细胞微囊、载有抗癌药物的细胞微囊、其制备方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种细胞微囊、载有抗癌药物的细胞微囊、其制备方法和应用。细胞微囊的制备方法包括如下步骤：(1)培养免疫细胞，取细胞上清液；(2)将步骤(1)所述的细胞上清液离心以去除细胞及细胞碎片，取上清液；(3)将步骤(2)所述的上清液离心以去除凋亡小体，取上清液；(4)将步骤(3)所述的上清液离心，取沉淀，即得；步骤(3)中所述离心的条件包括：离心力为2000‑3000g，离心时间为40‑100min。该制备方法操作简单，可获得具有优良生物活性、结构完整、纯度高、粒径均一的细胞微囊，将所得细胞微囊通过简单的孵育即可负载脂溶性的抗癌药物，用于预防或者治疗癌症疾病，效果很好，靶向性好，毒副作用低。

Cell microcapsules, cell microcapsules containing anticancer drugs, preparation methods and Applications

【技术实现步骤摘要】
细胞微囊、载有抗癌药物的细胞微囊、其制备方法和应用
本专利技术涉及生物和医药
，特别是涉及一种细胞微囊、载有抗癌药物的细胞微囊、其制备方法和应用。
技术介绍
根据世界卫生组织的报道，肿瘤即癌症是世界第二大死因，就全球范围而言，近六分之一的死亡是由癌症造成的。脂质体剂型由于其能减少药物在体内的毒副作用，常被用在临床癌症治疗上。目前，临床上使用的脂质体粒径大小在100nm左右，含有磷脂、胆固醇等脂质成分，但由于其作为外源性物质缺少生物活性，束缚了它进一步发展成为精准治疗的药物载体。机体循环系统中的各种免疫细胞分泌的囊泡具有多种的生理功能，这些功能包括，持久的血液循环寿命、对内源性物质和代谢物的转运能力、对病变部位的趋向性、穿过脂性生物膜屏障，激活免疫系统，刺激血管再生等。鉴于囊泡具有上述所携带的天然生物功能，且粒径范围为50nm～200nm，越来越多的研究者考虑将其开发为新型药物载体。胞外囊泡主要分为三种：凋亡小体、微囊和外泌体，微囊和外泌体均广泛存在并分布在各种体液中，可由多种细胞分泌的膜性囊泡，是体内的信息传递信使，其中外泌体是被研究和被应用的主要对象，而对于微囊的研究较少。
技术实现思路
基于此，本专利技术提供了一种细胞微囊的制备方法，该制备方法操作简单，可获得结构完整、纯度高的细胞微囊。具体技术方案如下：一种细胞微囊的制备方法，包括如下步骤：(1)培养免疫细胞，取细胞上清液；(2)将步骤(1)所述的细胞上清液离心以去除细胞及细胞碎片，取上清液；(3)将步骤(2)所述的上清液离心以去除凋亡小体，取上清液；(4)将步骤(3)所述的上清液离心，取沉淀，即得；步骤(3)中所述离心的条件包括：离心力为2000-3000g，离心时间为40-100min。在其中一些实施例中，步骤(3)中所述离心的条件包括：离心力为2400-2600g，离心时间为50-90min。在其中一些实施例中，步骤(3)中所述离心的条件包括：离心力为2400-2600g，离心时间为50-70min。在其中一些实施例中，步骤(2)中所述离心的条件包括：离心力为400-600g，离心时间为5-80min。在其中一些实施例中，步骤(2)中所述离心的条件包括：离心力为450-550g，离心时间为8-15min。在其中一些实施例中，步骤(4)中所述离心的条件包括：离心力为8000-20000g，离心时间为40-80min。在其中一些实施例中，步骤(4)中所述离心的条件包括：离心力为9000-11000g，离心时间为50-70min。在其中一些实施例中，所述细胞微囊的制备方法还包括如下纯化的步骤：(5)将步骤(4)所述沉淀用无菌生理盐水重悬，离心，取沉淀，即得。在其中一些实施例中，步骤(5)中所述离心的条件包括：离心力为8000-20000g，离心时间为40-80min。在其中一些实施例中，步骤(5)中所述离心的条件包括：离心力为9000-11000g，离心时间为50-70min。在其中一些实施例中，所述培养的时间为12-72小时。在其中一些实施例中，所述培养的时间为40-56小时。本专利技术还公开了一种细胞微囊。该细胞微囊通过简单的孵育即可负载脂溶性的抗癌药物，用于治疗癌症疾病，治疗效果佳，动物体内治疗效果明显优于商品化脂质体和同源外泌体。具体技术方案如下：一种细胞微囊，由上述制备方法制备得到。本专利技术还公开了一种载有抗癌药物的细胞微囊。该载有抗癌药物的细胞微囊用于治疗癌症疾病，治疗效果佳，动物体内治疗效果明显优于载有抗癌药物的商品化脂质体和同源外泌体。具体技术方案如下：一种载有抗癌药物的细胞微囊，由上述的细胞微囊和脂溶性抗癌药物制备得到。在其中一些实施例中，所述脂溶性抗癌药物选自：阿霉素、紫杉醇和卡莫司汀中的至少一种。在其中一些实施例中，所述细胞微囊和所述脂溶性抗癌药物的配比为8-20mg：1μmol。在其中一些实施例中，所述细胞微囊和所述脂溶性抗癌药物的配比为9-12mg：1μmol。本专利技术还公开了上述载有抗癌药物的细胞微囊的制备方法。该制备方法非常简单，孵育即可得到产品，并且药物包封率高。具体技术方案如下：上述载有抗癌药物的细胞微囊的制备方法，包括如下步骤：将所述细胞微囊的溶液和所述脂溶性抗癌药物的溶液在温度为30-40℃的条件下静置孵育8-28小时。在其中一些实施例中，所述静置孵育的条件包括：温度为35-39℃，时间为12-24小时。在其中一些实施例中，所述细胞微囊的溶液浓度为5-20mg/mL；及/或，所述脂溶性抗癌药物的溶液浓度为0.5-2mmol/mL。在其中一些实施例中，所述细胞微囊的溶液浓度为8-12mg/mL；及/或，所述脂溶性抗癌药物的溶液浓度为0.8-1.2mmol/mL。本专利技术还提供了上述载有抗癌药物的细胞微囊的应用。具体技术方案如下：上述载有抗癌药物的细胞微囊在制备预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用。本专利技术的细胞微囊、载有抗癌药物的细胞微囊、其制备方法和应用具有如下有益效果：本专利技术制备得到了具有优良生物活性、结构完整、粒径均一的细胞微囊，其制备方法非常简单，仅对免疫细胞的培养上清液通过简单的离心，并且控制一定的离心条件即可获得，操作条件温和、可控，可避免机械损伤造成的人为干扰，可获得完整自然状态的细胞微囊。将所得细胞微囊负载脂溶性的抗癌药物，用于预防或者治疗癌症疾病，效果很好。进一步地，通过差速离心法并且合理控制各步差速离心的条件(离心力和时间)，可以获得粒径更均一、纯度更高的细胞微囊，可以进一步提高负载脂溶性抗癌药物的细胞微囊的抗肿瘤效果。本专利技术负载抗癌药物的细胞微囊的制备方法非常简单，利用脂溶性物质间的静电疏水作用和微囊内外渗透压差异，将微囊与药物在一定条件下孵育即可将药物负载于微囊内，得到载药的细胞微囊产品，该方法制备过程短，成本低，药物的适用范围广泛，脂溶性的药物均可包载，并且稳定性好，载药率高，药物包封率高。负载药物后微囊载体仍保留自身生物特性，生物相容性好，便于高效靶向递送抗癌药物至肿瘤部位，使得负载抗癌药物的细胞微囊治疗靶向性和治疗效果好，动物体内治疗效果明显优于商品化脂质体和同源外泌体，并且治疗靶向性比商品化脂质体更精准，毒副作用更低。附图说明图1为细胞微囊和外泌体的形态鉴定图；图2为细胞微囊和外泌体的粒径检测图；图3为负载阿霉素的细胞微囊和外泌体的药物包封率；图4为负载阿霉素的细胞微囊和外泌体的药物累积泄露量；图5为负载阿霉素的细胞微囊与外泌体的体外抗肿瘤效果；图6为负载阿霉素的细胞微囊与外泌体的体外抗肿瘤细胞侵袭的效果；图7为负载阿霉素的细胞微囊与外泌体给药后药物在体内组织中的分布；图8为负载阿霉素的细胞微囊与外泌体的体内抗肿瘤效果。图中：微囊药物制剂是指本专利技术制备的负载阿霉素的细胞微囊；外泌体药物制剂是指负载阿霉素的外泌体；商品化脂质体制剂是指购自石药集团的盐酸多柔比星脂质体；游离药物盐酸盐是指阿霉素盐酸盐。具体实施方式为了便于理解本专利技术，下面将参照实施例对本专利技术进行更全面的描述，以下给出了本专利技术的较佳实施例。但是，本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。提供这些实施例的目的是使对本专利技术的公开内容的理解更加透彻全面。除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的技本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种细胞微囊的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)培养免疫细胞，取细胞上清液；(2)将步骤(1)所述的细胞上清液离心以去除细胞及细胞碎片，取上清液；(3)将步骤(2)所述的上清液离心以去除凋亡小体，取上清液；(4)将步骤(3)所述的上清液离心，取沉淀，即得；或者包括如下步骤：(1)培养免疫细胞，取细胞上清液；(2)将步骤(1)所述的细胞上清液离心以去除细胞及细胞碎片，取上清液；(3)将步骤(2)所述的上清液离心以去除凋亡小体，取上清液；(4)将步骤(3)所述的上清液离心，取沉淀；(5)将步骤(4)所述沉淀用无菌生理盐水重悬，离心，取沉淀，即得；步骤(3)中所述离心的条件包括：离心力为2000‑3000g，离心时间为40‑100min。

【技术特征摘要】
1.一种细胞微囊的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)培养免疫细胞，取细胞上清液；(2)将步骤(1)所述的细胞上清液离心以去除细胞及细胞碎片，取上清液；(3)将步骤(2)所述的上清液离心以去除凋亡小体，取上清液；(4)将步骤(3)所述的上清液离心，取沉淀，即得；或者包括如下步骤：(1)培养免疫细胞，取细胞上清液；(2)将步骤(1)所述的细胞上清液离心以去除细胞及细胞碎片，取上清液；(3)将步骤(2)所述的上清液离心以去除凋亡小体，取上清液；(4)将步骤(3)所述的上清液离心，取沉淀；(5)将步骤(4)所述沉淀用无菌生理盐水重悬，离心，取沉淀，即得；步骤(3)中所述离心的条件包括：离心力为2000-3000g，离心时间为40-100min。2.根据权利要求1所述的细胞微囊的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述离心的条件包括：离心力为400-600g，离心时间为5-80min；及/或，步骤(3)中所述离心的条件包括：离心力为2400-2600g，离心时间为50-70min；及/或，步骤(4)中所述离心的条件包括：离心力为8000-20000g，离心时间为40-80min；及/或，步骤(5)中所述离心的条件包括：离心力...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯敏，郭羚，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东,44