D-半乳糖诱导的断奶仔猪慢性氧化应激模型的构建方法技术

本发明专利技术涉及D‑半乳糖诱导的断奶仔猪慢性氧化应激模型的建立方法，采用D‑半乳糖体外诱导处理断奶仔猪，D‑半乳糖饲喂量为5‑20g/kg 体重（BW）。与现有技术相比，本发明专利技术首次采用D‑半乳糖作为应激源诱导断奶仔猪慢性氧化应激模型，通过考察断奶仔猪血清过氧化产物（MDA）水平以及抗氧化酶（GSH‑Px、CAT和SOD）的活性确定了D‑半乳糖诱导断奶仔猪慢性氧化应激的最佳饲喂量和时间，操作简单、操作过程对动物应激较小，可帮助进行断奶仔猪慢性氧化应激的研究人员比较顺利地完成氧化应激模型的构建。

Construction of chronic oxidative stress model induced by D-galactose in Weaned Piglets

The invention relates to a method for establishing a chronic oxidative stress model of weaned piglets induced by D galactose. The weaned piglets were treated with D galactose in vitro. The D galactose feeding amount was 5 20 g/kg body weight (BW). Compared with the existing technology, the present invention uses D galactose as a stress source to induce chronic oxidative stress in weaned piglets for the first time. The optimal feeding amount and time of D galactose-induced chronic oxidative stress in weaned piglets are determined by investigating the levels of serum peroxide products (MDA) and the activities of antioxidant enzymes (GSH Px, CAT and SOD). Animal stress is relatively small, which can help researchers who have weaned piglets with chronic oxidative stress successfully complete the construction of oxidative stress model.

【技术实现步骤摘要】
D-半乳糖诱导的断奶仔猪慢性氧化应激模型的构建方法
本专利技术属于动物慢性氧化应激模型
，尤其涉及D-半乳糖诱导的断奶仔猪慢性氧化应激模型的构建方法。
技术介绍
过多的氧自由基破坏机体氧化和抗氧化防御系统之间的动态平衡，使机体产生氧化应激。畜禽养殖过程中的一些问题，例如转群、运输、气味、温度和噪音等均可引起机体氧化应激；同时，相比急性氧化应激，慢性氧化应激的刺激强度相对减弱、刺激时间延长和频率增加，因此，慢性氧化应激更加常见和多发。目前常见的用于构建仔猪慢性氧化应激模型的主要方法有饲喂氧化油脂和注射敌草快。但是，氧化油脂的制作和使用过程条件难控制，同时产物种类复杂、含量差异大，研究结果差异较大。其次，注射敌草快会使仔猪出现厌食或腹泻较为严重的应激，影响后续的试验结果。D-半乳糖主要通过三条途径引起氧化应激：过量D-半乳糖在半乳糖还原酶的作用下被还原成无法被细胞进一步代谢的半乳糖醇，过量的半乳糖醇在细胞内堆积，影响细胞的渗透压，使细胞肿胀，进一步引起细胞代谢紊乱，从而引起氧化应激；过量D-半乳糖在半乳糖氧化酶的作用下被氧化生成过氧化氢，过多的过氧化氢可以消耗细胞内的抗氧化酶，如超氧化物歧化酶，进而引起氧化应激；过量D-半乳糖可以引起非酶促糖基化反应，产生晚期糖基化终产物，晚期糖基化终产物与其受体结合，进一步产生活性氧自由基，使机体处于氧化应激的状态。因此，利用D-半乳糖是建立稳定的断奶仔猪慢性氧化应激模型的适宜应激源。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种稳定的和易于操作的D-半乳糖诱导的断奶仔猪慢性氧化应激模型的建立方法。为解决上述技术问题,本专利技术采用的技术方案为：D-半乳糖诱导的断奶仔猪慢性氧化应激模型的建立方法，采用D-半乳糖饲喂断奶仔猪，D-半乳糖的饲喂量为5-20g/kgBW。所述D-半乳糖诱导的断奶仔猪慢性氧化应激模型的建立方法，分别设断奶仔猪对照组、5g/kgBWD-半乳糖组、10g/kgBWD-半乳糖组和20g/kgBWD-半乳糖组。对照组断奶仔猪饲喂基础日粮，实验组断奶仔猪分别在基础日粮的基础上饲喂含量不同的D-半乳糖，自由采食和饮水，记录每日采食量，于处理期第0、7、14和21天分别称重，并采集断奶仔猪前腔静脉血，3000r/min，4℃离心10min，收集血清，测定血清过氧化产物水平和抗氧化酶活性；处理第21天，采集血液后，将断奶仔猪处死并立即打开腹腔，分离心脏、肝脏、脾脏和肾脏，称重并计算各器官指数。所述断奶仔猪为21日龄断奶仔猪。所述D-半乳糖饲喂量由每周仔猪的体重进行调整，即D-半乳糖的饲喂量由处理期第0、7和14天的体重确定；试验组和对照组断奶仔猪自由采食，保证试验组每头仔猪每天能采食到相应量的D-半乳糖。所述血清中过氧化产物为丙二醛（MDA）；所述血清中抗氧化酶包括过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）。有益效果：本专利技术公开了一种D-半乳糖诱导的断奶仔猪慢性氧化应激模型的建立方法，采用D半乳糖饲喂断奶仔猪，D-半乳糖的饲料喂为5-20g/kgBW。与现有技术相比，本专利技术首次使用D-半乳糖作为诱导断奶仔猪慢性氧化应激模型的应激源，通过考察断奶仔猪血清中过氧化产物MDA的水平以及抗氧化酶（CAT、SOD和GSH-Px）的活性确定了D-半乳糖的最佳饲喂含量和饲喂时间，操作简单、结果稳定，操作过程对动物应激小，可帮助初次进行断奶仔猪慢性氧化应激的研究人员比较顺利地完成氧化应激模型的构建。附图说明图1是不同浓度D-半乳糖处理对断奶仔猪生长性能的影响；图2是不同浓度D-半乳糖处理对断奶仔猪血清中过氧化产物MDA水平以及抗氧化酶（CAT、SOD和GSH-Px）的活性的影响。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。一、试验方法1实验动物与分组设计选取32头健康状况良好、胎次相近的21日龄断奶仔猪，初始体重为5.44±0.26kg。按照体重相近原则随机分成4个组，每组8个重复，每个重复1头猪。分别饲喂基础日粮、基础日粮+5g/kgBWD-半乳糖、基础日粮+10g/kgBWD-半乳糖和基础日粮+20g/kgBWD-半乳糖。试验组和对照组断奶仔猪自由采食，保证试验组每头仔猪每天能采食到相应量的D-半乳糖。记录每日采食量，分别在饲喂期第0、7、14和21天称重计算调整一次D-半乳糖饲喂量并采集前腔静脉血，3000r/min，4℃，离心10min，收集血清。处理第21天时，采集血液后，将断奶仔猪处死并立即打开腹腔。2试验日粮基础日粮为玉米-豆粕型日粮，在基础日粮中分别添加5、10和20g/kgBWD-半乳糖为试验组日粮。根据NRC（2012）标准进行配制。基础日粮组成成分及营养水平见表1。表1基础日粮组成成分及营养水平项目含量日粮组成（%）玉米55.59豆油0.72葡萄糖1.00甘蔗糖蜜2.00膨化大豆8.00豆粕21.50鱼粉4.00乳清粉3.20氯化钠0.40石粉0.55碳酸氢钙0.87氧化锌0.30L-赖氨酸盐酸盐0.40蛋氨酸0.20L-苏氨酸0.14L-色氨酸0.03氯化胆碱0.10预混料*1.00营养水平消化能（MJ/kg）14.06粗蛋白（%）19.74钙（%）0.73总磷（%）0.59赖氨酸（%）1.39蛋氨酸（%）0.53苏氨酸（%）0.88色氨酸（%）0.24*预混料为每kg饲料提供：Sepiolite,6.043g;pigvitamin,750mg;Fe,150mg;Cu,150mg;Mn,80mg;Zn,120mg;Se,0.3mg;Co,1mg;I,0.3mg;VB41000mg。3不同浓度D-半乳糖处理对断奶仔猪生长性能的影响分离心脏、肝脏、脾脏和肾脏，称重并计算各器官指数，计算公式：器官指数（g/kg）=器官湿重(g)/猪活体重(kg)。4不同浓度D-半乳糖处理对断奶仔猪血清中MDA水平以及GSH-Px、CAT和SOD活性的影响梯度解冻样本，检测血清中MDA水平以及GSH-Px、CAT和SOD的活性，按南京建成生物公司研究所试剂盒操作手册操作。5实验数据采用SPSS22.0统计软件进行单因素方差分析（One-WayANOVA），Duncan组间比较，结果以“平均数±标准误”表示。肩标不同小写字母表示差异显著（P<0.05）。二、实验结果1不同浓度D-半乳糖处理对断奶仔猪生长性能的影响结果如附图1所示，10和20g/kgBWD-半乳糖饲喂断奶仔猪1周、2周和3周均显著降低断奶仔猪体重和采食量（P<0.05）。同时，5、10和20g/kgBWD-半乳糖饲喂断奶仔猪3周显著降低断奶仔猪心脏指数（P<0.05）。2不同浓度D-半乳糖处理对断奶仔猪血清中过氧化产物MDA水平以及抗氧化酶（CAT、SOD和GSH-Px）的活性的影响结果如附图2所示，10g/kgD-半乳糖饲喂断奶仔猪2周显著升高断奶仔猪血清中MDA水平（P<0.05）。5g/kgD-半乳糖处理1周显著升高断奶仔猪血清中GSH-Px的活性，10和20g/kgD-半乳糖处理1周显著降低断奶仔猪血清中GSH-Px的活性，10g/kgD-半乳糖处理2和3周显著升高断奶仔猪血清中GS本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.D‑半乳糖诱导的断奶仔猪慢性氧化应激模型的建立方法，其特征在于：使用D‑半乳糖饲喂断奶仔猪，D‑半乳糖饲喂量为5‑20g/kg BW。

【技术特征摘要】
1.D-半乳糖诱导的断奶仔猪慢性氧化应激模型的建立方法，其特征在于：使用D-半乳糖饲喂断奶仔猪，D-半乳糖饲喂量为5-20g/kgBW。2.根据权利要求1所述D-半乳糖诱导的断奶仔猪慢性氧化应激模型的建立方法，其特征在于：使用D-半乳糖饲喂断奶仔猪，D-半乳糖饲喂量为10g/kgBW。3.根据权利要求1或2所述的D-半乳糖诱导的断奶仔猪慢性氧化应激模型的构建方法，其特征在于：分别设断奶仔猪为对照组、5g/kgBWD-半乳糖组、10g/kgBWD-半乳糖组和20g/kgBWD-半乳糖组；对照组断奶仔猪饲喂基础日粮，5g/kgBWD-半乳糖组断奶仔猪饲喂基础日粮+5g/kgBWD-半乳糖，10g/kgBWD-半乳糖组断奶仔猪饲喂基础日粮+10g/kgBWD-半乳糖，20g/kgBWD-半乳糖组断奶仔猪饲喂基础日粮+20g/kgBWD-半乳糖；记录每日采食量，于处理第0、7、14和2...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩慧，尹杰，李铁军，段叶辉，刘泽民，印遇龙，
申请(专利权)人：中国科学院亚热带农业生态研究所，
类型：发明
国别省市：湖南,43