一种适于红螯螯虾性腺组织mRNA石蜡切片原位杂交的方法技术

本发明专利技术提供一种适于红螯螯虾性腺组织mRNA石蜡切片原位杂交的方法，属于原位杂交技术领域，包括性腺组织包埋、石蜡切片、原位杂交和拍照记录，其中原位杂交采用探针序列为如SEQ ID NO.3所示。本发明专利技术探针对dsx基因的的组织定位有明确的特异性，实现了对dsx基因mRNA水平的显示作用；本发明专利技术在红螯螯虾中建立了石蜡切片mRNA原位杂交的方法来研究相关基因在性腺中的表达模式，能够清晰地描述红螯螯虾性别相关基因在性腺中的表达定位；本发明专利技术方法在石蜡切片脱蜡效果佳的同时避免组织收缩和细胞变形，使得组织仍保持在原位，组织形态保持完整，还能提高酶解效果，使得细胞着色好，核质分明，最终提高原位杂交的准确性。

A method of in situ hybridization for paraffin section of gonadal tissue of crayfish crayfish

【技术实现步骤摘要】
一种适于红螯螯虾性腺组织mRNA石蜡切片原位杂交的方法
本专利技术属于原位杂交
，具体涉及一种适于红螯螯虾性腺组织mRNA石蜡切片原位杂交的方法。
技术介绍
红螯螯虾(Cheraxquadricariratus)，俗称澳洲淡水龙虾，原产澳大利亚北部热带区域和新几内亚南部，隶属于光壳虾属，具有生长快、抗逆强、肉质细嫩、出肉率高等特点，是世界淡水名贵经济虾类之一。和其他淡水十足类动物一样，红螯螯虾雄性个体比雌性生长得更快、体型也更大。红螯螯奸已经得到了广泛的养殖尤其是在近十年来由于其生物学特性比较明显，红螯螯奸的养殖业发展的速度很快。然而，目前对于该虾性表型分化和二态性发育的机制尚不清楚。原位杂交组织(或细胞)化学(InsituHybridizationHistochemistry，ISHH)简称原位杂交(InSituHybridization)，属于固相分子杂交的范畴，它是用标记的DNA或RNA为探针，在原位检测组织细胞内特定核酸序列的方法，广泛应用于实验室分析mRNA在生物组织内的分布和富集程度。因此建立适用于红螯螯虾性腺组织的石蜡切片mRNA原位杂交技术，对性别决定相关基因进本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种适于红螯螯虾性腺组织mRNA石蜡切片原位杂交用探针的方法，其特征在于，按照如下步骤：S1步骤：以逆转录得到的红螯螯虾性腺组织cDNA为模板，利用引物通过PCR反应扩增得到dsx基因的部分ORF序列，该序列作为dsx基因mRNA特异的探针序列；S2步骤：构建dsx基因mRNA原位杂交的探针质粒，将探针质粒转化细菌后，细菌培养后进行测序；S3步骤：制备dsx基因mRNA原位杂交探针。

【技术特征摘要】
1.一种适于红螯螯虾性腺组织mRNA石蜡切片原位杂交用探针的方法，其特征在于，按照如下步骤：S1步骤：以逆转录得到的红螯螯虾性腺组织cDNA为模板，利用引物通过PCR反应扩增得到dsx基因的部分ORF序列，该序列作为dsx基因mRNA特异的探针序列；S2步骤：构建dsx基因mRNA原位杂交的探针质粒，将探针质粒转化细菌后，细菌培养后进行测序；S3步骤：制备dsx基因mRNA原位杂交探针。2.根据权利要求1所述的一种适于红螯螯虾性腺组织mRNA石蜡切片原位杂交用探针的方法，其特征在于：所述dsx基因在精巢中表达，而在卵巢中不表达。3.根据权利要求1所述的一种适于红螯螯虾性腺组织mRNA石蜡切片原位杂交用探针的方法，其特征在于：所述引物的正向引物为：5’-GAATTCTAATACGACTCACTATAGGGA-3’；反向引物为：5’-CCTATAGTGAGTCGTATTAAAGCTT-3’。4.一种适于红螯螯虾性腺组织mRNA石蜡切片原位杂交用探针，其特征在于：采用权利要求1或2或3所述的方法制得。5.根据权利要求4所述的一种适于红螯螯虾性腺组织mRNA石蜡切片原位杂交用探针，其特征在于：所述探针序列为如SEQIDNO.3所示。6.一种适于红螯螯虾性腺组织mRNA石蜡切片原位杂交的方法，包括性腺组织包埋、石蜡切片、原位杂交和拍照记录，其特征在于：所述原位杂交采用权利要求4所述的探针。7.根据权利要求6所...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑建波，贾永义，顾志敏，程顺，李飞，迟美丽，刘士力，蒋文枰，
申请(专利权)人：浙江省淡水水产研究所，
类型：发明
国别省市：浙江,33