一种欧月组织培养的繁殖方法技术

本发明专利技术公开了一种欧月组织培养方法，涉及欧月通过植物组织培养技术短时间内快速获得大量欧月品种的方法。本发明专利技术以欧月带芽茎段为外植体，经过芽诱导、芽增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等过程实现了欧月的离体再生，为其大量选育、快速繁殖、新品种推广提供技术支持。

A Reproductive Method for Tissue Culture of Euclidean Month

The invention discloses a European month tissue culture method, which relates to a method for quickly obtaining a large number of European month varieties in a short time by means of plant tissue culture technology. The method takes the stem segment with buds of Europa as explant, realizes in vitro regeneration of Europa through bud induction, bud multiplication culture, rooting culture, seedling refining and transplanting, and provides technical support for its large-scale breeding, rapid propagation and promotion of new varieties.

【技术实现步骤摘要】
一种欧月组织培养的繁殖方法
本专利技术属于植物栽培方法
，特别涉及一种欧月的组织培养繁殖方法。
技术介绍
月季属我国十大名花之一，属于蔷薇科的常绿或半常绿灌木。月季具有花色花型丰富、花期长、适应性强等优点，因此在园林绿化中应用十分广泛。近几年，由于育种技术的提高和转基因技术的广泛应用，月季的新品种不断涌现，而欧月以其极高的观赏价值具有很好的市场前景。这些新品种从花色丰富多彩，多种单复色、渐变条纹斑点色，丰富多彩。从株型有大小藤本、大小灌木、微型等区分，婀娜多姿。这些品种无论是家庭阳台庭院小品，还是园林景观种植，都可以给人以美轮美奂的视觉效果，如养护得当，可四季月月开花。欧月不是一个专门的词类，一般泛指2000年之后从欧美日本等地引进的新品种月季，但也有例如伊芙伯爵之类的上个世界八十年代从欧洲引进的月季品种也称欧月，但总体上指2000年之后引进的国外新品种月季。欧月可以通过种子、扦插和组培技术进行繁殖，常采用扦插繁殖，但扦插繁殖成本高，成活率较低，周期长，难以大批量生产，而组培技术的繁殖效率高，周期性短，遗传形状稳定，便于管理。因此很有必要建立欧月组织培养技术，为其大规模工厂化生产奠定基础。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供出一种欧月组织培养方法，本专利技术以欧月带芽茎段为外植体，经过芽诱导、芽增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等过程实现了欧月的离体再生，从而实现了本专利技术的目的。本专利技术的一种欧月组织培养方法，包括以下的步骤：(1)芽诱导培养：以欧月经典品种--真宙半木质化茎段作为外植体，剪去叶片，切成2～3cm长的带有2～3个腋芽的茎段，先用洗衣粉溶液浸泡5～8min，再用软毛刷轻轻刷洗外植体表将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗1～2h后置于超净工作台中，先用75％乙醇消毒30～60s后用无菌水洗3～5次，再用0.1％升汞溶液消毒8～10min，用无菌水冲洗4～6次再用无菌滤纸吸干表面的水后接种到芽诱导培养基进行芽诱导，接种后先在25～28℃条件下全暗培养5～7天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为1500～2500lx条件下培养30天，统计其芽诱导率及生长情况。(2)增殖培养：将步骤(1)培养得到的生长健壮的带芽茎段剪切后转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养5～7天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为1500～2500lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养30天后观察生长情况和芽增殖情况，多次反复切割芽体进行继代培养，以得到更多的丛生芽。(3)生根培养：将步骤(1)或(2)过程获得的高度约为2.5～4.0cm、生长良好的不定芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照11～12小时，光照强度为2000～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养1个月后统计生根情况。(4)炼苗移栽：将步骤(3)获得的高约4～6cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗5～7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土∶珍珠岩和蛭石＝3∶2∶1混合成的基质穴盘，置于光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田。上述步骤(1)所述的芽诱导培养基为：MS+6-BA1.0～2.0mg/L+NAA0.15～0.3mg/L+蔗糖25～30g/L+琼脂6.0g/L，pH为5.8。上述步骤(2)所述的增殖培养基为：MS+6-BA1.0～2.0mg/L+NAA0.5～1.0mg/L+蔗糖25～30g/L+琼脂6.0g/L，pH为5.8。上述步骤(3)所述的生根培养基为：1/2MS+NAA0.5～1.0mg/L+IBA0.5～1.0mg/L+蔗糖15～30g/L+琼脂6.0g/L，pH为5.8。与现有技术相比本专利技术的优点是：本专利技术通过植物组织培养技术短时间内快速获得大量欧月优良品种的方法。以欧月带芽茎段为外植体，经过芽诱导、芽增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等过程实现了欧月的离体再生，为其大量选育、快速繁殖、新品种推广提供技术支持。具体实施方式以下实施例是对本专利技术的进一步说明，不是对本专利技术的限制。本专利技术进行实验的欧月品种为真宙。实施例1：(1)芽诱导培养：以欧月经典品种--真宙半木质化茎段作为外植体，剪去叶片，切成2～3cm长的带有2～3个腋芽的茎段，先用洗衣粉溶液浸泡5min，再用软毛刷轻轻刷洗外植体表将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗1h后置于超净工作台中，先用75％乙醇消毒30s后用无菌水洗3次，再用0.1％升汞溶液消毒8min，用无菌水冲洗4次再用无菌滤纸吸干表面的水后接种到芽诱导培养基进行芽诱导，接种后先在25℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照10小时，光照强度为1500lx条件下培养30天，芽诱导率为75.0％。所述的芽诱导培养基为：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.15mg/L+蔗糖25g/L+琼脂6.0g/L，pH为5.8。(2)增殖培养：将步骤(1)培养得到的生长健壮的带芽茎段剪切后转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25℃条件下全暗培养5天，然后置于每天光照10小时，光照强度为1500lx，置于培养温度为25℃的条件下培养30天后观察生长情况和芽增殖情况，经多次反复切割芽体进行继代培养，新生芽体生长健壮，增殖系数为4.68。所述的增殖培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+蔗糖25g/L+琼脂6.0g/L，pH为5.8。(3)生根培养：将步骤(1)或(2)过程获得的高度约为2.5～4.0cm、生长良好的不定芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在28℃条件下全暗培养1天，然后置于每天光照11小时，光照强度为2000lx，培养温度为25℃的条件下培养1个月后统计生根情况，生根率为86％。所述的生根培养基为：1/2MS+NAA0.5mg/L+IBA0.51mg/L+蔗糖15g/L+琼脂6g/L，pH为5.8。(4)炼苗移栽：将步骤(3)获得的高约4～6cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗5天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土∶珍珠岩和蛭石＝3∶2∶1混合成的基质穴盘，置于光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度。待幼苗成活后再移栽大田，移栽成活率为76％。实施例2：(1)芽诱导培养：以欧月经典品种--真宙半木质化茎段作为外植体，剪去叶片，切成2～3cm长的带有2～3个腋芽的茎段，先用洗衣粉溶液浸泡6.5min，再用软毛刷轻轻刷洗外植体表将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗1.5h后置于超净工作台中，先用75％乙醇消毒45s后用无菌水洗4次，再用0.1％升汞溶液消毒9min，用无菌水冲洗5次再用无菌滤纸吸干表面的水后接种到芽诱导培养基进行芽诱导，接种后先在26℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照11小时，光照强度为2000lx条件下培养30天，芽诱导率为80.0％。所述的芽诱导培养基为：MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.15mg/L+蔗糖25g/L+琼脂6.0g/L，pH为5.8。(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种欧月组织培养方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一芽诱导培养：以欧月经典品种一真宙半木质化茎段作为外植体，剪去叶片，切成2～3cm长的带有2～3个腋芽的茎段，先用洗衣粉溶液浸泡5～8min，再用软毛刷轻轻刷洗外植体表将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗1～2h后置于超净工作台中，先用75％乙醇消毒30～60s后用无菌水洗3～5次，再用0.1％升汞溶液消毒8～10min，用无菌水冲洗4～6次再用无菌滤纸吸干表面的水后接种到芽诱导培养基进行芽诱导，接种后先在25～28℃条件下全暗培养5～7天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为1500～2500lx条件下培养30天，统计其芽诱导率及生长情况；步骤二增殖培养：将步骤一培养得到的生长健壮的带芽茎段剪切后转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养5～7天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为1500～2500lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养30天后观察生长情况和芽增殖情况，多次反复切割芽体进行继代培养，以得到更多的丛生芽；步骤三生根培养：将步骤一或步骤二过程获得的高度约为2.5～4.0cm、生长良好的不定芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后置于每天光照11～12小时，光照强度为2000～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养1个月后统计生根情况；步骤四炼苗移栽：将步骤四获得的高约4～6cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗5～7天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土∶珍珠岩和蛭石＝3∶2∶1混合成的基质穴盘，置于光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度，待幼苗成活后再移栽大田。...

【技术特征摘要】
1.一种欧月组织培养方法，其特征在于包括以下步骤：步骤一芽诱导培养：以欧月经典品种一真宙半木质化茎段作为外植体，剪去叶片，切成2～3cm长的带有2～3个腋芽的茎段，先用洗衣粉溶液浸泡5～8min，再用软毛刷轻轻刷洗外植体表将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗1～2h后置于超净工作台中，先用75％乙醇消毒30～60s后用无菌水洗3～5次，再用0.1％升汞溶液消毒8～10min，用无菌水冲洗4～6次再用无菌滤纸吸干表面的水后接种到芽诱导培养基进行芽诱导，接种后先在25～28℃条件下全暗培养5～7天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为1500～2500lx条件下培养30天，统计其芽诱导率及生长情况；步骤二增殖培养：将步骤一培养得到的生长健壮的带芽茎段剪切后转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养5～7天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为1500～2500lx，置于培养温度为25～28℃的条件下培养30天后观察生长情况和芽增殖情况，多次反复切割芽体进行继代培养，以得到更多的丛生芽；步骤三生根培养：将步骤一或步骤二过程获得的高度约为2.5～4.0cm、生长良好的不定芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养1～3天，然后...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙桂梅，于杰，于丽，高萌萌，孙伟，王洪钰，于福满，
申请(专利权)人：天津创世生态景观建设股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12