一种白掌种质资源离体保存的方法技术

一种白掌种质资源离体保存的方法，以去除叶片后的白掌粗壮吸芽作为外植体，在自来水下冲洗干净，用72～75%酒精消毒45～60秒，用无菌水冲洗1次，用0.1%升汞处理该外植体，用无菌水冲洗3次，无菌滤纸吸干；将外植体切割成带节的茎段接种到芽诱导培养基中培养30天，之后将萌发的腋芽转接到增殖培养基上进行扩繁40天获得丛生苗；将丛生苗分切成单株并转入离体保存培养基中进行保存；离体保存培养基：3g/L花宝1号+1～3g/L NH4NO3+0.5～1.0 g/L善存成人男女综合矿物质复合维生素片+30g/L蔗糖+4g/L琼脂粉。本发明专利技术方法保存16个月的白掌试管苗，其后代植物学性状和ISSR扩增谱带无差异，保存材料稳定，不会发生遗传变异，可防止种性退化和病害感染，保证种质优良特性。

A Method for Preservation of White Palm Germplasm Resources in Vitro

A method for in vitro conservation of germplasm resources of Anthurium palmatum was introduced. The strong suction buds of Anthurium palmatum after removing leaves were used as explants. The explants were rinsed under water, disinfected with 72-75% alcohol for 45-60 seconds, washed with sterile water once, treated with 0.1% mercury liter, washed with sterile water for 3 times, and dried with sterile filter paper. The explants were cut into knotted stems and inoculated into bud induction medium for 3 times. After 0 days, axillary buds germinated were transferred to multiplication medium for 40 days to obtain cluster seedlings. Cluster seedlings were cut into individual plants and transferred to in vitro preservation medium for preservation. In vitro preservation medium: 3g/L Huabao 1 + 1-3g/L NH4NO3 + 0.5-1.0 g/L good storage of adult and male mineral complex vitamin tablets + 30g/L sucrose + 4g/L agar powder. The method of the invention preserves the white palm test-tube seedlings for 16 months, and the botanical characteristics of the offspring have no difference from ISSR amplification bands, the preserved materials are stable, genetic variation will not occur, the seed degeneration and disease infection can be prevented, and the fine characteristics of the germplasm can be guaranteed.

【技术实现步骤摘要】
一种白掌种质资源离体保存的方法
本专利技术涉及植物的种质资源离体保存领域，尤其是指一种白掌种质资源离体保存的方法。
技术介绍
白掌又名白鹤芋，为天南星科白鹤芋属多年生常绿草本植物，既可观叶又可观花，还具有吸收甲醛等有毒有害气体的功能，是目前市场流行的十大盆栽花卉之一。白掌分布于热带美洲、西印度群岛和马来群岛，已报道，原生种41个，栽培品种100多个。由于栽培白掌是杂合体，后代性状容易分离，且种子寿命极短，难以通过种子保存种质资源，而主要通过设施栽培手段进行母本保存，该常规保存方法存在耗费大量人力、物力和财力，容易因病虫害引起种质损失和退化等缺点。在生产上，由于植物组培快繁产业生产的种苗不仅要顺应市场供求的变化而且受到生长季节的制约，在一定阶段使得一些母瓶材料扩繁没有任何意义，需要将母瓶材料进行暂时保存，当实际生产需要时，可将母瓶材料快速恢复到正常快繁状态。同时，高温高湿季节，继代培养容易污染，如能将母瓶材料进行短期保存，不仅节约母瓶材料转接的生产成本，还可降低组培苗种苗变异率。为了解决白掌传统种植保存缺点及种苗组培快繁产业生产中的现实问题，开展白掌种质资源离体保存研究显得日益迫切。离体保存，具有省时、省工，不会因病害引起种质资源丢失，可保持种质优良性状等优点，且便于无病毒种质交换。有关植物离体保存技术已有不少报道。中国专利文献一种菊花种质资源离体保存的方法（申请号CN200710019345.1）和中国专利文献一种减少培养基中大量元素进行菊花离体保存的方法（申请号CN200710019346.6）已分别公开了通过添加脱落酸和减少培养基中大量元素来离体保存菊花的方法，其保存期可达10个月；再如中国专利文献一种东方百合种质资源离体保存方法（申请号CN201010138986.0）公开了通过改进培养基配方和培养步骤方法来离体保存东方百合种质，保存期可达12～15个月；再如中国专利文献一种彩色马蹄莲种质资源离体保存方法（申请号CN200710164732.4）公开了通过减少培养基中大量元素，添加甘露醇和青霉素方法进行彩色马蹄莲离体种质保存，保存期可达12个月。但是目前尚未有技术公开如何保存白掌试管苗，此问题亟需解决。
技术实现思路
本专利技术提供一种白掌种质资源离体保存的方法，其主要目的在于克服目前白掌种质资源设施大棚种植保存成本高，容易受病虫害影响，而组织培养正常继代保存转接频繁、成本高的缺陷。为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：一种白掌种质资源离体保存的方法，包括以下步骤：1)外植体选择和消毒：以去除叶片后的白掌粗壮吸芽作为外植体，先在自来水下冲洗干净，之后用72～75%酒精对该外植体表面进行消毒45～60秒，再用无菌水冲洗1次，然后用0.1%升汞处理该外植体10～12分钟，再用无菌水冲洗3次，无菌滤纸吸干备用；2)试管苗繁殖：将步骤1处理后的外植体切割成带节的茎段接种到酸碱度为5.8～6.0的芽诱导培养基中以温度27～29℃、光照强度1200～1500lux、光照时间12小时/天的条件培养30天，之后将萌发的腋芽转接到酸碱度为5.8～6.0的增殖培养基上以温度27～29℃、光照强度1200～1500lux、光照时间12小时/天的条件进行扩繁40天获得丛生苗；其中，芽诱导培养基：4g/L花宝1号+30g/L蔗糖+0.1～0.3mg/LTDZ+0.05～0.1mg/LNAA+5g/L琼脂粉；增殖培养基：3g/L花宝1号+1～3g/LNH4NO3+0.05～0.15mg/LTDZ+0.05～0.1mg/LNAA+30g/L蔗糖+5g/L琼脂粉；3)试管苗保存：将步骤2中获得的丛生苗分切成单株并转入酸碱度为6.1～6.5的离体保存培养基中以温度20～25℃、光照强度1000～1200lux、光照时间8小时/天的条件进行保存；其中，离体保存培养基：3g/L花宝1号+1～3g/LNH4NO3+0.5～1.0g/L善存成人男女综合矿物质复合维生素片+30g/L蔗糖+4g/L琼脂粉。进一步的，所述离体保存培养基为3g/L花宝1号+1g/LNH4NO3+0.5g/L善存成人男女综合矿物质复合维生素片+30g/L蔗糖+4g/L琼脂粉。进一步的，所述离体保存培养基为3g/L花宝1号+1g/LNH4NO3+0.75g/L善存成人男女综合矿物质复合维生素片+30g/L蔗糖+4g/L琼脂粉。进一步的，所述离体保存培养基为3g/L花宝1号+1g/LNH4NO3+1.0g/L善存成人男女综合矿物质复合维生素片+30g/L蔗糖+4g/L琼脂粉。进一步的，所述芽诱导培养基为4g/L花宝1号+30g/L蔗糖+0.1mg/LTDZ+0.05mg/LNAA+5g/L琼脂粉。进一步的，所述增殖培养基为3g/L花宝1号+1g/LNH4NO3+0.1mg/LTDZ+0.05mg/LNAA+30g/L蔗糖+5g/L琼脂粉。和现有技术相比，本专利技术产生的有益效果在于:1、本专利技术利用在离体保存培养基中添加善存成人男女综合矿物质复合维生素片保存白掌试管苗，试管苗保存16个月后存活率仍为100%，且植株生长正常，而常规培养基上的试管苗仅能存活5个月。2、本专利技术方法保存16个月的白掌试管苗，其后代植物学性状和ISSR扩增谱带无差异，保存材料稳定，不会发生遗传变异，可防止种性退化和病害感染，保证种质优良特性。3、本专利技术利用在离体保存培养基中添加善存成人男女综合矿物质复合维生素片保存白掌试管苗，与传统的设施大棚种植保存相比，可节省保存空间，减少工作量。4、本专利技术减少了生产中继代接种工作，降低生产操作过程中不必要的人工和材料成本，提高了经济效益。附图说明图1为添加了善存成人男女综合矿物质复合维生素片的离体保存培养基上保存6个月的试管苗。图2为添加了善存成人男女综合矿物质复合维生素片的离体保存培养基上保存16个月的试管苗。图3为对照试管苗与采用本专利技术方法获得的保存试管苗分别在增殖培养基上恢复培养后的对照图（左：对照试管苗，右：本专利技术的保存试管苗）。图4为对照试管苗与采用本专利技术方法获得的保存试管苗分别移栽大棚获得的对照株与再生植株的对照图（左：对照株，右：再生植株）。图5引物扩增的ISSR图谱（1、100bpDNA分子量标记；2、“阳光”白掌；3、对照株；4、采用本专利技术方法保存后恢复的“美酒”白掌；5、“维克”白掌）。具体实施方式下面参照附图说明本专利技术的具体实施方式。一种白掌种质资源离体保存的方法，包括以下步骤：1)外植体选择和消毒：以去除叶片后的白掌粗壮吸芽作为外植体，先在自来水下冲洗干净，之后用72～75%酒精对该外植体表面进行消毒45～60秒，再用无菌水冲洗1次，然后用0.1%升汞处理该外植体10～12分钟，再用无菌水冲洗3次，无菌滤纸吸干备用；其中，采用“美酒”白掌粗壮吸芽为外植体；并以采用72%酒精为最佳；2)试管苗繁殖：将步骤1处理后的外植体切割成带节的茎段接种到酸碱度为5.8～6.0的芽诱导培养基中以温度27～29℃、光照强度1200～1500lux、光照时间12小时/天的条件培养30天，之后将萌发的腋芽转接到酸碱度为5.8～6.0的增殖培养基上以温度27～29℃、光照强度1200～1500lux、光照时间12小时/天的条件进行扩繁40天获得丛生苗；本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种白掌种质资源离体保存的方法，其特征在于，包括以下步骤：1) 外植体选择和消毒：以去除叶片后的白掌粗壮吸芽作为外植体，先在自来水下冲洗干净，之后用72～75%酒精对该外植体表面进行消毒45～60秒，再用无菌水冲洗1次，然后用0.1%升汞处理该外植体10～12分钟，再用无菌水冲洗3次，无菌滤纸吸干备用；2) 试管苗繁殖：将步骤1处理后的外植体切割成带节的茎段接种到酸碱度为5.8～6.0的芽诱导培养基中以温度27～29℃、光照强度1200～1500lux、光照时间12小时/天的条件培养30天，之后将萌发的腋芽转接到酸碱度为5.8～6.0的增殖培养基上以温度27～29℃、光照强度1200～1500lux、光照时间12小时/天的条件进行扩繁40天获得丛生苗；其中，芽诱导培养基：4g/L花宝1号+30 g/L蔗糖+0.1～0.3mg/LTDZ+0.05～0.1mg/LNAA +5g/L琼脂粉；增殖培养基：3g/L花宝1号+1～3g/L NH4NO3+0.05～0.15mg/LTDZ+0.05～0.1mg/LNAA+30g/L蔗糖+5g/L琼脂粉；3) 试管苗保存：将步骤2中获得的丛生苗分切成单株并转入酸碱度为6.1～6.5的离体保存培养基中以温度20～25℃、光照强度1000～1200lux、光照时间8小时/天的条件进行保存；其中，离体保存培养基：3g/L花宝1号+1～3g/L NH4NO3 + 0.5～1.0 g/L善存成人男女综合矿物质复合维生素片+30g/L蔗糖+4g/L琼脂粉。...

【技术特征摘要】
1.一种白掌种质资源离体保存的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)外植体选择和消毒：以去除叶片后的白掌粗壮吸芽作为外植体，先在自来水下冲洗干净，之后用72～75%酒精对该外植体表面进行消毒45～60秒，再用无菌水冲洗1次，然后用0.1%升汞处理该外植体10～12分钟，再用无菌水冲洗3次，无菌滤纸吸干备用；2)试管苗繁殖：将步骤1处理后的外植体切割成带节的茎段接种到酸碱度为5.8～6.0的芽诱导培养基中以温度27～29℃、光照强度1200～1500lux、光照时间12小时/天的条件培养30天，之后将萌发的腋芽转接到酸碱度为5.8～6.0的增殖培养基上以温度27～29℃、光照强度1200～1500lux、光照时间12小时/天的条件进行扩繁40天获得丛生苗；其中，芽诱导培养基：4g/L花宝1号+30g/L蔗糖+0.1～0.3mg/LTDZ+0.05～0.1mg/LNAA+5g/L琼脂粉；增殖培养基：3g/L花宝1号+1～3g/LNH4NO3+0.05～0.15mg/LTDZ+0.05～0.1mg/LNAA+30g/L蔗糖+5g/L琼脂粉；3)试管苗保存：将步骤2中获得的丛生苗分切成单株并转入酸碱度为6.1～6.5的离体保存培养基中以温度20～25℃、光照强度1000～1200lux、光照时间8小时/天的条件进行保存；其中，离...

【专利技术属性】
技术研发人员：周辉明，林辉锋，莫智龙，陈昌铭，郭芸玮，夏朝水，林发壮，姚凤琴，陈玮婷，曹奕鸯，
申请(专利权)人：三明市农业科学研究院，
类型：发明
国别省市：福建,35