一种大鼠重症脑出血合并脓毒症复合模型的建立方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种大鼠重症脑出血合并脓毒症复合模型的建立方法，其包括：大鼠注射麻醉后，断尾取血匀速注入右侧尾状核，获得脑出血大鼠模型；脑出血大鼠模型制备成功后，采用盲肠结扎穿孔法获得重症脑出血合并脓毒症复合模型。本发明专利技术还涉及上述复合模型在制备预防/治疗重症脑出血合并脓毒症的药物中的应用。本发明专利技术成功构建了重症脑出血合并脓毒症复合模型，更好的模拟临床重症脑出血并发感染以及脓毒症的临床表现，为进一步探索重症脑出血合并感染和脓毒症的发病机制和干预措施提供理论基础；并将其具体应用于治疗重症脑出血+脓毒症的药物的筛选，对防治重症脑出血合并感染和脓毒症的发生及后期的康复治疗及预后具有重要的意义。

Establishment and Application of a Compound Model of Severe Cerebral Hemorrhage Complicated with Sepsis in Rats

The invention relates to a method for establishing a compound model of severe cerebral hemorrhage and sepsis in rats, which includes: after injection of anesthesia, Tail-cutting blood is injected uniformly into the right caudate nucleus to obtain a rat model of cerebral hemorrhage; after successful preparation of the rat model of cerebral hemorrhage, cecum ligation and perforation method is used to obtain severe cerebral hemorrhage and sepsis. Compound model. The invention also relates to the application of the composite model in the preparation of drugs for preventing/treating severe cerebral hemorrhage complicated with sepsis. The invention successfully constructs a composite model of severe cerebral hemorrhage complicated with sepsis, better simulates the clinical manifestations of severe cerebral hemorrhage complicated with infection and sepsis, provides a theoretical basis for further exploring the pathogenesis and intervention measures of severe cerebral hemorrhage complicated with infection and sepsis, and specifically applies it to the treatment of severe cerebral hemorrhage. The screening of drugs for hemorrhage and sepsis is of great significance in preventing and treating severe cerebral hemorrhage complicated with infection and sepsis, as well as in later rehabilitation treatment and prognosis.

【技术实现步骤摘要】
一种大鼠重症脑出血合并脓毒症复合模型的建立方法及其应用
本专利技术涉及医用动物模型领域，尤其涉及一种大鼠重症脑出血合并脓毒症复合模型的建立方法及其应用。
技术介绍
在欧美国家脑出血约占整个脑卒中的15％，亚洲人群发病率高于欧美国家，我国的ICH发病比例高达18.47％，30天内的死亡率高达40％～50％，费用高，其中重症脑出血发病率更高，并发感染导致的脓毒症死亡率更高。而院内感染是重症脑出血患者最常见的并发症，其发生率约为80％，由感染引起的脓毒症和多器官功能衰竭是重症脑出血的主要死亡原因之一。重症脑出血患者由于意识障碍，吞咽咳嗽反射下降以及机体防御功能的减弱，尤为容易出现院内感染从而进展为脓毒症。而脓毒症本身又可激发全身严重的炎症反应，进而加重脑出血患者脑水肿程度，导致颅内压进一步增高，患者意识水平下降，形成恶性循环。有研究报道脑出血患者院内感染发生率高达58％，并发脓毒症不仅增加了脑出血患者的住院时间和医疗成本，而且明显增加了死亡率和患者的再次入院率。目前对脑出血和脓毒症的治疗措施各自分开，相互独立，且是针对疾病发展过程中的某些病理生理变化，但不同病因引起的炎症介质的变化并不相同，且这些变化只是整个复杂神经内分泌免疫反应网络的一部分，因而治疗难以达到预期目的。目前对重症脑出血合并脓毒症的自身发生发展及转归、有效的预防，及时的干预、合理选择治疗药物及手段等方面的尚缺少相关研究。
技术实现思路
为了于克服现有技术中的缺陷，本专利技术提供一种大鼠重症脑出血合并脓毒症复合模型的建立方法及其应用，其可模拟临床重症脑出血并发脓毒症的病理生理过程，并建立稳定可复制的重症脑出血并发脓毒症的复合动物模型，对未来深入探讨重症脑出血合并脓毒症的发生发展机制以及干预措施，具有十分重要的意义。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术的第一个目的是提供一种大鼠重症脑出血合并脓毒症复合模型的建立方法，其包括如下步骤：步骤一、脑出血大鼠模型的制备；大鼠注射麻醉后，断尾取血匀速注入右侧尾状核，留置预定时间，缓慢拔针，防止反流，获得脑出血大鼠模型；步骤二、重症脑出血合并脓毒症模型的制备；步骤一的脑出血大鼠模型制备成功后，采用盲肠结扎穿孔法制备脓毒症模型，大鼠注射麻醉后仰卧固定，腹部手术区域皮肤杀菌后铺无菌孔巾，沿正中线剪开皮肤、肌肉、腹膜后牵出盲肠，以无菌丝线测量盲肠全长后取该段丝线对折处所对应的盲肠部位以无菌丝线结扎，扎紧前将盲肠内容物向降部挤压，扎紧后用无菌不锈钢针沿结扎远端肠管外侧缘穿刺两孔并将穿刺针来回抽动后退出穿刺针；轻轻挤压结扎盲肠降部，挤出少量粪质后将肠管还纳腹腔，确认腹腔内无活动性出血后以无菌丝线逐层缝合腹壁，获得重症脑出血合并脓毒症复合模型。为了进一步优化上述建立方法，本专利技术采取的技术措施还包括：进一步地，所述步骤一中，大鼠采用10％水合氯醛320～380mg/kg腹腔注射麻醉，其断尾取血量为50～180ul，其血液注入方法为：2次注入法，先注入一半，留置8～12min后，再注射另一半血量；注入完成后，留置12～18min后拔针。更进一步地，大鼠采用10％水合氯醛350mg/kg腹腔注射麻醉，其断尾取血量为160ul，其血液注入方法为：2次注入法，先注入一半，留置10min后，再注射另一半血量；注入完成后，留置15分钟后拔针。进一步地，所述步骤一中，所述右侧尾状核的注入位置为：前囟中线旁开2.8～3.2mm，冠状缝前0.8～1.2mm，深度5～7mm。更进一步地，所述右侧尾状核的注入位置为：前囟中线旁开3mm，冠状缝前1.0mm，深度6mm。进一步地，所述步骤一中，在拔针后，采用骨蜡封闭颅骨创口，缝合头皮，局部皮肤用复合碘消毒液消毒，防止局部感染。进一步地，在脑出血模型制备成功20～28h后制备重症脑出血合并脓毒症模型。更进一步地，在脑出血模型制备成功24h后制备重症脑出血合并脓毒症模型。进一步地，所述步骤二中，大鼠采用10％水合氯醛腹腔注射麻醉；皮肤杀菌采用安尔碘涂搽；无菌不锈钢针的尺寸为外径2～4mm，其来回抽动的次数为2～5次。更进一步地，大鼠采用10％水合氯醛腹腔注射麻醉；皮肤杀菌采用安尔碘涂搽；无菌不锈钢针的尺寸为外径3mm，其来回抽动的次数为3次。进一步地，所述步骤二中，腹壁缝合完毕后，即刻注射生理盐水15～25毫升/千克体重于大鼠后腿根部皮下。更进一步地，腹壁缝合完毕后，即刻注射生理盐水20毫升/千克体重于大鼠后腿根部皮下。本专利技术的第二个目的是提供一种采用任一上述建立方法制备的大鼠重症脑出血合并脓毒症复合模型在制备预防和治疗重症脑出血合并脓毒症的药物中的应用。与现有技术相比，本专利技术采用上述技术方案具有以下有益效果：本专利技术首次建立一种稳定的重症脑出血+脓毒症的复合模型，更好的模拟临床重症脑出血并发感染以及脓毒症的临床表现，并评估其应用价值，为进一步探索重症脑出血合并感染和脓毒症的发病机制和干预措施提供理论基础。附图说明图1是本专利技术一实施例中自体血注入脑出血法的示意图；图2是本专利技术一实施例中模型建成后不同时间点的脑水肿水肿结果图；图3是本专利技术一实施例中模型建成后脑组织不同时间点炎症因子变化图。具体实施方式本专利技术涉及一种大鼠重症脑出血合并脓毒症复合模型的建立方法，其包括：大鼠注射麻醉后，断尾取血匀速注入右侧尾状核，留置预定时间，缓慢拔针，防止反流，获得脑出血大鼠模型；采用盲肠结扎穿孔法叠加制备脓毒症模型，大鼠注射麻醉后仰卧固定，腹部手术区域皮肤杀菌后铺无菌孔巾，沿正中线剪开皮肤、肌肉、腹膜后牵出盲肠，以无菌丝线测量盲肠全长后取该段丝线对折处所对应的盲肠部位以无菌丝线结扎，扎紧前将盲肠内容物向降部挤压，扎紧后用无菌不锈钢针沿结扎远端肠管外侧缘穿刺两孔并将穿刺针来回抽动后退出穿刺针；轻轻挤压结扎盲肠降部，挤出少量粪质后将肠管还纳腹腔，确认腹腔内无活动性出血后以无菌丝线逐层缝合腹壁，获得重症脑出血合并脓毒症复合模型。本专利技术还涉及上述重症脑出血合并脓毒症复合模型的相关应用。下面结合附图和实施例，对本专利技术的具体实施方式作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本专利技术的技术方案，而不能以此来限制本专利技术的保护范围。实施例1本实施例为一种重症脑出血合并脓毒症复合模型的建立步骤，其包括：1、脑出血大鼠模型(ICH)制备；如图1所示，本实施例参照Rynkowski尾状核注射自体血制备ICH模型：大鼠用10％水合氯醛350mg/kg腹腔注射麻醉后，断尾取血(60ul、80ul、100μL、120μL、150μL、160ul)匀速注入右侧尾状核(前囟中线旁开3mm，冠状缝前1.0mm，深度6mm)。采用2次注入法，先注入一半，留置10min后，再注射另一半血量。留置15分钟，然后缓慢拔针，防止反流。骨蜡封闭颅骨创口，缝合头皮。局部皮肤用复合碘消毒液消毒，防止局部感染。2、重症脑出血合并脓毒症模型(ICH/CLP)制备；脑出血大鼠模型制备成功后24小时，采用盲肠结扎穿(CLP)孔法制备脓毒症模型，10％水合氯醛腹腔内注射麻醉满意后将大鼠仰卧固定，安尔碘涂搽腹部手术区域皮肤2遍后铺无菌孔巾。沿正中线剪开皮肤、肌肉、腹膜后牵出盲肠，以无菌丝线测量盲肠全长后取该段丝线对折处所对应的盲肠部位以1号无菌丝线结扎，扎紧前将盲肠内容物向本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种大鼠重症脑出血合并脓毒症复合模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、脑出血大鼠模型的制备；大鼠注射麻醉后，断尾取血匀速注入右侧尾状核，留置预定时间，缓慢拔针，防止反流，获得脑出血大鼠模型；步骤二、重症脑出血合并脓毒症模型的制备；步骤一的脑出血大鼠模型制备成功后，大鼠注射麻醉后仰卧固定，腹部手术区域皮肤杀菌后铺无菌孔巾，沿正中线剪开皮肤、肌肉、腹膜后牵出盲肠，以无菌丝线测量盲肠全长后取该段丝线对折处所对应的盲肠部位以无菌丝线结扎，扎紧前将盲肠内容物向降部挤压，扎紧后用无菌不锈钢针沿结扎远端肠管外侧缘穿刺两孔并将穿刺针来回抽动后退出穿刺针；轻轻挤压结扎盲肠降部，挤出少量粪质后将肠管还纳腹腔，确认腹腔内无活动性出血后以无菌丝线逐层缝合腹壁，获得重症脑出血合并脓毒症复合模型。

【技术特征摘要】
1.一种大鼠重症脑出血合并脓毒症复合模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、脑出血大鼠模型的制备；大鼠注射麻醉后，断尾取血匀速注入右侧尾状核，留置预定时间，缓慢拔针，防止反流，获得脑出血大鼠模型；步骤二、重症脑出血合并脓毒症模型的制备；步骤一的脑出血大鼠模型制备成功后，大鼠注射麻醉后仰卧固定，腹部手术区域皮肤杀菌后铺无菌孔巾，沿正中线剪开皮肤、肌肉、腹膜后牵出盲肠，以无菌丝线测量盲肠全长后取该段丝线对折处所对应的盲肠部位以无菌丝线结扎，扎紧前将盲肠内容物向降部挤压，扎紧后用无菌不锈钢针沿结扎远端肠管外侧缘穿刺两孔并将穿刺针来回抽动后退出穿刺针；轻轻挤压结扎盲肠降部，挤出少量粪质后将肠管还纳腹腔，确认腹腔内无活动性出血后以无菌丝线逐层缝合腹壁，获得重症脑出血合并脓毒症复合模型。2.根据权利要求1所述的建立方法，其特征在于，所述步骤一中，大鼠采用10％水合氯醛320～380mg/kg腹腔注射麻醉，其断尾取血量为50～180ul，其血液注入方法为：2次注入法，先注入一半，留置8～12min后，再注...

【专利技术属性】
技术研发人员：宫晔，邓水香，朱宏达，冯圣捷，田觅，金朋，
申请(专利权)人：复旦大学附属华山医院，
类型：发明
国别省市：上海,31