一种波长转移分子信标同时检测两种miRNA的方法技术

本公开涉及一种利用波长转移分子信标同时检测两种miRNA的方法。利用DNA自组装技术构建DNA纳米结构，并基于荧光共振能量转移(FRET)原理，在同一激发波长下实现两种miRNA的同时检测，具有操作简便、特异性好、灵敏度高等优点。作为一种高效的生物分子检测平台，该体系有望应用于癌症等重大疾病的早期诊断和治疗。

A Wavelength Transfer Molecular Beacon Method for Simultaneous Detection of Two MicroRNAs

The present disclosure relates to a method for simultaneously detecting two kinds of microRNAs using a wavelength transfer molecular beacon. Using DNA self-assembly technology to construct DNA nanostructures and based on the principle of fluorescence resonance energy transfer (FRET), the simultaneous detection of two kinds of microRNAs at the same excitation wavelength has the advantages of simple operation, good specificity and high sensitivity. As an efficient biomolecular detection platform, the system is expected to be applied to the early diagnosis and treatment of major diseases such as cancer.

【技术实现步骤摘要】
一种波长转移分子信标同时检测两种miRNA的方法
本公开涉及一种波长转移分子信标同时检测两种miRNA的方法，属于生物分子检测领域。
技术介绍
这里的陈述仅提供与本公开有关的背景信息，而不必然构成现有技术。MicroRNA(miRNA)是一类长度约为18-25个核苷酸的非编码内源性单链RNA分子，它通过与靶mRNA特异性的碱基互补配对，引起靶mRNA的降解或者抑制其翻译，从而实现对靶基因转录后的调控。长期以来，癌症一直是危害人类健康的一大杀手，但目前仍缺乏理想的诊断方法。因此，开发高效的生物检测技术对癌症的早期诊断和治疗具有重要意义。当细胞出现癌变时，某些miRNA会出现异常表达，包括表达上调和表达下调。实现多种miRNA的同时分析对于癌症的早期诊断尤为重要。传统的miRNA定量检测通常采用PCR等扩增方法，PCR虽然具有较高的检测灵敏度，但同时具有成本高、操作复杂、检测耗时长等缺点。因此，建立一种灵敏度高、所需样品量少、分析速度快、操作简便的分析方法实现多种miRNA的同时检测在生化分析和癌症诊疗等领域具有重要的研究意义和广阔的应用前景。
技术实现思路
针对
技术介绍
，本专利技术通过DN本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测待测样本中两种目标miRNA含量的试剂盒，该试剂盒至少包括：DNA发夹链一、DNA发夹链二和连接链；从5'至3'端，所述DNA发夹链一包括依次连接的a片段、b片段、c片段、b*片段和f片段，所述a片段上修饰荧光基团F2；DNA发夹链二包括依次连接的a片段、e片段、d片段、e*片段和f片段，所述a片段上修饰荧光基团F3；连接链包括依次连接的f*片段和a*片段，所述连接链的5'端修饰荧光基团F1，3'端修饰猝灭基团Q；其中，b片段和b*片段以及e片段和e*片段碱基互补形成茎部，c片段和d片段分别作为环部，c片段与其中一种目标miRNA碱基互补，d片段与另外一种目标miRNA碱基互补，a...

【技术特征摘要】
1.一种检测待测样本中两种目标miRNA含量的试剂盒，该试剂盒至少包括：DNA发夹链一、DNA发夹链二和连接链；从5'至3'端，所述DNA发夹链一包括依次连接的a片段、b片段、c片段、b*片段和f片段，所述a片段上修饰荧光基团F2；DNA发夹链二包括依次连接的a片段、e片段、d片段、e*片段和f片段，所述a片段上修饰荧光基团F3；连接链包括依次连接的f*片段和a*片段，所述连接链的5'端修饰荧光基团F1，3'端修饰猝灭基团Q；其中，b片段和b*片段以及e片段和e*片段碱基互补形成茎部，c片段和d片段分别作为环部，c片段与其中一种目标miRNA碱基互补，d片段与另外一种目标miRNA碱基互补，a片段和a*片段、f片段和f*片段碱基互补；其中，荧光基团F1的发射光谱与荧光基团F2或F3的激发光谱部分重叠。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征是，所述目标miRNA为miRNA-21和miRNA-203；进一步的，DNA发夹链一的序列为5'-GCCCGAATCACCT-TAMRA-CCGCGTCAACATCAGTCTGATAAGCTACGCGGACCTACCCGACCG-3'，如SEQIDNO.1，DNA发夹链二的序列为5'-GCCCGAATCACCT-TexasRed-CGCGCCGCTAGTGGTCCTAAACATTTCACCGGCGCGACCTACCCGACCG-3'，如SEQIDNO.2，连接链的序列为5'-GGTGATTCGGGCCGGTCGGGTAGG-3'，如SEQIDNO.3。3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征是，所述荧光基团F1为FAM，荧光基团F2为TAMRA，荧光基团F3为TexasRed，猝灭基团Q为Dabcyl。4.一种线性DNA大分子结构，其特征是，是由权利要求1所述DNA发夹链一、DNA发夹链二和连接链自组装而成。5.权利要求4所述的线性DNA大分子结构的制备方法，其特征是，该方法包括：将DNA发夹链一、DNA发夹链二和连接链混合反应，即可自组装形成线性DNA大分子结构。6.如权利要求5所述的制备方法，其特征是，具体的方法包括：将DNA发夹链一、DNA发夹链二进行退火处理，冷却稳定，然后将设定比例的DNA发夹链一、DNA发夹链二和连接链混合，孵育，得到线性DNA大分子结构；进一步的，所述方法包括：核酸的配制：分别将DNA发夹链一、DNA发夹链二、连接链、miRNA-21以及miRNA-203用TE缓冲液稀释至10μM；DNA发夹链一、DNA发夹链二退火处理：将稀释后的DNA发夹链一、DNA发夹链二加热至95℃运行5min，随后以0.1℃/s冷却至25℃，并在25℃下继续稳定2h；自组装过程：将退火处理后的DN...

【专利技术属性】
技术研发人员：毕赛，李昱伟，齐洪杰，李娟，
申请(专利权)人：青岛大学，
类型：发明
国别省市：山东,37