The invention discloses a hydrogel embedding method for biological tissue which can be imaged by continuous fine cutting for a long time. The method includes: pretreatment of tissue, mixing NAGA monomer with crosslinking agent, initiator and solvent to obtain hydrogel solution; permeation treatment of the pretreated tissue in the hydrogel solution; polymerization of the permeated tissue in the hydrogel solution; Biological tissues are imaged on imaging systems. The method provided by the invention is simple in operation, does not require dehydration treatment of biological tissue in the use process, does not cause tissue deformation, and can preserve the fluorescence of biological tissue. The invention explores and establishes the embedding formula and process, so that the embedded tissue has certain mechanical strength, and can be used for long-term continuous three-dimensional cutting imaging of biological tissue samples.
【技术实现步骤摘要】
一种可长时间连续精细切削成像的生物组织水凝胶包埋方法
本专利技术涉及一种生物医学领域，尤其涉及一种可长时间连续精细切削成像的生物组织水凝胶包埋方法。
技术介绍
荧光显微成像是我们获取生物体荧光标记信息的有效途径。在神经科学领域，荧光蛋白通常被用在转基因技术和病毒标记技术上来示踪神经环路或标记神经元的完整形态，以及其它一些生物学问题的研究如胞体计数等。但组织自身的高散射使得光穿透深度降低，这严重限制了我们对大体积生物组织完整信号的探测。光学成像方法结合物理切削可以部分的解决光散射的问题，使得大体积生物组织完整信号的获取成为可能，很多样本制备方法也同时得以发展。比如琼脂包埋，树脂包埋，石蜡包埋等。然而琼脂无法进入生物组织内部，不能填充脑室等组织内部空隙对其进行支撑，组织容易引起塌陷，且生物组织样本长时间浸泡在水溶液中其荧光会逐渐损失。树脂包埋适合于超薄切片或um切片获取神经元精细结构，虽然其能有效的保存绿色荧光蛋白荧光，但对红色荧光蛋白荧光保存较差，且其样本处理时间较长，脱水和树脂聚合环节使得生物组织形态出现一定的形变，虽然能在后期通过图像处理进行部分的校正，但费时费...
【技术保护点】
1.一种可长时间连续精细切削成像的生物组织水凝胶包埋方法，其特征在于，包括：将组织进行预处理；将NAGA单体与交联剂、引发剂、溶剂混合得到水凝胶溶液；将所述预处理后的组织在所述水凝胶溶液中进行渗透处理；将渗透后的组织在所述水凝胶溶液中聚合；将聚合后的生物组织在成像系统上成像。
【技术特征摘要】
1.一种可长时间连续精细切削成像的生物组织水凝胶包埋方法，其特征在于，包括：将组织进行预处理；将NAGA单体与交联剂、引发剂、溶剂混合得到水凝胶溶液；将所述预处理后的组织在所述水凝胶溶液中进行渗透处理；将渗透后的组织在所述水凝胶溶液中聚合；将聚合后的生物组织在成像系统上成像。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述将组织进行预处理具体为：提供生物组织；将所述组织进行PFA后固定，PBS漂洗。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述NAGA单体占体系的质量百分比为5％-50％。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述交联剂选自水溶性交联剂N,N-亚甲基双丙烯酰胺，乙二醇二甲基丙烯酸酯。5.根据权利要求4所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：李向宁，龚辉，周灿，骆清铭，
申请(专利权)人：华中科技大学苏州脑空间信息研究院，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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