一种分析单克隆抗体电荷异质性的离子交换色谱检测方法技术

本发明专利技术涉及一种分析轻链含有一个N糖的单克隆抗体的电荷异质性方法。本发明专利技术通过选择合适的实验条件，使待分析的蛋白样品中的目的单克隆抗体、酸性异构体和碱性异构体等各组分实现有效分离，并能确定图谱中各组分的相对含量，方法的重复性好，具有广泛的工业应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种分析单克隆抗体电荷异质性的离子交换色谱检测方法
本专利技术属于生物制药领域，涉及一种离子交换色谱检测方法，具体地说，涉及用于分析轻链含有一个N糖的单克隆抗体的电荷异质性的离子交换色谱检测方法。
技术介绍
治疗性单克隆抗体药物作为一种靶向性生物治疗药物，至1986年获得FDA批准以来，经过30余年的市场考验，已成为目前全球药物研发的热点。截止到2013年2月，已有34个治疗性抗体获得美国FDA批准上市，用于各种疾病的治疗。其中IgG1型单克隆抗体是获批最多的治疗性单克隆抗体种类，其一般由两条轻重链组成，重链含有一个N糖基化位点，形成复杂的四聚体结构，总体分子量约150KD左右。单克隆抗体分子一般呈现微观不均一性，即“异质性”，包括电荷、疏水、形态等相关的异构体。这些异构体可能来自抗体分子复杂的生物合成途径，如细胞系及培养工艺，也可能来自纯化、制剂等制造过程及贮存过程的任何阶段。其中由于抗体分子所带电荷差异造成的异质性称为电荷异构体，电荷异质性对单克隆抗体的稳定性及其生物学功能发挥具有重要的影响而成为关键质量属性(CQA)，并且电荷异质性可反映其生产工艺的稳定性，所以受到生物技术产业本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种分析单克隆抗体电荷异质性的离子交换色谱检测方法，其特征在于，检测条件包括：采用弱阳离子色谱柱，以流动相A和流动相B进行梯度洗脱，其中，所述的流动相A为缓冲液溶液，所述的流动相B为缓冲液‑盐溶液，所述的缓冲液为HEPES。

【技术特征摘要】
1.一种分析单克隆抗体电荷异质性的离子交换色谱检测方法，其特征在于，检测条件包括：采用弱阳离子色谱柱，以流动相A和流动相B进行梯度洗脱，其中，所述的流动相A为缓冲液溶液，所述的流动相B为缓冲液-盐溶液，所述的缓冲液为HEPES。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的弱阳离子色谱柱为PropacWCX-10色谱柱。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的流动相A和所述的流动相B还包括变性剂，优选的，所述的变性剂的浓度范围为0.5-2M。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的变性剂为尿素。5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的流动相A和所述的流动相B的pH为6.5-8.0，优选为7.5-8.0。6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的缓冲液的浓度范围为5-50mM，优选的，所述的缓冲液的浓度范围为20mM。7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的盐的浓度范围为0.2-2M，优选的，所述的盐的浓度范围为0.5M，更优选的，所述的盐为NaCl。8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的梯度洗脱的条件...

【专利技术属性】
技术研发人员：从倩，袁杰，娄竞，苏冬梅，靳征，刘颖，
申请(专利权)人：沈阳三生制药有限责任公司，深圳赛保尔生物药业有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁,21