The invention relates to a luminescent system for screening ribonuclease and its inhibitors, a preparation method and application. It is a kind of gold nanoclusters with good biocompatibility and red light. The gold nanoclusters are prepared from chloroauric acid (HAuCl4) under mild conditions with ribonucleic acid (RNA) and mercaptoundecanoic acid as microenvironment and ascorbic acid as mild reductant. It emits bright red fluorescence with a wavelength of 630 nm. In this system, if there are ribonucleic acid shearing enzymes (such as RNase A), the structure of ribonucleic acid is destroyed, gold nanoclusters can not be formed, or the luminescence intensity is weak, thus achieving the purpose of qualitative and quantitative determination of ribonuclease activity. This system can also be used for screening ribonuclease inhibitors. The preparation conditions of gold nanoclusters are as follows: the volume ratio of chloroauric acid, ribonucleic acid, ascorbic acid and mercaptoundecanoic acid is 0.8 1.2 6 10:8 15:0.8 1.2. Qualitative and quantitative detection of ribonuclease can be achieved by the luminescence intensity of the luminescent system. The quantitative detection range is 0-2.5*10.
【技术实现步骤摘要】
一种核糖核酸酶及其抑制剂筛选的发光体系,制备方法及其应用
专利技术涉及到一种特异性检测核糖核酸酶(如RNaseA)及其抑制剂筛选的光化学方法,属于生物大分子酶活性检测及酶抑制剂筛选领域。
技术介绍
金纳米簇(AuNCs)是由几十到几百个金原子组成的新型纳米发光材料,近年来,金纳米簇因其独特的物理、化学性质获得了许多科研人员的青睐,在生物成像、化学传感等领域,表现出了较好的水溶性、低毒性、生物相容性、大的stocks位移等优势,具有广阔的应用前景。早期,金纳米簇制备是在硫醇化合物、聚乙烯亚胺、聚酰氨-胺等保护或辅助下实现的,但是这些方法得到的金纳米簇发射蓝色荧光,在生物应用上的组织穿透能力远不如红色或者近红外发射的金纳米簇。为了得到发红色荧光的金纳米簇,在制备时通常会选用蛋白、多肽、DNA等生物大分子等作为模板。生物大分子与金纳米簇的结合不仅为纳米簇提供了配体,更提高了系统的光稳定性和生物相容性。2009年Xie等首次以BSA为配体成功合成了金纳米簇,其中BSA同时做为稳定剂与还原剂。这种BSA-AuNCs除了具备良好的生物相容性和环境/成本优势之外,还能促进功能配体的表面修饰。之后,BSA-AuNCs在各方面的应用在被广泛报道,如检测焦磷酸盐、多巴胺、孔雀石绿、碱性磷酸酶等。Song和Gu等以多肽为模板和还原剂合成了多肽-AuNCs,并运用于蛋白酶活性检测。但是以核酸为模板进行金纳米簇制备时,核酸并不能使Au3+直接被还原,往往需要借助光、抗坏血酸等还原剂。Tseng等以A30寡核苷酸单链为模板用紫外光辅助的方法制备了金纳米簇,Qing等以单链DNA为模板 ...
【技术保护点】
1.一种核糖核酸酶及其抑制剂筛选的发光体系,其特征在于,该体系是由核糖核酸RNA为载体制备得到的金纳米簇,体系发出亮红色荧光,发光波长625‑635 nm,保存期为10天以上。
【技术特征摘要】
1.一种核糖核酸酶及其抑制剂筛选的发光体系,其特征在于,该体系是由核糖核酸RNA为载体制备得到的金纳米簇,体系发出亮红色荧光,发光波长625-635nm,保存期为10天以上。2.根据权利要求1所述的核糖核酸酶及其抑制剂筛选的发光体系的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:在蒸馏水中加入氯金酸与核糖核酸,混合均匀,在30-40℃下水浴8-15分钟后,缓慢加入抗坏血酸,搅拌还原反应3-5h,得到混合溶液;然后向该混合溶液中加入巯基十一酸,继续搅拌25-35min,离心,得到上清液即为金纳米簇。3.根据权利要求2所述的核糖核酸酶及其抑制剂筛选的发光体系的制备方法,其特征在于,氯金酸、核糖核酸、抗坏血酸、巯基十一酸的体积比为0.8-1.2:6-10:8-...
【专利技术属性】
技术研发人员:杨昌英,杜金娅,刘含,龚玲俐,陆爽,
申请(专利权)人:三峡大学,
类型:发明
国别省市:湖北,42
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