一种定点突变的黑曲霉6-4光修复酶及其构建方法技术

本发明专利技术公开了一种定点突变的黑曲霉6‑4光修复酶及其构建方法，所述的光修复酶具有有SEQ ID NO:1，所示的核苷酸序列。本发明专利技术从现有的WT黑曲霉中获得6‑4光修复酶基因基因序列，进行人工密码子优化之后，设计突变引物得到突变的基因片段，连接基因片段与pET22b质粒，构建出重组表达质粒；将该重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞，构建出用于光修复酶表达的基因工程菌在20℃和1mM IPTG条件下获得了较好的表达。相比于WT光修复酶，本发明专利技术表达出的突变体酶S460N的活性更高，而且活性保持更加持久稳定，能更好的修复紫外线造成的DNA损伤，更有利于作为化妆品类，医药类产品的添加成分应用于人们的生活。

A site-directed mutant Aspergillus niger 6-4 photorepair enzyme and its construction method

【技术实现步骤摘要】
一种定点突变的黑曲霉6-4光修复酶及其构建方法
：本专利技术属于生物工程
，涉及基因、蛋白质工程
，具体涉及一种黑曲霉DNA光修复酶基因及其构建方法。
技术介绍
：随着科学技术的发展，人类破坏自然的活动加剧，造成大气中臭氧层稀薄甚至产生空洞，阻挡紫外线的能力减弱。于是到达地球表面的中波紫外线(UVB，280nm-315nm)剂量逐渐增强，导致人类各种皮肤损伤的发病几率大大增加。其原理是UVB能直接被皮肤细胞DNA吸收，引起DNA上两个相邻的胸腺嘧啶产生稳定共价结合的二聚体，包括环丁烷嘧啶二聚体(CPD)和6-4光产物(6-4photoproduct)，这两类二聚体破坏DNA正常结构，从而抑制DNA的复制与转录，引起细胞内信号通路的紊乱，从而造成皮肤疾病甚至是皮肤癌。光修复酶是一类在细菌、真菌、植物和动物中都普遍存在，在修复紫外线造成的DNA损伤中发挥重要作用的酶。自然条件下CPD与6-4光产物这两类光致损伤分别占损伤总量的80-90％和10-20％，分别由CPD光修复酶和6-4光修复酶进行修复。光修复酶通常是一类单体蛋白，以非共价的形式结合了1到2种具有发色团的辅酶，其中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种定点突变的黑曲霉6‑4光修复酶，其特征在于：其含有SEQ ID NO:1，所示的核苷酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种定点突变的黑曲霉6-4光修复酶，其特征在于：其含有SEQIDNO:1，所示的核苷酸序列。2.一种定点突变的黑曲霉6-4光修复酶，其特征在于：其含有SEQIDNO:2的氨基酸序列。3.一种载体，其特征在于：其含有权利要求1所述的核苷酸序列。4.一种宿主细胞，其特征在于：其含有权利要求2所述的氨基酸序列。5.一种宿主细胞，其特征在于：其含有权利要求3所述的载体。6.权利要求1所述的一种定点突变的黑曲霉6-4光修复酶的构建方法，包括以下步骤：从现有的WT黑曲霉(Aspergillusniger)中获得6-4光修复酶基因基因序列，进行人工密码子优化，设计突变引物...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱国萍，文斌，王胜地，徐蕾，王鹏，黄士平，曹正宇，汪源，卞命杰，
申请(专利权)人：安徽师范大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34