性的药物组合物，所述药物组合物包含具有SEQIDNO:1的氨基酸序列的肽作为活性成分。本专利技术提供了用于预防或改善黄斑变性的健康食品，所述健康食品包含具有SEQIDNO:1的氨基酸序列的肽作为活性成分。本专利技术提供了用于预防或治疗干眼症的药物组合物，所述药物组合物包含具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的肽作为活性成分。本专利技术提供了用于预防或改善干眼症的健康食品，所述健康食品包含具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的肽作为活性成分。有益效果本专利技术的新的肽已被证实降低角膜浑浊、新生血管化和纤维化；并在由碱烧伤诱导眼表病理变化的动物模型中抑制炎症诱导因子的表达；并且通过有效地抑制视网膜和脉络膜(其中已诱导了组织变化)中的血管生成来预防和改善黄斑变性；以及抑制或改善角膜上皮细胞的病理变化，所述病理变化如眼球泪液量的减少、角膜表面的不规则性和结膜杯状细胞的缺失；并因此能够提供包含所述肽作为活性成分的组合物作为用于预防或治疗眼部疾病的药物组合物和健康食品。附图说明图1为合成的羟脯氨酸-GQDGLAGPK肽的报告。图2示出了使用HPLC对羟脯氨酸-GQDGLAGPK肽的纯度进行分析的结果。图3示出了通过离子质谱对羟脯氨酸-GQDGLAGPK肽的分子量进行确认的结果。图4示出了确认Hyp-GQDGLAGPK在用碱烧伤的兔角膜中的作用的结果；图4A是在碱烧伤后第0天、第7天和第17天通过显微镜(SZX7，Olympus，Tokyo，日本)拍摄的兔角膜的照片(比例尺＝10mm)；图4B为示出角膜新生血管化程度的图表；以及图4C为示出角膜浑浊度的图表。所述图表示出了各测试组的平均值±标准偏差(n＝5)，并通过t检验，相比于碱烧伤组的值，*P<0.05被视为是显著的。图5示出了确认Hyp-GQDGLAGPK对用碱烧伤的兔角膜的厚度变化的影响的结果；图5A为通过虚拟显微镜(NanoZoomer2.0RS，Hamamatsu，日本)拍摄的组织切片的照片(比例尺＝1mm)；以及图5B为示出角膜厚度的图表。图6示出了在通过Masson三色染色法对眼部成纤维细胞进行免疫染色后用虚拟显微镜(NanoZoomer2.0RS，Hamamatsu，日本)拍摄的照片(比例尺＝100μm)，从而确认Hyp-GQDGLAGPK对用碱烧伤的兔角膜纤维化变化的影响；并且以褐色显示的部分为成纤维细胞。图7示出了确认Hyp-GQDGLAGPK对用碱烧伤的兔中的血管生成标志物的作用的结果，且图7为通过虚拟显微镜(NanoZoomer2.0RS，Hamamatsu，日本)拍摄的用特异性抗体CD31、FGF和VEGF进行免疫染色的组织切片的照片(比例尺＝300μm)。图8示出了确认Hyp-GQDGLAGPK对用碱烧伤的兔中的炎症标志物的作用的结果，且图8为在用特异性抗体(如巨噬细胞、TNF-α、ICAM-1、IL-1β、IL-6和MMP-9)对组织切片进行免疫组化染色后通过虚拟显微镜(NanoZoomer2.0RS，Hamamatsu，日本)拍摄的照片(比例尺＝300μm)。图9示出了确认在用胶原蛋白、GDRGD(CPI)和羟脯氨酸-GQDGLAGPK(CPII)处理的HUVEC细胞中对血管生成的抑制作用的结果。图10示出了确认激光照射后14天内由激光照射引起的血管生成和组织塌陷的程度的结果。图11示出了对脉络膜血管新生化的抑制作用：由激光照射动物模型后，用浓度为2μg、10μg和20μg的胶原蛋白或浓度为2μg-20μg的GDRGD(CPI)和羟脯氨酸-GQDGLAGPK(CPII)处理所述动物模型。图12示出了确认对脉络膜血管新生化的抑制作用的结果：由激光照射动物模型后，分别用浓度为5μg的阿瓦斯汀(Avastin)或羟脯氨酸-GQDGLAGPK(CPII)处理所述动物模型。图13示出了实时RT-PCR的结果，确认了VEGF、ICAM和MCP-1的基因表达水平：由激光照射动物模型后，分别用浓度为5μg的阿瓦斯汀或羟脯氨酸-GQDGLAGPK(CPII)处理所述动物模型，并在激光照射14天后从视网膜和脉络膜提取RNA。图14示出了确认所获得的视网膜和脉络膜提取物中的VEGF、VEGFR-1(Flt-1)、VEGR-2(Flk-1)和血管生成素2的蛋白质表达水平的蛋白质印迹的结果：由激光照射动物模型后，分别用浓度为5μg的阿瓦斯汀或羟脯氨酸-GQDGLAGPK(CPII)处理所述动物模型，并在激光照射14天后进行提取。图15示出了作为以平均值±标准差表示的定量结果的由在NOD.B10.H2b小鼠中用生理盐水、Hyp-GQDGLAGPK、胶原蛋白、CsA、DQS和HA进行的处理引起的各小鼠的泪滴量的变化，其中去除了干燥应激。通过向NOD.B10.H2b小鼠的眼中注射生理盐水、Hyp-GQDGLAGPK、胶原蛋白、CsA、DQS和HA，持续3天、5天、7天和10天，并测量小鼠的泪滴量。*P<0.05vs.DS10D组；#P<0.05vs.生理盐水组；§P<0.05vs.Hyp-GQDGLAGPK处理组；处理组；处理组；&P<0.05vs.HA处理组。图16示出了Hyp-GQDGLAGPK肽对角膜表面屈曲的作用；图16A示出了在NOD.B10.H2b小鼠(DS)中用生理盐水、Hyp-GQDGLAGPK、胶原蛋白、CsA、DQS和HA处理3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的肽在制造用于预防或治疗黄斑变性的药物组合物方面的用途。

【技术特征摘要】
2016.04.08 KR 10-2016-0043296;2016.04.08 KR 10-2011.具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列的肽在制造用于预防或治疗黄斑变性的药物组合物方面的用途。2.如权利要求1所述的用途，其中，所述肽的第一个氨基酸为羟脯氨酸(Hyp)。3.如权利要求1所述的用途，其中，所述肽来源于II型胶原蛋白α1。4.如权利要求3所述的用途，其中，所述II型胶原蛋白α1从动物软骨细胞来源的细胞外基质中分离。5.如权利要求1-4中任一项所述的用途，其中，所述肽抑制眼部新...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁在郁，
申请(专利权)人：韩国视角生物株式会社，
类型：发明
国别省市：韩国,KR