本发明专利技术提供了一种用于治疗非酒精性脂肪肝炎及肝纤维化的脂联素受体‑1及受体‑2的双激动剂肽及包含其的药物组合物，该双激动剂肽包含氨基酸序列：P‑X2‑L‑Y‑X5‑F‑X7；其中X2、X5及X7中至少一个为非天然氨基酸，P为脯氨酸，L为亮氨酸，Y为酪氨酸。本明的脂联素受体‑1及脂联素受体‑2的双激动剂肽能够有效治疗非酒精性脂肪肝炎及肝纤维化，同时具有良好的生物学活性、良好的稳定性、易于放大生产、成本低、低毒性，安全窗口大、用量小等优点。
Biagonist Peptide of Adiponectin Receptor-1 and Receptor-2 for the Treatment of Nonalcoholic Fatty Hepatitis and Hepatic Fibrosis
The present invention provides a double agonist peptide of adiponectin receptor 1 and receptor 2 for the treatment of nonalcoholic steatohepatitis and liver fibrosis and a pharmaceutical composition thereof. The double agonist peptide contains amino acid sequence P X2 L Y X5 F X7, in which at least one non-natural amino acid is X2, X5 and X7, P is proline, L is leucine and Y is tyrosine. The double agonist peptide of adiponectin receptor 1 and adiponectin receptor 2 of Benming can effectively treat non-alcoholic steatohepatitis and liver fibrosis, and has the advantages of good biological activity, good stability, easy amplification, low cost, low toxicity, large safety window and small dosage.
【技术实现步骤摘要】
用于治疗非酒精性脂肪肝炎及肝纤维化的脂联素受体-1及受体-2的双激动剂肽
本专利技术涉及生物化学
，尤其涉及一类脂联素受体-1及脂联素受体-2的双激动剂肽；本专利技术还涉及上述双激动剂肽在非酒精性脂肪肝炎及肝纤维化等相关疾病的预防和/或治疗中的用途。
技术介绍
非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是一种与胰岛素抵抗和遗传易感密切相关的代谢应激性肝损伤，疾病谱包括非酒精性单纯性肝脂肪变性、非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化、肝硬化和肝细胞癌。NAFLD不仅可以导致肝病、残疾和死亡，还与代谢综合征、2型糖尿病、动脉硬化性心血管疾病及结直肠肿瘤等的高发密切相关。脂联素作为脂肪细胞补体相关蛋白，由244个氨基酸组成，分为球状域、胶原域、可变域和氨基末端信号序列4个区域。球状域为生物活性的关键部位。脂联素受体-1在全身组织中均有表达，脂联素受体-2特异表达于肝脏中。脂联素通过与脂联素受体结合，对机体的糖脂代谢、胰岛素抵抗、炎症反应、氧化应激等发挥重要的调节作用，此外，脂联素还与动脉粥样硬化、糖尿病、肝肾疾病等代谢性疾病关系密切。脂联素与脂联素受体-1结合，通过激活AMPK通路(AMPK是腺苷酸激活蛋白激酶的简称)，增加葡萄糖的摄取，促进脂肪的β氧化。脂联素与脂联素受体-2结合，通过激活PPARα增加机体对脂肪酸和能量的消耗。具体的机制包括：增加乙酰辅酶A羧化酶的磷酸化、增加脂肪酸消耗、增加葡萄糖摄取率、增加肌细胞产生乳酸。脂联素受体-1和脂联素受体-2激动剂通过与脂联素受体结合起作用，显示出有效的减轻体重的功能。脂联素(及其受体)信号通路涉及脂肪酸的氧化过程，提升糖的摄取水平，缓解胰岛素抵抗，调节血管内皮细胞炎症应答，阻遏巨噬细胞转化为泡沫细胞等，临床上其和肥胖、代谢综合征、2型糖尿病及心脑血管疾患紧密相关。脂联素相关信号通路间相互串话的网络研究是靶点药物研究的关键。然而在报道中用于治疗非酒精性脂肪肝炎和肝纤维化的药物中，并没有针对脂联素受体-1和脂联素受体-2为靶点的多肽药物开发。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种脂联素受体-1及脂联素受体-2的双激动剂肽，能够显著治疗非酒精性脂肪肝炎和肝纤维化等疾病。为实现上述目的，本专利技术提供了以下技术方案：一种脂联素受体-1及脂联素受体-2的双激动剂肽，其包含氨基酸序列：P-X2-L-Y-X5-F-X7；其中X2、X5及X7中至少一个为非天然氨基酸，P为脯氨酸，L为亮氨酸，Y为酪氨酸。氨基酸中20种天然氨基酸以外的氨基酸统称为非天然氨基酸，非天然氨基酸相比天然氨基酸具有性质稳定、半衰期长的优点。在现有蛋白或肽的基础上引入非天然氨基酸，能够得到位点特异性修饰的重组蛋白或肽。P-X2-L-Y-X5-F-X7是以现有多肽Pep70(结构序列：PGLYYFD)为基础的合成肽，多肽Pep70能够通过结合脂联素受体-1，激活下游的AMPK信号通路，发挥调节糖脂代谢的作用。优选的，X2为非天然氨基酸。优选的，X2是正缬氨酸。优选的，X5为酪氨酸或丝氨酸。优选的，X7为丙氨酸或天冬氨酸。优选的，氨基酸序列中的脯氨酸由氢或乙酰基修饰。优选的，氨基酸序列中的脯氨酸由氢修饰，X2是正缬氨酸，X5为酪氨酸，X7为丙氨酸。优选的，氨基酸序列中的脯氨酸由氢修饰，X2是正缬氨酸，X5为酪氨酸，X7为天冬氨酸。优选的，氨基酸序列中的脯氨酸由氢修饰，X2是正缬氨酸，X5为丝氨酸，X7为天冬氨酸。优选的，氨基酸序列中的脯氨酸由乙酰基修饰，X2是正缬氨酸，X5为丝氨酸，X7为丙氨酸。本专利技术还提供了脂联素受体-1及脂联素受体-2的双激动剂肽在治疗非酒精性脂肪肝炎及其适应症、肝纤维化及其适应症及靶向为脂联素受体-1和脂联素受体-2的适应症中的应用。本专利技术还提供了一种药物组合物，含有本专利技术所述双激动剂肽以及与所述双激动剂肽关联的异源物质。优选的，所述异源物质为蛋白质、肽、蛋白质结构域、接头、有机聚合物、无机聚合物、聚乙二醇、生物素、白蛋白、人血清白蛋白、人血清白蛋白重组蛋白结合部分、抗体、抗体结构域、抗体片段、单链抗体、结构域抗体、白蛋白结合结构域、酶、配体、受体、结合肽、非FnIII支架、表位标签、重组多肽聚合物、细胞因子中的一种或多种的组合。异源物质的物质比较多，可以从其特性进行分类描述：第一，异源物质为机聚合物，无机聚合物，聚乙二醇或接头时，双激动剂肽的氨基酸被上述异源物质标记，可以通过修饰该异源物质达到修饰双激动剂肽的目的，增加其稳定性、水溶性等药理学活性；第二，异源物质为抗体或抗体相关片段时，能提高双激动剂肽的靶向性，增加其激活受体的作用。第三，异源物质为细胞因子时，能拓展该双激动剂肽的应用范围，即能发挥除了激动脂联素受体1和脂联素受体2的作用以外的效应。本明的脂联素受体-1及脂联素受体-2的双激动剂肽能够有效治疗非酒精性脂肪肝炎及肝纤维化，同时具有良好的生物学活性、良好的稳定性、易于放大生产、成本低、低毒性，安全窗口大、用量小等优点。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为实施例2中各组的细胞活性百分比；图2为实施例3中各组的油红O染色照片；图3为图2的染色照片对应的染色百分比；图4为实施例3中各组对应的人肝星状细胞LX-2中提取的α-SMA和GAPDH的WesternBlot电泳照片；图5为与图4对应的各组的α-SMA/GAPDH相对表达量；图6为实施例5中给药3周后各组小鼠的体重情况；图7为实施例5中给药3周后各组小鼠的肝脏谷丙转氨酶水平；图8为实施例5中给药3周后各组小鼠的HE染色结果；图9为图8的染色面积比例；图10为实施例5中给药2周后各组小鼠的糖耐受量；图11为图10的各曲线下面积；图12为实施例5中给药3周后各组小鼠的胰岛素耐受量；图13为图12的各曲线下面积；图14为实施例5中给药3周后各组小鼠的糖原染色结果；图15为图14的染色面积比例；图16为实施例5中给药3周后各组小鼠的肝细胞内脂滴的油红O染色结果；图17为图16的染色面积比例；图18为实施例6中给药3周之后各组小鼠的HE染色结果；图19为图18的染色面积比例；图20为实施例6中给药3周之后各组小鼠的天狼星红染色结果；图21为图20的染色面积比例；图22为实施例6中给药3周后各组小鼠的α-SMA蛋白免疫组织化学染色结果；图23为对图22的染色面积比例；图24为实施例6中给药3周之后Col1α1蛋白免疫组织化学染色结果；图25为图24的染色面积比例；图26为实施例6中药3周之后各组小鼠的CD68免疫组化染色结果；图27为图26的染色面积比例；图28为实施例5中给药3周后各组小鼠体内PPARa、pAMPK、AMPK、GAPDH等蛋白的表达情况；图29为图28中各组PPARa/GAPDH和pAMPK/AMPK相对表达量。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种脂联素受体‑1及脂联素受体‑2的双激动剂肽，其特征在于，包含氨基酸序列：P‑X2‑L‑Y‑X5‑F‑X7；其中X2、X5及X7中至少一个为非天然氨基酸，P为脯氨酸，L为亮氨酸，Y为酪氨酸。
【技术特征摘要】
1.一种脂联素受体-1及脂联素受体-2的双激动剂肽，其特征在于，包含氨基酸序列：P-X2-L-Y-X5-F-X7；其中X2、X5及X7中至少一个为非天然氨基酸，P为脯氨酸，L为亮氨酸，Y为酪氨酸。2.根据权利要求1所述的双激动剂肽，其特征在于，X2为非天然氨基酸。3.根据权利要求2所述的双激动剂肽，其特征在于，X2是正缬氨酸。4.根据权利要求1所述的双激动剂肽，其特征在于，X5为酪氨酸或丝氨酸，或者，X7为丙氨酸或天冬氨酸。5.根据权利要求1所述的双激动剂肽，其特征在于，氨基酸序列中的脯氨酸由氢或乙酰基修饰。6.根据权利要求1所述的双激动剂肽，其特征在于，氨基酸序列中的脯氨酸由氢修饰，X2是正缬氨酸，X5为酪氨酸，X7为丙氨酸；或者，氨基酸序列中的脯氨酸由氢修饰，X2是正缬氨酸，X5为酪氨酸，X7为天冬氨酸；或者，氨基酸序列中的脯氨酸由氢修饰，X2是正缬氨...
【专利技术属性】
技术研发人员：蒋先兴，徐弘娇，赵倩，洪思华，宋娜资，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东,44
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