The invention discloses an in vitro fertilization method of Penaeus vannamei, which comprises the following steps: ripening, sperm acquisition, sperm capacitation, sperm-egg binding and sperm survival rate detection steps of Penaeus vannamei parent shrimp, first ripening the shrimp, then obtaining sperm by netting or pressing method, and then culturing the sperm in the possible liquid to obtain possible sperm. Then the capacitated sperm was mixed with the egg and stimulated by electric shock at the same time. Finally, the embryos of Penaeus vannamei were cultured in water bath. According to the sperm characteristics of Litopenaeus vannamei, appropriate capacitation solution was selected to cultivate the sperm of Litopenaeus vannamei so as to improve the fertilization ability of the sperm. At the same time, the sperm-egg mixture was stimulated by electric shock during the fertilization process to promote the sperm-egg combination of Litopenaeus vannamei and enhance the effect of artificial insemination.
【技术实现步骤摘要】
一种凡纳滨对虾的体外授精方法
本专利技术属于水产养殖繁育
，具体涉及一种凡纳滨对虾的体外授精方法。
技术介绍
凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)，又称南美白对虾，别名白脚虾、凡纳对虾，原产地中南美太平洋海岸水域，适合在热带、亚热带、暖温带、温带海域养殖。凡纳滨对虾是当前世界上养殖产量最高的三大优良品种之一，它具有对水环境抗逆能力强、营养要求低、生长速度快、虾体含肉量高、离水存活时间长和抗病能力强等特点。由于凡纳滨对虾养殖经济效益显著，现已成为世界上养殖规模最大产量最高的对虾品种。在凡纳滨对虾的苗种繁育过程中，主要采用精荚移植和体外精卵结合授精的人工授精方式，由于凡纳滨对虾属开放性纳精囊类型，采用精荚移植方式将雄虾的精荚粘附在雌虾的纳精囊位置上时极易发生脱落，不仅操作技术难度大，而且平均授精率低导致人工授精效果不佳，从而影响后续幼体孵化和苗种繁育，所以体外精卵结合授精的人工授精更适合凡纳滨对虾的苗种繁育。随着人工授精和体外受精技术的发展，凡纳滨对虾的精子品质成为影响其苗种繁育效率的重要因素，通过采用合适的精子获能方法，延长精子成活时间，提高精...
【技术保护点】
1.一种凡纳滨对虾的体外授精方法，其特征在于：其包括以下步骤：凡纳滨对虾亲虾的催熟：将凡纳滨对虾亲虾按13尾/m
【技术特征摘要】
1.一种凡纳滨对虾的体外授精方法，其特征在于：其包括以下步骤：凡纳滨对虾亲虾的催熟：将凡纳滨对虾亲虾按13尾/m2的培育密度进行培育，水位60cm，水温从22℃按照1℃/min的升温速度逐步升至27～28℃，培育开始时用常规的亲虾熟料投喂3天，然后将新鲜鱿鱼、牡蛎和青虫中的任意一种或几种混合作为生物饵料投喂凡纳滨对虾亲虾；每天进行亲虾池吸污，并且排水至水位降低5cm后，再补水至原水位高度；加入1ppm益生菌调控水质，泼洒0.5～1ppm优乐碘消毒杀菌，泼洒0.5ppm营养钙和1ppm氨基葡萄糖酸钙；强化培育20天待亲虾完成第一次蜕壳后进行母虾右侧眼柄切除手术，术后5天开始进行精子收集操作；精子的获取：采用网挫法或压片法进行精子的获取；所述的网挫法是将凡纳滨对虾的精荚剪成小段放在150目的网布中，逐滴加入海水，同时隔着网布轻轻揉搓精荚，从而获得精子悬液；所述的压片法是将凡纳滨对虾的精子团从精荚中挤出，然后用两个载玻片夹住精子团，使精子涂布在载玻片上，然后用海水冲洗载玻片，收集洗液在转速为500r/min的条件下离心10min，收集上清液，再在转速为2000r/min的条件下离心5min，除去上清液即可获得精子；精子获能：将步骤（2）中获得的精子悬液或精子与等体积的获能液混合，然后在30℃下水浴培养3h即可得到含有获能精子的混合液A；精卵共浴：选取凡纳滨对虾未受精刚排出的卵与步骤（3）中得到的混合液A混合，然后用基因导入仪进行瞬间电击刺激，并且在30℃下水浴中培养30min后即可获得凡纳滨对虾的胚胎；精子成活率检测：取0.25g伊红溶于50ml海水当中，然后加入1ml浓盐酸，静置12小时，然后过滤，将过滤物放置烤箱内烤干得到干燥物，然后将干燥物溶于100ml质量浓度为95%的乙醇中得到伊红原液备用；取伊红原液加入1～2倍体积的质量浓度为95%的乙醇得到伊红染液，取步骤（3）中的混合液A，按混合液A:伊红染液为（1～5）:1的体积比将混合液A和伊红染液混合，然后立即涂片晾干观察。2.据权利要求1所述的凡纳滨对虾的体外授精方法，其特征在于：所述的获能液是BO液、BWW液、mTBM液和Hank’s液中的任意一种；所述的BO液是先将6...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈秀荔，赵永贞，李强勇，刘青云，杨春玲，彭敏，曾地刚，朱威霖，陈晓汉，林勇，杨琼，王卉，李旻，廖振平，陈谊，
申请(专利权)人：广西壮族自治区水产科学研究院，
类型：发明
国别省市：广西,45
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。