一种甜瓜杂交组合亲本高效选择的方法技术

本发明专利技术公开了一种甜瓜杂交组合亲本高效选择的方法，包括以下步骤：（1）甜瓜种质资源收集及种质DNA提取；（2）RCR反应；（3）电泳；（4）银染；（5）亲缘关系分析及杂交组合亲本筛选。本发明专利技术从分子层面上对群体进行结构划分、亲缘分析，可以快速准确的鉴定甜瓜杂交组合，选择合适的亲本，从而获得组合了目标性状的杂交后代，为甜瓜的新品种选育奠定了很好的基础，极具市场推广应用价值。

An Efficient Parent Selection Method for Muskmelon Hybrid Combinations

The invention discloses a method for efficient selection of parents of Melon Hybrid combinations, which comprises the following steps: (1) collection of melon germplasm resources and extraction of germplasm DNA; (2) RCR reaction; (3) electrophoresis; (4) silver staining; (5) analysis of genetic relationship and selection of parents of hybrid combinations. The method can quickly and accurately identify the hybrid combination of melon and select suitable parents by dividing the population structure and analyzing its relatives at the molecular level, thus obtaining the hybrid offspring of the combination of target traits, laying a good foundation for the breeding of new varieties of melon, and has great market popularization and application value.

【技术实现步骤摘要】
一种甜瓜杂交组合亲本高效选择的方法
本专利技术属于品种选育
，具体涉及一种甜瓜杂交组合亲本高效选择的方法。
技术介绍
甜瓜属于葫芦科甜瓜属草本植物。甜瓜果实味美甘甜，营养丰富，在我国栽培面积广泛。甜瓜新品种选育时，选择出合适的亲本，是培育出优良品种的基础。目前进行甜瓜杂交种育种时，亲本选配多是育种家依据实践经验，结合育种材料的田间性状观察、配合力测定等结果进行总结应用。这种方法耗工耗时，且时常不能获得组合了目标性状的杂种后代，主要原因就是田间观测结果受栽培环境影响较大，难以准确获得育种材料的表型数据，亲本选择盲目。DNA分子标记是以DNA的多态性为基础的遗传标记，能够稳定遗传，且遗传方式简单。近年来己有一些分子标记技术建立，并迅速广泛的应用于作物遗传育种领域。通过应用RAPD、SSR等DNA分子标记对群体进行扫描，可以进一步在分子层面上对群体进行结构划分、亲缘分析等，且分子标记在群体间的多态性与群体材料的农艺性状、生理生化性状具有直接关系。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有的问题，提供了一种甜瓜杂交组合亲本高效选择的方法。本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种甜瓜杂交组合亲本高效选择的方法，包括以下步骤：（1）甜瓜种质资源收集及种质DNA提取：收集甜瓜种质资源，将各种质进行播种，种子发芽长成植株后，取样进行DNA提取，备用；（2）RCR反应：根据前人研究结果选取RAPD、ISSR、SSR标记引物，从步骤（1）提取的DNA中随机选取1/10~1/5的样本DNA作为模板，以文献报道的RAPD、ISSR、SSR标记引物对样本DNA分别进行PCR扩增；（3）电泳：将步骤（2）中所得的扩增产物进行凝胶电泳；（4）银染：将步骤（3）中电泳结束后的凝胶进行银染，显色，备用；（5）亲缘关系分析及杂交组合亲本筛选：a.根据步骤（4）中显色的PCR电泳条带位置，进行多态性分析，筛选出有效多态性分子标记，备用；b.应用操作a中筛选的有效多态性分子标记，对步骤（1）中的所有种质的DNA分别进行PCR扩增，并按照步骤（3）和步骤（4）的方法进行电泳和银染，再进行多态性分析；c.应用操作b中的多态性分析结果，进行亲缘关系分析；d.依据操作c中的亲缘关系分析结果，针对育种目标，结合各种质材料的农艺特性，依据亲缘关系远近进行杂交亲本选择。进一步的，所述步骤（1）中各种质资源为纯合材料（非杂交种等）。进一步的，所述步骤（3）中RAPD与ISSR分子标记PCR产物在1×TAE缓冲液中用2%琼脂糖凝胶上电泳，SSR标记PCR产物在12%非变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳。进一步的，所述步骤（4）操作d中的亲缘关系分析是基于Jaccards相似系数和UPGMA方法构建树状图来进行分析的。本专利技术相比现有技术具有以下优点：本专利技术从分子层面上对群体进行结构划分、亲缘分析，可以快速准确的鉴定甜瓜杂交组合，选择合适的亲本，从而获得组合了目标性状的杂交后代，为甜瓜的新品种选育奠定了很好的基础，极具市场推广应用价值。附图说明图1：亲缘关系的分析结果。具体实施方式实施例1一种甜瓜杂交组合亲本高效选择的方法，包括以下步骤：（1）甜瓜种质资源收集及种质DNA提取：收集甜瓜种质资源，将各种质进行播种，种子发芽长成植株后，取样进行DNA提取，备用；（2）RCR反应：根据前人研究结果选取RAPD、ISSR、SSR标记引物，从步骤（1）提取的DNA中随机选取1/10~1/5的样本DNA作为模板，以文献报道的RAPD、ISSR、SSR标记引物对样本DNA分别进行PCR扩增；（3）电泳：将步骤（2）中所得的扩增产物进行凝胶电泳；（4）银染：将步骤（3）中电泳结束后的凝胶进行银染，显色，备用；（5）亲缘关系分析及杂交组合亲本筛选：a.根据步骤（4）中显色的PCR电泳条带位置，进行多态性分析，筛选出有效多态性分子标记，备用；b.应用操作a中筛选的有效多态性分子标记，对步骤（1）中的所有种质的DNA分别进行PCR扩增，并按照步骤（3）和步骤（4）的方法进行电泳和银染，再进行多态性分析；c.应用操作b中的多态性分析结果，进行亲缘关系分析；d.依据操作c中的亲缘关系分析结果，针对育种目标，结合各种质材料的农艺特性，依据亲缘关系远近进行杂交亲本选择。进一步的，所述步骤（1）中各种质资源为纯合材料（非杂交种等）。进一步的，所述步骤（3）中RAPD与ISSR分子标记PCR产物在1×TAE缓冲液中用2%琼脂糖凝胶上电泳，SSR标记PCR产物在12%非变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳。进一步的，所述步骤（4）操作d中的亲缘关系分析是基于Jaccards相似系数和UPGMA方法构建树状图来进行分析的。为了进一步对比本专利技术效果，对收集整理的104份甜瓜种质材料作为实验对象，针对果实羊角形，果肉绿色，生育期80天，抗霜霉病、白粉病，耐低温弱光，耐湿的育种目标，依据各种质材料特性，按照实施例1的方法筛选杂交亲本。一、方法：（1）DNA提取：收集整理的104分甜瓜种质材料进行播种，并取样进行DNA提取，备用；（2）RCR反应：根据前人研究结果选取RAPD、ISSR、SSR标记引物，从步骤（1）提取的104份DNA中随机选取21份进行PCR扩增，得扩增产物备用；（3）电泳：将步骤（2）中所得的扩增产物进行凝胶电泳，RAPD与ISSR分子标记PCR产物在1×TAE缓冲液中用2%琼脂糖凝胶上电泳，SSR标记PCR产物在12%非变性聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳；（4）银染：将步骤（3）中电泳结束后的凝胶进行银染，显色，备用；（5）杂交组合亲本鉴定：a.根据步骤（4）中显色的PCR电泳条带位置，进行多态性分析，筛选出有效多态性分子标记，备用；b.应用操作a中筛选的有效态性分子标记，104份甜瓜种质材料DNA进行PCR扩增，并按照步骤（3）和步骤（4）的方法进行电泳和银染，再进行多态性分析；c.应用操作b中的多态性分析结果，进行亲缘关系分析，基于Jaccards相似系数和UPGMA方法构建树状图；d.依据操作c中的亲缘关系分析结果，针对果实羊角形，果肉绿色，生育期80天，抗霜霉病、白粉病，耐低温弱光，耐湿的育种目标，结合各种质材料的农艺特性进行杂交亲本筛选即可。二、实验结果1、多态性分析结果筛选出33个标记为有效多态性分子标记，33个标记分别为RAPD01、RAPD02、RAPD08等。2、亲缘关系分析结果基于Jaccards相似系数和UPGMA方法构建树状图（图1），104份酥瓜种质被分为主要五个类群。第I组和第II组仅包含一份品种，分别为H14和H29，此两份为厚皮甜瓜，聚类分析结果表明酥瓜与厚皮甜瓜被分为明显的不同类群；第III组由五份品种(H11，H13，S8，S13，S39)组成；第V组包含F1-7和F2013，H39和S48等11份品种；剩下的86份组成了第IV组，代表了来自江淮地区的广泛类群。第IV组进一步可划分为9个亚群。3、亲本筛选结果针对果实羊角形，果肉绿色，生育期80天，抗霜霉病、白粉病，耐低温弱光，耐湿的育种目标，依据各种质材料特性，初步筛选出6个材料可作为母本，4份材料可作为父本。在此基础上，查询聚类分析图，选择亲缘关系相对较远的组合方式，剔除两个亲本在同一个亚群的组合，最终母本选取S本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种甜瓜杂交组合亲本高效选择的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）甜瓜种质资源收集及种质DNA提取：收集甜瓜种质资源，将各种质进行播种，种子发芽长成植株后，取样进行DNA提取，备用；（2）RCR反应：根据前人研究结果选取RAPD、ISSR、SSR标记引物，从步骤（1）提取的DNA中随机选取1/10~1/5的样本DNA作为模板，以文献报道的RAPD、ISSR、SSR标记引物对样本DNA分别进行PCR扩增；（3）电泳：将步骤（2）中所得的扩增产物进行凝胶电泳；（4）银染：将步骤（3）中电泳结束后的凝胶进行银染，显色，备用；（5）亲缘关系分析及杂交组合亲本筛选：a. 根据步骤（4）中显色的PCR电泳条带位置，进行多态性分析，筛选出有效多态性分子标记，备用；b. 应用操作a中筛选的有效多态性分子标记，对步骤（1）中的所有种质的DNA分别进行PCR扩增，并按照步骤（3）和步骤（4）的方法进行电泳和银染，再进行多态性分析；c. 应用操作b中的多态性分析结果，进行亲缘关系分析；d. 依据操作c中的亲缘关系分析结果，针对育种目标，结合各种质材料的农艺特性，依据亲缘关系远近进行杂交亲本选择。

【技术特征摘要】
1.一种甜瓜杂交组合亲本高效选择的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）甜瓜种质资源收集及种质DNA提取：收集甜瓜种质资源，将各种质进行播种，种子发芽长成植株后，取样进行DNA提取，备用；（2）RCR反应：根据前人研究结果选取RAPD、ISSR、SSR标记引物，从步骤（1）提取的DNA中随机选取1/10~1/5的样本DNA作为模板，以文献报道的RAPD、ISSR、SSR标记引物对样本DNA分别进行PCR扩增；（3）电泳：将步骤（2）中所得的扩增产物进行凝胶电泳；（4）银染：将步骤（3）中电泳结束后的凝胶进行银染，显色，备用；（5）亲缘关系分析及杂交组合亲本筛选：a.根据步骤（4）中显色的PCR电泳条带位置，进行多态性分析，筛选出有效多态性分子标记，备用；b.应用操作a中筛选的有效多态性分子标记，对步骤（1）中的所有种质的DNA分别进行PCR扩增...

【专利技术属性】
技术研发人员：汪承刚，侯金锋，朱世东，袁凌云，陈国户，苏亚，王安源，李仁杰，
申请(专利权)人：安徽农业大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34