一种快速鉴定蜂王浆功效的方法技术

本发明专利技术涉及一种快速鉴定蜂王浆功效的方法，属于生物技术领域，具体是一种利用nprl3突变体果蝇快速鉴定蜂王浆功效的生物学方法。利用新鲜蜂王浆对突变体果蝇成活率、体内氧化物水平、能量代谢等具有影响的特性进行快速分析，来检测蜂王浆功效。本发明专利技术可用于快速检测和鉴定蜂王浆的有效成分和生物学功效，评判蜂王浆质量。

【技术实现步骤摘要】
一种快速鉴定蜂王浆功效的方法
本专利技术涉及一种快速鉴定蜂王浆功效的方法，具体是利用突变体果蝇快速鉴定蜂王浆功效的生物学方法，属于生物
技术背景蜂王浆(Royaljelly)是工蜂咽下腺、上颚腺和脑后腺等组织分泌的供蜜蜂幼虫和蜂王食用的浆状物，对人体具有抗疲劳、抗衰老、免疫调节等保健功能。蜂王浆作为营养保健品、药品、化妆品在国内外广泛应用。果蝇由于遗传背景清楚、操作方便、易于培养等特性，是评价蜂产品产品功效的良好模型。蜂王浆中的决定蜜蜂发育为蜂王的关键物质-Royalactin在果蝇体内表现出重要的表型(参考文献1，MasakiKamakura,Royalactininducesqueendifferentiationinhoneybees.Nature,2011.26；473(7348):478-83.)。有研究表明蜂王浆可以增加果蝇体重、延长寿命等功效(参考文献2，SupplementationwithMajorRoyal-JellyProteinsIncreasesLifespan,Feeding,andFecundityinDrosophila.JournalofAgriculturalandFoodChemistry,2016Jul27；64(29):5803-12.)。但是通过检测蜂产品对果蝇寿命的影响操作时间较长、工作量大。
技术实现思路
本专利技术针对上述现有技术的不足，提供一种快速鉴定蜂王浆功效的方法。本专利技术则充分利用突变体果蝇(nprl3)成活率低、抗氧化能力差和能量代谢有障碍的特性；利用新鲜蜂王浆处理突变体果蝇(nprl3)，使其上述缺陷得到明显改善的方法，来快速鉴定蜂王浆的功效。本专利技术的技术方案如下：一种快速鉴定蜂王浆功效的方法，其特征在于，使用突变果蝇评判蜂王浆生物学功效。优选地，使用TORC1通路组成蛋白的突变体评判蜂王浆生物学功效。优选地，使用GATOR1复合体的组成蛋白的突变体评判蜂王浆生物学功效。优选地，使用nprl3突变果蝇进行评判蜂王浆生物学功效。优选地，在nprl3突变果蝇的培养基中添加质量百分比为10-20％的蜂王浆。TOR(targetofrepemycin)通路是进化上十分保守的、广泛存在于各种生物细胞中，调节生长与代谢的关键通路。当营养充足时，TOR通路被激活，促进蛋白、脂肪等物质的合成，从而促进细胞的生长；而当营养缺乏时，TOR通路被抑制，细胞生长减缓并发生自噬反应，维持细胞的存活。TOR的活化是细胞生长和代谢所必需的，但TOR的过分活化会导致代谢加快，引起细胞损伤，促进细胞衰老。而机体衰老可能会导致机体内活性氧(ROS)的堆积。研究表明TOR通路的失调与肿瘤、神经退化疾病、糖尿病等衰老相关疾病密切相关(参考文献3，Laplante,M.andD.M.Sabatini,mTORsignalingingrowthcontrolanddisease.Cell,2012.149(2):p.274-93.)。GATOR1是新发现的受氨基酸水平调节的、抑制TOR活性的蛋白复合体，由Nprl2、Nprl3、Iml1三个蛋白组成(参考文献4，Bar-Peled,L.,etal.,ATumorSuppressorComplexwithGAPActivityfortheRagGTPasesThatSignalAminoAcidSufficiencytomTORC1.Science,2013.340(6136):p.1100-1106)。通过研究发现，nprl3基因突变果蝇体内的TOR活性增加；并且nprl3突变果蝇的成活率降低，只有约25％的果蝇卵能够发育为成虫(参考文献5，Wei,Y.,etal.TheGATOR1ComplexRegulatesMetabolicHomeostasisandtheResponsetoNutrientStressinDrosophilamelanogaster.,G3(Bethesda),2016.12.7,6(12):3859-3867.)本专利技术利用TOR通路的抑制蛋白-nprl3的突变果蝇为对象，基于突变体果蝇成活率低，抗氧化能力差等特点，快速判断蜂王浆的功效。蜂王浆既是蜂王和幼虫的重要营养食料,也是决定蜜蜂级型分化的关键物质。蜂王浆中的活性物质成分及其功效是多年的研究热点。蜂王浆作为保健品在国内外受到了广泛的关注和使用，研究表明其具有很好的保健功能。而在如何快速鉴定蜂王浆功效方面则鲜有报导。传统的利用果蝇检测和鉴定蜂王浆功效的方法用时较长、工作量较大且不易操作。而本专利技术是一种利用nprl3突变体果蝇快速鉴定蜂王浆功效的生物学方法。利用新鲜蜂王浆对突变体果蝇成活率、体内氧化物水平、能量代谢等具有影响的特性进行快速分析，来检测蜂王浆功效。本专利技术可用于快速检测和鉴定蜂王浆的有效成分和生物学功效，评判蜂王浆质量。附图说明图1为突变体果蝇亲本杂交图；图2为在对照组培养基中添加2％、5％、10％、20％、40％的新鲜蜂王浆以及1.5％的酪蛋白作为对照，筛选出蜂王浆发挥效果的最适浓度；图3在最适浓度下蜂王浆对突变体果蝇体内丙二醛(MDA)含量的影响；图4在最适浓度下蜂王浆对突变体果蝇体内过氧化氢酶(CAT)活性的影响；图5在最适浓度下蜂王浆对突变体果蝇体内超氧化物歧化酶(SOD)活性的影响；图6在最适浓度下蜂王浆对突变体果蝇体内甘油三酯(TG)含量的影响。具体实施方式1、实验条件和果蝇饲养(1)实验条件培养于人工气候箱25℃，60％相对湿度、12h光照12h黑暗。(2)果蝇培养基的配制对照组培养基配方为玉米粉50g、琼脂10g、酵母粉24g、白糖30g、丙酸3mL、去离子水1L。实验组培养基的配置：在对照组培养基中添加2％、5％、10％、20％、40％(质量百分比)的新鲜蜂王浆。对照组培养基配置过程：1)将称量好的蔗糖和琼脂一起倒入电磁炉中，加入适量水，加热充分搅拌；2)加热至沸腾；3)将已用水充分溶解好的玉米粉缓慢倒入锅中，持续搅拌；4)持续加热至沸腾；5)待混合物冷却至80℃左右，加入提前用温水溶解好的酵母，充分搅拌；6)加入适量丙酸溶液，充分搅拌；塞上棉花塞，保鲜膜封好放置4℃冰箱保存。实验组培养基制作过程：2％蜂王浆培养基：待对照组培养基冷却至40℃～50℃，取出100ml，向其中加入2g新鲜蜂王浆，充分混匀，分装保存。5％蜂王浆培养基：待对照组培养基冷却至40℃～50℃，取出100ml，向其中加入5g新鲜蜂王浆，充分混匀，分装保存。10％蜂王浆培养基：待对照组培养基冷却至40℃～50℃，取出100ml，向其中加入10g新鲜蜂王浆，充分混匀，分装保存。20％蜂王浆培养基：待对照组培养基冷却至40℃～50℃，取出100ml，向其中加入20g新鲜蜂王浆，充分混匀，分装保存。40％蜂王浆培养基：待对照组培养基冷却至40℃～50℃，取出100ml，向其中加入40g新鲜蜂王浆，充分混匀，分装保存。1.5％酪蛋白培养基：待对照组培养基冷却至40℃～50℃，取出100ml，向其中加入1.5g酪蛋白，充分混匀，分装保存。(3)亲本果蝇挑选将基因型为nprl3-/TM3sb品系果蝇和基因型为Df/TM3GFP品系的两种果蝇利用CO2麻痹后，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速鉴定蜂王浆功效的方法，其特征在于，使用突变果蝇评判蜂王浆生物学功效。

【技术特征摘要】
1.一种快速鉴定蜂王浆功效的方法，其特征在于，使用突变果蝇评判蜂王浆生物学功效。2.根据权利要求1所述的一种快速鉴定蜂王浆功效的方法，其特征在于，使用TORC1通路组成蛋白的突变体评判蜂王浆生物学功效。3.根据权利要求2所述的一种快速鉴定蜂王浆功效的方法，其特征在于，使用GATOR1复合...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡嘉栋，韦有恒，席俊萌，程阳，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32